大腸桿菌內毒素

大腸桿菌內毒素

大腸桿菌內毒素(endotoxin),本試劑盒用於測定大腸桿菌樣本中內毒素(endotoxin)含量。

檢測範圍


96T 0.03Eu/L–0.8Eu/L
【使用目的】
本試劑盒用於測定大腸桿菌樣本中內毒素(endotoxin)含量。

實驗原理


本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大腸桿菌內毒素(endotoxin)水平。用純化的大腸桿菌內毒素(endotoxin)抗體包被微孔板,製成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入內毒素(endotoxin),再與HRP標記的內毒素(endotoxin)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內毒素(endotoxin)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大腸桿菌內毒素(endotoxin)濃度。

試劑盒組成


130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(1.6Eu/L)0.5ml×1瓶
3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

標本要求


1.標本採集后儘早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於-20℃保存,但應避免反覆凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟


1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
0.8Eu/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
0.4Eu/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.2Eu/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.1Eu/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.05Eu/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重複5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作程序總結


計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項


1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期


1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月