熒光測定

利用熒光分析法對被分析物質進行濃度測定，最簡單的便是直接測定法。某些物質只要本身能發熒光，只須將含這類物質的樣品作適當的前處理或分離除去干擾物質，即可通過測量它的熒光強度來測定其濃度。具體方法有兩種。

1. 直接比較法：配製標準溶液的熒光強度Fx，已知標準溶液的濃度Cs，便可求得樣品中待測熒光物質的含量。

如果空白溶液的熒光強度調不到零，則必須從Fs和Fx值中扣除空白溶液的熒光強度F0，然後進行計算。

2. 標準曲線法：將已知含量的標準品經過和樣品同樣處理后，配成一系列標準溶液，測定其熒光強度，以熒光強度對熒光物質含量繪製標準曲線。再測定樣品溶液的熒光強度，由標準曲線便可求出樣品中待測熒光物質的含量。

為了使各次所繪製的標準曲線能重合一致，每次應以同一標準溶液對儀器進行校正。如果該溶液在紫外光照射下不夠穩定，則必須改用另一種穩定而熒光峰相近的標準溶液來進行校正。例如，測定維生素B1時，可用硫酸奎寧溶液作為基準校正儀器。

有許多物質，它們本身不能發熒光，或者熒光量子產率很低，僅能顯現非常微弱的熒光，無法直接測定，這時可採用間接測定方法。

間接測定方法有以下幾種：

1.化學轉化法：通過化學反應將非熒光物質變為適合於測定的熒光物質。例如金屬與螯合劑反應生成具有熒光的螯合物。有機化合物可通過光化學反應、氧化還原、偶聯、縮合反等應，使它們轉化為熒光物質。

2.熒光猝滅法：這種方法是利用本身不發熒光的被分析物質能使某種熒光化合物的熒光猝滅的性質，通過測量熒光化合物熒光強度的下降，間接地測定該物質的濃度。

3.敏化發光法：對於很低濃度的分析物質，如果採用一般的熒s光測定方法，其熒光信號太弱而無法檢測，可使用一種物質（敏化劑）以吸收激發光，然後將激發光能傳遞給發熒光的分析物質，從而提高被分析物質測定的靈敏度。

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