氨基醯－tRNA合成酶（amin thetase），氨基醯-tRNA合成酶催化生成氨基醯-tRNA，每個氨基酸活化需要兩個高能磷酸鍵。此過程分兩步，首先，氨基酸結合於AMP酶，消耗ATP形成中間產物，其次，才生成氨基醯-tRNA。
氨基醯－tRNA合成酶（aminoacyl-
tRNA synthetase），氨基醯－tRNA的生成，實際上是一種酶促的
化合反應，催化這一化學反應的酶是氨基醯－tRNA合成酶。此化學反應又可分為兩個步驟完成：第一步是氨基酸結合於AMP－酶的複合體上，完成了酶對氨基酸的特異性識別；第二步是AMP－酶被tRNA置換，形成氨基醯－tRNA，從而完成了酶對tRNA的特異性識別。這說明氨基醯－tRNA合成酶具有
絕對專一性，酶對氨基酸、tRNA兩種底物都能高度特異地識別。