拉曼光譜

拉曼散射的光譜。1928年C.V.拉曼實驗發現，當光穿過透明介質被分子散射的光發生頻率變化，這一現象稱為拉曼散射，同年稍後在蘇聯和法國也被觀察到。在透明介質的散射光譜中，頻率與入射光頻率υ0相同的成分稱為瑞利散射；頻率對稱分佈在υ0兩側的譜線或譜帶υ0±υ1即為拉曼光譜，其中頻率較小的成分υ0－υ1又稱為斯托克斯線，頻率較大的成分υ0＋υ1又稱為反斯托克斯線。靠近瑞利散射線兩側的譜線稱為小拉曼光譜；遠離瑞利線的兩側出現的譜線稱為大拉曼光譜。

瑞利散射線的強度只有入射光強度的10-3，拉曼光譜強度大約只有瑞利線的10-3。小拉曼光譜與分子的轉動能級有關，大拉曼光譜與分子振動-轉動能級有關。拉曼光譜的理論解釋是，入射光子與分子發生非彈性散射，分子吸收頻率為υ0的光子，發射υ0－υ1的光子，同時分子從低能態躍遷到高能態（斯托克斯線）；分子吸收頻率為υ0的光子，發射υ0＋υ1的光子，同時分子從高能態躍遷到低能態（反斯托克斯線）。

分子能級的躍遷僅涉及轉動能級，發射的是小拉曼光譜；涉及到振動-轉動能級，發射的是大拉曼光譜。與分子紅外光譜不同，極性分子和非極性分子都能產生拉曼光譜。激光器的問世，提供了優質高強度單色光，有力推動了拉曼散射的研究及其應用。拉曼光譜的應用範圍遍及化學、物理學、生物學和醫學等各個領域，對於純定性分析、高度定量分析和測定分子結構都有很大價值。

光照射到物質上發生彈性散射和非彈性散射. 彈性散射的散射光是與激發光波長相同的成分，非彈性散射的散射光有比激發光波長長的和短的成分, 統稱為喇曼效應。

喇曼效應起源於分子振動（和點陣振動）與轉動，因此從喇曼光譜中可以得到分子振動能級(點陣振動能級)與轉動能級結構的知識。用虛的上能級概念可以說明了喇曼效應：

設散射物分子原來處於基電子態，振動能級如圖所示。當受到入射光照射時，激發光與此分子的作用引起的極化可以看作為虛的吸收，表述為電子躍遷到虛態（Virtual state），虛能級上的電子立即躍遷到下能級而發光，即為散射光。設仍回到初始的電子態，則有如圖所示的三種情況。因而散射光中既有與入射光頻率相同的譜線，也有與入射光頻率不同的譜線，前者稱為瑞利線，後者稱為喇曼線。在喇曼線中，又把頻率小於入射光頻率的譜線稱為斯托克斯線，而把頻率大於入射光頻率的譜線稱為反斯托克斯線。

附加頻率值與振動能級有關的稱作大拉曼位移，與同一振動能級內的轉動能級有關的稱作小拉曼位移：

大拉曼位移：（為振動能級帶頻率）

小拉曼位移：（其中B為轉動常數）

簡單推導小拉曼位移：利用轉動常數

拉曼散射光譜具有以下明顯的特徵：

a.拉曼散射譜線的波數雖然隨入射光的波數而不同，但對同一樣品，同一拉曼譜線的位移與入射光的波長無關，只和樣品的振動轉動能級有關；

b. 在以波數為變數的拉曼光譜圖上，斯托克斯線和反斯托克斯線對稱地分佈在瑞利散射線兩側, 這是由於在上述兩種情況下分別相應於得到或失去了一個振動量子的能量。

c. 一般情況下，斯托克斯線比反斯托克斯線的強度大。這是由於Boltzmann分佈，處于振動基態上的粒子數遠大於處于振動激發態上的粒子數。

簡單解釋：按照波爾茲曼分佈律，處於激發態的分子數與處於正常態分子數之比是：其中g為該狀態下的簡併度。

可以解釋：溫度升高，反斯托克斯線的強度迅速增大，斯托克斯線強度變化不大轉動能級中，所以，由於較低和較高的轉動態都有顯著的布居，所以小拉曼位移兩組譜線(反斯托克斯線，斯托克斯線)強度差不多。

通過結構分析解釋光譜：

分子為四面體結構，一個碳原子在中心，四個氯原子在四面體的四個頂點。當四面體繞其自身的一軸旋轉一定角度，或記性反演(r—-r)、或旋轉加反演之後，分子的幾何構形不變的操作稱為對稱操作，其旋轉軸成為對稱軸。CCI4有13個對稱軸，有案可查4個對稱操作。我們知道，N個原子構成的分子有礙（3N—6）個內部振動自由度。因此分子可以有9個(3×5—6)自由度，或稱為9個獨立的簡正振動。根據分子的對稱性，這9種簡正振動可歸納成下列四類：

第一類，只有一種振動方式，4個氯原子沿與C原子的聯線方向作伸縮振動，記作，表示非簡併振動。

第二類，有兩種振動方式，相鄰兩對CI原子在與C原子聯線方向上，或在該聯線垂直方向上同時作反向運動，記作，表示二重簡併振動。

第三類，有三種振動方式，4個CI與C原子作反向運動，記作，表示三重簡併振動。

第四類，有三種振動方式，相鄰的一對CI原子作伸張運動，另一對作壓縮運動，記作，表示另一種三重簡併振動。

上面所說的“簡併”，是指在同一類振動中，雖然包含不同的振動方式但具有相同的能量，它們在拉曼光譜中對應同一條譜線。因此，分子振動拉曼光譜應有4個基本譜線，根據實驗中測得各譜線的相對強度依次為。苯的譜線也見附圖，分析類似，這裡不再贅述。

分析物質性質

通過對拉曼光譜的分析可以知道物質的振動轉動能級情況，從而可以鑒別物質，分析物質的性質。

天然雞血石和仿造雞血石的拉曼光譜有本質的區別：前者主要是地開石和辰砂的拉曼光譜，後者主要是有機物的拉曼光譜，利用拉曼光譜可以區別二者。圖中a是地（黑色），b是血（紅色）。

天然雞血石“地”的主要成分為地開石，天然雞血石樣品“血”既有辰砂又有地開石，實際上是辰砂與地開石的集合體。仿造雞血石“地”的主要成分是聚苯乙烯-丙烯腈，“血”與一種名為PermanentBordo的紅色有機染料的拉曼光譜基本吻合。

鑒別毒品

常見毒品均有相當豐富的拉曼特徵位移峰，且每個峰的信噪比較高，表明用拉曼光譜法對毒品進行成分分析方法可行，得到的譜圖質量較高。由於激光拉曼光譜具有微區分析功能，即使毒品和其它白色粉末狀物質混和在一起，也可以通過顯微分析技術對其進行識別，得到毒品和其它白色粉末分別的拉曼光譜圖。

利用拉滿光譜可以監測物質的製備：擔載型硫化鉬、硫化鎢催化劑是由相應的擔載型金屬氧化物在H2和H2S氣氛下程序升溫製得的，在工業上主要用作加氫精製催化劑。在這樣的工業條件下，二維表面金屬氧化物轉變為二維或三維金屬硫化物。與負載金屬氧化物相比，負載金屬硫化物的拉曼光譜研究相對較少，這是由於黑色的硫化物相對可見光的吸收較強，導致信號較弱。然而拉曼光譜能較易檢測到小的金屬硫化物微晶。

在380和450cm-1處出現兩個歸屬為晶相和的譜峰，而擔載型晶相硫化鉬的譜峰比晶相硫化鉬的譜峰寬得多。鈷助劑的加入導致硫化鉬的譜峰發生位移，強度減弱，這是由於相以及黑色的相的形成造成的。

監測水果表面殘留農藥

在處理好的水果表面撕取一小片果皮，在水果表面分別滴上一滴不同的農藥，農藥就會浸潤到果皮上。用吸水紙擦拭果皮上的農藥液體，然後把殘留有農藥的果皮壓入鋁片的小槽中，保證使殘留農藥的果皮表面呈現在鋁片小槽的外面，然後把壓出來的汁液用吸水紙擦拭乾凈。光譜如下:

不同種類的水果表面滴加植保博士后得到的拉曼譜（見左圖）。很明顯，除了水果原本的拉曼峰外，植保博士的特徵峰為993ｃｍ-1、1348ｃｍ-1、1591ｃｍ-1都出現了由於實驗中模擬農藥噴灑的方式比實際噴灑時的農藥量少得多，儘管如此，農藥的殘留仍然清晰地顯示出來，這表明這一方法是靈敏而適用的。定量地分析農藥殘留可以從農藥特徵譜線和水果特徵譜線的相對強度比獲得。

拉曼光譜儀一般由以下五個部分構成。

1．光源

它的功能是提供單色性好、功率大並且最好能多波長工作的入射光。目前拉曼光譜實驗的光源己全部用激光器代替歷史上使用的汞燈。對常規的拉曼光譜實驗，常見的氣體激光器基本上可以滿足實驗的需要。在某些拉曼光譜實驗中要求入射光的強度穩定，這就要求激光器的輸出功率穩定。

2．外光路

外光路部分包括聚光、集光、樣品架．濾光和偏振等部件。

(1) 聚光：用一塊或二塊焦距合適的會聚透鏡，使樣品處於會聚激光束的腰部，以提高樣品光的輻照功率，可使樣品在單位面積上輻照功率比不用透鏡會聚前增強105倍。

(2) 集光：常用透鏡組或反射凹面鏡作散射光的收集鏡。通常是由相對孔徑數值在1左右的透鏡組成。為了更多地收集散射光，對某些實驗樣品可在集光鏡對面和照明光傳播方向上加反射鏡。

(3) 樣品架：樣品架的設計要保證使照明最有效和雜散光最少，尤其要避免入射激光進入光譜儀的入射狹縫。為此，對於透明樣品，最佳的樣品布置方案是使樣品被照明部分呈光譜儀入射狹縫形狀的長圓柱體，並使收集光方向垂直於入射光的傳播方向。幾種典型樣品架的空間配置參見右圖。

(4) 濾光：安置濾光部件的主要目的是為了抑制雜散光以提高拉曼散射的信噪比。在樣品前面，典型的濾光部件是前置單色器或干涉濾光片，它們可以濾去光源中非激光頻率的大部分光能。小孔光欄對濾去激光器產生的等離子線有很好的作用。在樣品後面，用合適的干涉濾光片或吸收盒可以濾去不需要的瑞利線的一大部分能量，提高拉曼散射的相對強度。

(5) 偏振：做偏振譜測量時，必須在外光路中插入偏振元件。加入偏振旋轉器可以改變入射光的偏振方向；在光譜儀入射狹縫前加入檢偏器，可以改變進入光譜儀的散射光的偏振；在檢偏器後設置偏振擾亂器，可以消除光譜儀的退偏干擾。

3．色散系統

色散系統使拉曼散射光按波長在空間分開，通常使用單色儀。由於拉曼散射強度很弱，因而要求拉曼光譜儀有很好的雜散光水平。各種光學部件的缺陷，尤其是光柵的缺陷，是儀器雜散光的主要來源。當儀器的雜散光本領小於10-4時，只能作氣體、透明液體和透明晶體的拉曼光譜。

4．接收系統

拉曼散射信號的接收類型分單通道和多通道接收兩種。光電倍增管接收就是單通道接收。

5．信息處理與顯示

為了提取拉曼散射信息，常用的電子學處理方法是直流放大、選頻和光子計數，然後用記錄儀或計算機介面軟體畫出圖譜。

提供快速、簡單、可重複、且更重要的是無損傷的定性定量分析，它無需樣品準備，樣品可直接通過光纖探頭或者通過玻璃、石英、和光纖測量。

1 由於水的拉曼散射很微弱，拉曼光譜是研究水溶液中的生物樣品和化學化合物的理想工具。

2 拉曼一次可以同時覆蓋50-4000波數的區間，可對有機物及無機物進行分析。相反，若讓紅外光譜覆蓋相同的區間則必須改變光柵、光束分離器、濾波器和檢測器

3 拉曼光譜譜峰清晰尖銳，更適合定量研究、資料庫搜索、以及運用差異分析進行定性研究。在化學結構分析中，獨立的拉曼區間的強度可以和功能集團的數量相關。

4 因為激光束的直徑在它的聚焦部位通常只有0.2-2毫米，常規拉曼光譜只需要少量的樣品就可以得到。這是拉曼光譜相對常規紅外光譜一個很大的優勢。而且，拉曼顯微鏡物鏡可將激光束進一步聚焦至20微米甚至更小，可分析更小面積的樣品。

5 共振拉曼效應可以用來有選擇性地增強大生物分子特個發色基團的振動，這些發色基團的拉曼光強能被選擇性地增強1000到10000倍。

拉曼光譜用於分析的不足

(1)拉曼散射面積

(2)不同振動峰重疊和拉曼散射強度容易受光學系統參數等因素的影響

(3)熒光現象對傅立葉變換拉曼光譜分析的干擾

(4)在進行傅立葉變換光譜分析時，常出現曲線的非線性的問題

(5)任何一物質的引入都會對被測體體系帶來某種程度的污染，這等於引入了一些誤差的可能性，會對分析的結果產生一定的影響

1、電化學原位拉曼光譜法

電化學原位拉曼光譜法，是利用物質分子對入射光所產生的頻率發生較大變化的散射現象, 將單色入射光(包括圓偏振光和線偏振光) 激發受電極電位調製的電極表面, 通過測定散射回來的拉曼光譜信號(頻率、強度和偏振性能的變化)與電極電位或電流強度等的變化關係。一般物質分子的拉曼光譜很微弱, 為了獲得增強的信號, 可採用電極表面粗化的辦法, 可以得到強度高104-107倍的表面增強拉曼散射(Surface Enahanced Raman Scattering, SERS) 光譜, 當具有共振拉曼效應的分子吸附在粗化的電極表面時, 得到的是表面增強共振拉曼散射(SERRS)光譜, 其強度又能增強102-103。

電化學原位拉曼光譜法的測量裝置主要包括拉曼光譜儀和原位電化學拉曼池兩個部分。拉曼光譜儀由激光源、收集系統、分光系統和檢測系統構成, 光源一般採用能量集中、功率密度高的激光, 收集系統由透鏡組構成, 分光系統採用光柵或陷波濾光片結合光柵以濾除瑞利散射和雜散光以及分光檢測系統採用光電倍增管檢測器、半導體陣檢測器或多通道的電荷藕合器件。原位電化學拉曼池一般具有工作電極、輔助電極和參比電極以及通氣裝置。為了避免腐蝕性溶液和氣體侵蝕儀器, 拉曼池必須配備光學窗口的密封體系。在實驗條件允許的情況下, 為了盡量避免溶液信號的干擾, 應採用薄層溶液(電極與窗口間距為0.1～1mm) , 這對於顯微拉曼系統很重要, 光學窗片或溶液層太厚會導致顯微系統的光路改變, 使表面拉曼信號的收集效率降低。電極表面粗化的最常用方法是電化學氧化- 還原循環(Oxidation-Reduction Cycle,ORC)法, 一般可進行原位或非原位ORC處理。

目前採用電化學原位拉曼光譜法測定的研究進展主要有: 一是通過表面增強處理把測檢體系拓寬到過渡金屬和半導體電極。雖然電化學原位拉曼光譜是現場檢測較靈敏的方法, 但僅能有銀、銅、金三種電極在可見光區能給出較強的SERS。許多學者試圖在具有重要應用背景的過渡金屬電極和半導體電極上實現表面增強拉曼散射。二是通過分析研究電極表面吸附物種的結構、取向及對象的SERS 光譜與電化學參數的關係，對電化學吸附現象作分子水平上的描述。三是通過改變調製電位的頻率, 可以得到在兩個電位下變化的“時間分辨譜”, 以分析體系的SERS 譜峰與電位的關係, 解決了由於電極表面的SERS 活性位隨電位而變化而帶來的問題。

2、激光拉曼光譜法是以拉曼散射做為理論基礎的一種光譜分析方法

激光拉曼光譜法的原理是拉曼散射效應。

拉曼散射：當激發光的光子與作為散射中心的分子相互作用時，大部分光子只是發生改變方向的散射，而光的頻率並沒有改變，大約有佔總散射光的10-10-10-6的散射，不公改變了傳播方向，也改變了頻率。這種頻率變化了的散射就稱為拉曼散射。

對於拉曼散射來說，分子由基態E0被激發至振動激發態E1，光子失去的能量與分子得到的能量相等為△E反映了指定能級的變化。因此，與之相對應的光子頻率也是具有特徵性的，根據光子頻率變化就可以判斷出分子中所含有的化學鍵或基團。

這就是拉曼光譜可以作為分子結構的分析工具的理論工具。

3、其他比較重要的拉曼光譜分析技術

1、單道檢測的拉曼光譜分析技術。

2、以CCD為代表的多通道探測器用於拉曼光譜的檢測儀的分析技術。

3、採用傅立葉變換技術的FT-Raman光譜分析技術。

4、共振拉曼光譜分析技術。

5、表面增強拉曼效應分析技術。