細胞轉染

轉染，源基導細胞專技術。隨基蛋功研究深，轉染驗室涉及基。轉染致介導、化介導介導類途徑。穿孔、顯微注射基槍屬基導細胞範例；化介導，典磷酸鈣共沉澱法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。

細胞轉染，該具轉染效率、細胞毒優。病毒介導轉染技術，轉染效率，具細胞毒低優勢。，病毒轉染準備程序複雜，細胞類型強選擇，般驗室普及。化介導轉染，則各。

需指，論采哪轉染技術，獲優轉染，需轉染件優化。影響轉染效率素，細胞類型、細胞培養件細胞生長狀態，到轉染方法的操作細節，都需要考慮。

陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內，形成DNA脂複合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內吞進入細胞。脂質體轉染適用於把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前實驗室最方便的轉染方法之一，其轉染率較高，優於磷酸鈣法。由於脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過24小時。常用細胞類型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。

電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內，這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質體轉染效率很低或幾乎無法轉入時建議用電穿孔法轉染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70% 的細胞。現在針對細胞死亡開發出了一種電轉保護劑，可以大大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉染效率。

對於脂質體轉染與電穿孔轉染都無法成功轉染的細胞系建議用病毒感染，此法可以快速100%感染，檢測成功率高。

1. 轉染試劑的準備

① 將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。

3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。

4. 吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。

5. 加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。

6. 到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之後加入完全培養基繼續培養24－48小時。