脂質體

脂質體的分類

1、脂質體按照所包含類脂質雙分子層的層數不同，分為單室脂質體和多室脂質體。

小單室脂質體(SUV)：粒徑約0.02～0.08um；大單室脂質體(LUV）為單層大泡囊，粒徑在0.1～lum。

多層雙分子層的泡囊稱為多室脂質體(MIV)，粒徑在1～5um之間。

2、按照結構分：單室脂質體，多室脂質體，多囊脂質體。

3、按照電荷分：中性脂質體，負電荷脂質體，正電荷脂質體。

4、按照性能分：一般脂質體，特殊功效脂質體。

脂質體的組成與結構

脂質體的組成：類脂質（磷脂）及附加劑。

1、磷脂類：包括天然磷脂和合成磷脂二類。磷脂的結構特點為一個磷酸基和一個季銨鹽基組成的親水性基團，以及由兩個較長的烴基組成的親脂性基團。

天然磷脂以卵磷脂（磷脂醯膽鹼，PC）為主，來源於蛋黃和大豆，顯中性。

合成磷脂主要有DPPC（二棕櫚醯磷脂醯膽鹼）、DPPE（二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺）、DSPC（二硬脂醯磷脂醯膽鹼）等，其均屬氫化磷脂類，具有性質穩定，抗氧化性強，成品穩定等特點，是國外首選的輔料。

2、膽固醇：膽固醇與磷脂是共同構成細胞膜和脂質體的基礎物質。膽固醇具有調節膜流動性的作用，故可稱為脂質體“流動性緩衝劑”。

1、靶向性和淋巴定向性：肝、脾網狀內皮系統的被動靶向性。用於肝寄生蟲病、利什曼病等單核-巨噬細胞系統疾病的防治。如肝利什曼原蟲葯銻酸葡胺脂質體，其肝中濃度比普通製劑提高了200～700倍。

2、緩釋作用：緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長作用時間。

3、降低藥物毒性：如兩性黴素B脂質體可降低心臟毒性。

4、提高穩定性：如胰島素脂質體、疫苗等可提高主葯的穩定性。

1、形態、粒徑及其分佈

採用掃描電鏡、激光散射法或激光掃描法測定。根據給葯途徑不同要求其粒徑不同。脂質體如注射給葯脂質體的粒徑應小於200nm，且分佈均勻，呈正態性，跨距宜小。

2、包封率和載藥量

包封率：包封率=（脂質體中包封的藥物/脂質體中藥物總量）×100%

一般採用葡聚糖凝膠、超速離心法、透析法等分離方法將溶液中遊離藥物和脂質體分離，分別測定，計算包封率。通常要求脂質體的藥物包封率達80%以上。

載藥量：載藥量=[脂質體中藥物量/（脂質體中藥物+載體總量）]×100%

載藥量的大小直接影響到藥物的臨床應用劑量，故載藥量愈大，愈易滿足臨床需要。載藥量與藥物的性質有關，通常親脂性藥物或親水性藥物較易製成脂質體。

3、脂質體的穩定性

1)、物理穩定性：主要用滲漏率表示。

滲漏率=（放置前介質中藥物量－放置后介質中的藥量）/製劑中藥量x100%

膽固醇可以加固脂質雙分子層膜，降低膜流動，可減小滲漏率。

2)、化學穩定性：

(1)磷脂氧化指數：氧化指數=A233nm/A215nm；一般規定磷脂氧化指數應小於0.2。

(2)磷脂量的測定：基於每個磷脂分子中僅含1個磷原子，採用化學法將樣品中磷脂轉變為無機磷后測定磷摩爾量（或重量），即可推出磷脂量。

4、防止氧化的措施：

防止氧化的一般措施有充入氮氣，添加抗氧劑-生育酚、金屬絡合劑等；也可直接採用氫化飽和磷脂。

5、脂質體的滅菌：

滅菌的一般方法有過濾除菌、無菌操作、－射線照射（60鈷15～20kGy）、121℃熱壓滅菌等。

注入法、薄膜分散法、超聲波分散法、逆向蒸發法。

脂質體作為藥物載體的臨床應用

1、抗腫瘤藥物載體：阿黴素脂質體和順鉑脂質體已在國外上市。

2、抗寄生蟲藥物載體：苯硫咪唑脂質體和阿苯達唑脂質體等。利用脂質體的被動靶向性，提高藥物的生物利用度，減少用量，降低毒副作用。

3、抗菌藥物載體：慶大黴素脂質體和兩性黴素B，可減少藥物的耐藥性，降低心臟毒性。

4、激素類藥物載體。

給葯途徑

脂質徠體的給葯途徑主要包括（1)靜脈注射；（2)肌內和皮下注射；（3)口服給葯；（4)眼部給葯；（5)肺部給葯；（6)經皮給葯；（7)鼻腔給葯。

體內過程

脂質體與細胞之間作用的主要形式包括膜間轉運（細胞膜的脂質交換）、接觸釋葯、吸附、融合和內吞。

脂質體具有類細胞結構，進入體內主要被網狀內皮系統吞噬而激活機體自身的免疫功能，並改變包封藥物的體內分佈，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數、減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。

新型靶向脂質體

1、前體脂質體：將脂質吸附在極細的水溶性載體如氯化鈉、山梨醇等聚

合糖類（增加脂質分散面積）製成前體脂質體，遇水時脂質溶脹，載體溶解形成多層脂質體，其中載體的大小直接影響脂質體的大小和均勻性。前體脂質體可預防脂質體之間相互聚集，且更適合包封脂溶性藥物。

2、長循環脂質體：經過PEG修飾，以增加脂質體的柔順性和親水性，通過單核-巨噬細胞系統吞噬，減少脂質體脂膜與血漿蛋白的相互作用，延長循環時間，稱為長循環脂質體(long-circulating liposome)。長循環脂質體有利於肝脾以外的組織或器官的靶向作用。同時，將抗體或配體結合在PEG的末端，既可保持長循環，又可保持對靶體的識別。

3、免疫脂質體：脂質體表面聯接抗體，對靶細胞進行識別，提高脂質體的靶向性。如在絲裂黴素（MMC）脂質體上結合抗胃癌細胞表面抗原的單克隆抗體3G製成免疫脂質，在體內該免疫脂質體對胃癌靶細胞的M85殺傷作用比遊離MMC提高4倍。

4、熱敏脂質體：利用在相變溫度時，脂質體的類脂質雙分子層膜從膠態過渡到液晶態，脂質膜的通透性增加，藥物釋放速度增大的原理製成熱敏脂質體。例如將二棕櫚酸磷脂（DPPC）和二硬脂酸磷脂（DSPC)按一定比例混合，製成的3H甲氨喋呤熱敏脂質體，再注入荷Lewis肺癌小鼠的尾靜脈后，再用微波加熱腫瘤部位至42℃，病灶部位的放射性強度明顯的高於非熱敏脂質體對照組。

5、pH敏感性脂質體：由於腫瘤間質的pH比周圍正常組織細胞低，選用對pH敏感性的類脂材料，如二棕櫚酸磷脂或十七烷酸磷脂為膜材製備成載葯脂質體。當脂質體進入腫瘤部位時，由於pH的降低導致脂肪酸羧基脂質化成六方晶相的非相層結構，從而使膜融合，加速釋葯。

總之，脂質體作為藥物載體是臨床應用較早，發展最為成熟的一類新型靶向製劑。美國FDA批准上市的脂質體產品有兩性黴素B、阿黴素脂質體。批准進入臨床試驗的脂

質體有丁胺卡鈉黴素。未來脂質體的研究主要集中在以下三個方面：

1、膜結構與載藥性質之間的關係；

2、脂質體在體內的靶向特性；

3、在體外培養中將基因和其他物質導入細胞內有望成為基因藥物載體。

脂質體是由脂雙分子層組成的顆粒，可介導基因穿過細胞膜。通過脂質體介導比利用病毒轉導進行基因轉移具有以下明顯的優勢：①脂質體與基因的複合過程比較容易；②易於大量生產；③脂質體是非病毒性載體，與細胞膜融合將目的基因導入細胞后，脂質即被降解，無毒，無免疫原性；④DNA或RNA可得到保護，不被滅活或被核酸酶降解；⑤脂質體攜帶的基因可能轉運至特定部位；⑥體外和體內試驗都表明，接近染色體大小的DNA片段也能被轉運至宿主基因組中並增長；⑦轉染過程方便易行，重現性好。

脂質體是具有雙層膜的封閉式粒子，自身聚集性脂類分子包封內水相介質，可分為大、小多層，寡多層和單室脂質體，醫學應用較多為小單室脂質體。基於脂質體作為藥物載體系統的經驗，理想的用於轉運基因的脂質體，對於質粒DNA具有高包封率，保護DNA不被血漿核酶降解的特點，它們粒徑分佈範圍窄，粒徑平均為100nm或者更小。為使脂質體接近血管外區域，故採用具有廣泛的結合潛力脂類，這種特殊脂類可促進與細胞膜融合和/或提高脂質體在循環系統中的穩定性。第1種為傳統上的脂質體，人們可控制其體外行為，但不能控制其體內行為，它們很快被滅活或被固定；第2種為無活性脂質體（即不與外界作用），由於聚合物包封於表面的立體穩定性而抑制其相互作用；第3種脂質體表面結合抗原、凝集素或其他基團，由於表面結合的特定配基，也可特定地相互作用；第4種為反應活性脂質體，如離子型、靶敏感型和融合性脂質體，這種脂質體有時指相轉變的多孔脂質體，脂質體內有離子敏感亞基，Ca2+其他金屬離子敏感性脂質體，也包括陽離子脂質體，陰離子脂質體。陰離子脂質體不屬於有反應活性類，但特殊的試驗如試管內與相反電荷（多）離子相互作用例子除外。

常規脂質體進入細胞轉運DNA實驗，其原理是脂質體增強細胞體的聚集，即加速大分子、荷電多的分子透過膜，該過程相當複雜，尤其在包封較大片段時，在實踐中這種技術只在體外使用且要用融合劑，荷電越多用途越少。