細胞生長曲線
細胞生長曲線
細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法，也是判定細胞活力的重要指標，是培養細胞生物學特性的基本參數之一。一般細胞傳代之後，經過短暫的懸浮然後貼壁，隨後度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數生長期。在細胞達到飽和密度后，停止生長，進入平頂期，然後退化衰亡。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數生長期，呈平台狀的平頂期及退化衰亡4個部分。以存活細胞數(萬/mL)對培養時間(h或d)作圖，即得生長曲線。
．取良近匯合細胞，胰酶消化，用新培養基製成細胞懸液後計數(見四、細胞傳代培養的實驗步驟)。如是非粘壁細胞，則離心棄舊培養基后，換上一定量的新鮮培養基然後製成細胞懸液計數。
．根據細胞計按瓶×/傳代培養接種細胞，共接種21瓶細胞。
．始計細胞，隔計，取瓶細胞，計。計算均值。連續計。
4．根據細胞計數結果，以單位細胞數(細胞數/mL)為縱坐標，以時間為橫坐標繪製生長曲線。
1．製備1mL細胞懸液。空白對照以1mL培養基代替細胞懸液。加入0.1mLMTT於37℃孵育4h。使MTT還原為藍紫色甲月贊結晶。
2．加1mLDTW脫色液，37℃至少靜置30min(甚至過夜)，使甲質顆粒充分溶解。
3．吸取200μL該溶解液至96孔板孔中，在酶標儀上讀取OD值，檢測波長570nm，參考波長630nm。
4．每隔24h測量一個點，每個點為3個平行樣品的平均值。