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PAS

一種化學反應的簡稱

過碘酸希夫反應,簡稱為 PAS反應(periodic acid Schiff reaction〕。其化學反應的基本過程多糖分子一般含有醛基,通過過碘酸的氧化作用,使多糖暴露出醛基,醛基與無色鹼性品紅結合反應,於多糖存在的部位形成新的紫紅色複合物,通過顯微鏡觀察而對組織細胞內的糖原糖蛋白粘多糖等化學成分進行定位、定性和定量的研究。

概況


PAS染色法( Periodic Acid- Schiff stain)在組織學上,主要用來檢測組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基,再用Schiff試劑和醛基反應使呈現紫紅色。

原理


PAS染色又稱糖原染色。一般用來顯示糖元和其它多糖物質。
原理:過碘酸能使細胞內的多糖乙二醇基氧化成乙二醛,再與Schiff氏液的無色品紅結合,紅色,定位於胞漿上。

應用


隨著醫學實驗技術的發展,糖原染色應用的範圍更加廣泛,如用以證明與鑒別細胞內空泡狀的性質,心肌病變及其他心血管疾病的診斷,糖原累積病診斷和研究,糖尿病的診斷和研究,用於某些腫瘤的診斷等。除用於糖原的鑒定和黏液的顯示外,還可以觀察腎小球基底膜、結腸杯狀細胞 中性黏液物質、阿米巴滋養體和黴菌的著色。臨床診斷、分類和治療提供 了重要的依據。

方法


固定液

Carnoy固定液:純酒精 60 ml 冰醋酸 10ml氯仿 30ml,也可以選用75%酒精.

液配製

1) 過碘酸酒清夜配法:
過碘酸 (HIO .2H O) 0.4g 95%酒精 35mlM/5醋酸鈉 (2.72g+蒸餾水100ml) 5ml蒸餾水 10ml
保存於冰箱內,用棕色瓶,可用兩周.
2)Schiff氏液:
0.5克鹼性品紅加入100毫升蒸餾水中,時時搖動三角瓶5分鐘,使之充分溶解。冷卻至50℃後過濾加入10毫升1N鹽酸。冷卻至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸鈉,在室溫中至少靜置24小時,然後密封冰箱保存.
3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml 1N HCI 0.5ml 純酒精 23ml
4) 亞硫酸水 1%偏重亞硫酸鈉10ml 1N HCI 10ml 蒸餾水 180ml的樹膠溶解。
5)哈瑞或邁耶蘇木精 略

染色步驟

1. 石蠟切片脫蠟至水(細胞塗片,冰凍切片直接水洗)
2. 蒸餾水洗
3. 過碘酸酒清夜10min
4. 自來水沖洗10min
5. Schiff氏液10min
6. 流水沖洗5min
7.用哈瑞蘇木精或邁耶蘇木精染核3min(細胞核染色過深可用鹽酸酒精分化)
8. 流水沖洗5min
9. 常規脫水、透明、封固

結果

PAS陽性為紅色,細胞核藍色。

實驗效果


準備

1、10g/L過碘酸液
2、Schiff染液:
鹼性品紅0.5g
DH2O 100ml
煮沸后,待片刻,加入鹼性品紅,振蕩數分鐘使品紅溶解,冷至50℃加入1M的鹽酸20ml,混勻。待冷
卻至25℃加入偏重亞硫酸鈉0.5g,混合,置於帶塞的棕色瓶中,放於暗處24小時,染液為無色,如為微紅則
加活性炭1-2g,混合過濾,如過濾液仍有紅色,應再加少許活性炭,時紅色完全被吸收為止。製成後置於棕色
瓶內保存在冰箱備用,如變為紅色,則不能使用。
4、蘇木素液:
95%乙醇 10ml
銨(鉀)明礬 20g
DH2O 200ml
將蘇木素溶於95%的乙醇,鉀明礬溶於水(可加熱),然後將蘇木素液加入明礬液中混合,用強火煮
沸后加氧化汞0.5g,迅速攪拌,成深紫色,迅速移入冷水中,次日過濾,臨用時取此液95ml加冰醋酸
5ml,可使細胞著色清楚。

用法

1、將新鮮血片或骨髓片用95%乙醇固定10分鐘。
2、10g/L過碘酸液作用20分鐘
3、DH2O洗滌幾次,晾乾
4、Schiff染液,60分鐘
5、用自來水洗滌15分鐘(細水長流沖洗)
6、蘇木素染液10分鐘。
7、自來水沖洗15分鐘,待干。

結果

陽性反應,胞漿呈紅色,陰性反應,胞漿呈無色;
在正常血片中RBC不染色;
PLT染成深紅色;
中性粒細胞胞漿染成紅色或深紅色,有些細胞有陽性顆粒;
單核細胞的胞漿染成淡紅色,可含有細小或粗大陽性顆粒;
少數淋巴細胞的胞漿內含有少許小的淡紅色或紅色顆粒;
正常骨髓的幼稚細胞和有核RBC都不染色;
巨核細胞的胞漿內呈彌散紅色或深紅色。
巨核細胞的胞漿內呈彌散紅色或深紅色。