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肽核酸

多肽骨架取代糖磷酸的DNA類似物

肽核酸,一類以多肽骨架取代糖磷酸主鏈的DNA類似物,是丹麥有機化學家 Ole Buchardt和生物化學家 Peter Nielsen 於20 世紀80 年代開始潛心研究的一種新的核酸序列特異性試劑。它是在第一代、第二代反義試劑的基礎上,通過計算機設計構建並最終人工合成的第三代反義試劑,是一種全新的DNA類似物,即以中性的肽鏈醯胺2-氨基乙基甘氨酸鍵取代了DNA中的戊糖磷酸二酯鍵骨架,其餘的與DNA相同,PNA可以通過Watson-Crick鹼基配對的形式識別並結合DNA或RNA序列,形成穩定的雙螺旋結構。

基本定義


肽核酸(peptide nucleic acids,PNA),由於PNA不帶負電荷,與DNA和RNA之間不存在靜電斥力,因而結合的穩定性和特異性都大為提高;不同於DNA或DNA、RNA間的雜交,PNA與DNA或RNA的雜交幾乎不受雜交體系鹽濃度影響,與DNA或RNA分子的雜交能力遠優於DNA/DNA或DNA/RNA,表現在很高的雜交穩定性、優良的特異序列識別能力、不被核酸酶蛋白酶水解。並可以與配基相連共轉染進入細胞。這些都是其他寡核苷酸所不具備的優點。鑒於上述諸多DNA分子不具備的優點,近十年來,人們為其在許多高技術領域找到了用途。

結合方式


肽核酸與DNA/RNA主要有 4 種結合方式:
1 、標準的多聚嘌呤 PNA 入侵雙鏈DNA
2、PNA 雙重雙鏈入侵,形成穩定的複合物,但只能發生在含有修飾鹼基的 PNA 分子上;
3、傳統的三鏈體結構,由富含胞嘧啶的多聚嘧啶 PNA 與互補的多聚嘌呤DNA 靶標結合;
4、穩定的三鏈體入侵複合物,導致右側被取代的DNA 單鏈形成D環結構。

主要特點


根據PNA的代謝穩定性,主要將其用於抑制基因表達的反義藥物研究領域,國外幾家製藥及生物技術公司,ISIS、PE等公司均投入大量精力從事開發研究;根據其與DNA優良的雜交穩定性,PNA又被廣泛用於DNA分子識別和操縱。PNA可以廣泛用於病原體、遺傳病檢測的分子雜交、原位雜交、突變分析、抗癌、抗病毒反義核酸研究和應用。尤其是PNA可以取代寡核苷酸用於基因晶元的製備,將比普通基因晶元更穩定,特異性也更好,被認為是基因晶元的升級產品,相信在臨床診斷晶元的開發方面。PNA也可用於定量PCR,可以用於實時檢測PCR的擴增反應;也可將其做成PNA Beacon,用於實時監測細胞內的RNA表達。隨著PNA基礎研究的不斷深入和新技術的不斷出現,PNA將顯示出無比優越的性能和更為廣闊的應用前景。