分子生物學實驗

材山東大學長期以來的實驗教學經驗的總結。內容包括染色體DNA和RNA的製備、載體的製備、重組質粒的構建、重組DNA導入受體細胞、外源基因的表達和重組子的鑒定、在釀酒酵母中克隆表達外源基因等內容。適於高等學校生命科學相關專業的學生使用，也可供相關科研人員參考之用。

章 驗技術概述

章 染製備

實驗2.1 細菌染色體DNA的提取

實驗2.2 酵母染色體DNA的提取

實驗2.3 SDS裂解法提取絲狀真菌染色體DNA

實驗2.4 RNA的提取

實驗2、5 凝膠電泳進行DNA分離純化

實驗2.6 核酸純度、濃度與相對分子質量的測定

第3章 載體的製備

實驗3.1 質粒DNA的提取——鹼變性提取法

實驗3.2 朧刪錎NA的提取

實驗3.3 隓NA去磷酸化臂的製備

第4章 重組質粒的構建

實驗4.1 限制性核酸內切酶的酶切反應

實驗4.2 酶切DNA片段的CIP處理

實驗4.3 酶切DNA片段的分離與回收

實驗4.4 載體與外源DNA的連接反應

第5章 重組DNA導入受體細胞

實驗5.1 感受態細胞的製備及質粒轉化

實驗5.2 朧刪逶靨逵臚庠碊NA片段的連接、體外包裝與擴增（基因組文庫的構建）

第6章 重組子的鑒定和外源基因的表達

實驗6.1 E.coli轉化子的篩選與驗證

實驗6.2 Southern印跡雜交

實驗6.3 Northern印跡雜交

實驗6.4 斑點印跡雜交

實驗6.5 外源基因的誘導表達

實驗6.6 變性聚丙烯醯胺凝膠電泳檢測重組蛋白的表達

實驗6.7 Western印跡技術檢測重組蛋白的表達

第7章 在釀酒酵母中克隆表達外源基因

實驗7.1 酵母染色體DNA的提取

實驗7.2 木糖還原酶基因的獲得

實驗7.3 重組質粒的構建（酶切連接）

實驗7.4 酵母質粒的小量提取與插人方向驗證

實驗7.5酵母菌LiAc完整轉化酵母細胞

實驗7.6釀酒酵母轉化子的驗證

實驗7.7重組酵母木糖還原酶活性的測定

實驗7.8重組酵母菌株發酵實驗及發酵產物分析

第8章 絲狀真菌的轉化與轉化子的篩選

實驗8.1 瑞氏木霉原生質體的製備與轉化實驗

實驗8.2 瑞氏木霉原生質體電轉化實驗

實驗8.3 農桿菌介導的瑞氏木霉轉化

實驗8.4 振蕩破壁法快速小量提取瑞氏木霉染色體DNA

實驗8.5 瑞氏木霉潮黴素抗性轉化子的PCR鑒定

第9章 PCR技術原理與應用

實驗9.1 PCR擴增目的片段

實驗9.2 一步法RT-PCR

實驗9.3 兩步法RT-PCR

第10章 工程菌的培養與目標產物的分離

實驗10.1 重組E.coli誘導表達外源內切B-1，4-葡聚糖酶

實驗10.2 從E.coli中提取純化目的重組蛋白

附錄