逆轉錄－聚合酶鏈反應
逆轉錄-聚合酶鏈反應
逆轉錄-聚合酶鏈反應的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，採用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。
目錄
1. 在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂2. 為了防止非特異性擴增，必須設陰性對照。3. 內參的設定：主要為了用於靶RNA的定量。常用的內參有G3PD(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)、β-Actin(β-肌動蛋白)等。其目的在於避免RNA定量誤差、加樣誤差以及各PCR反應體系中擴增效率不均一各孔間的溫度差等所造成的誤差。