包封率

脂質體包封率是指被包裹物質（如某藥物）在脂質體懸液中占藥物總量的百分量。可利用下式計算出百分包封率：EN%=(1一Cf/Ct)×100%。其中，Cf為遊離藥物的量，Ct為脂質體懸液中藥物的總量。

包封率包括百分包封率和包裹容積的測定，一般文獻主要考察百分包封率(Encapsulation percentage , EN%)。其表達式是EN%=(1－Cf/Ct )×100%。式中Cf 為遊離藥物的量；Ct為納米粒或脂質體懸液中藥物的總量。

脂質體(Liposomes)或稱類脂小球，是一種類似生物膜結構的雙分子層微小囊泡, 由天然的或合成的磷脂在水溶液中形成。自1965年被發現以來，對其研究日益廣泛，已遍及生命科學及膜工程學等領域 , 並逐漸向臨床應用發展。在應用上，脂質體有如下優點:

（1）被脂質體包封的藥物可被完好無損地輸送至不同的組織和細胞，直到脂質體破壞才 被釋放，達到靶向給葯的目的。

（2）在藥物從脂質體中釋放之前，機體的其他組織和細胞受到保護，降低了藥物的毒性。

（3）脂質體的大小、電荷和其他特性可以根據藥物需要發揮的作用而改變。

（4）脂質體可以不經任何化學修飾，同時作為脂溶性藥物和水溶性藥物的載體。

鑒於脂質體的諸多優點及其作為藥物載體的靶向性、延效性、提高藥物穩定性、可生物降解且無免疫原性和毒性等特點，其應用越來越廣泛，因此對其質量控制顯得愈發重要。目前常用的脂質體評價指標包括形態與粒徑及其分佈、包封率、滲漏率、體外釋放等 , 其中包封率是脂質體質量評價的重要指標之一。

脂質體包封率的測定通常是先將含葯脂質體與遊離藥物分離 , 然後通過其他方法直接或 間接計算其濃度。若某藥物含量與某物理量 ( 吸光度、峰高、熒光強度、放射強度等)成比例 , 亦可用物理量來表示。

1. 透析法 :

透析法利用半透膜分子大小差別 , 通過及時更換外相達到分離的目的。該法簡單、準確 , 重複性好，缺點是耗時較長，所耗介質較多，易造成藥物滲漏。在應用此法時如能減少透析時間，可降低藥物的滲漏，從而提高藥物包封率。

2. 超速離心法 :

超速離心法利用遊離藥物與含葯脂質體的重力差異進行分離，計算包封率，該法適用於亞微米級粒子，可用於樣品濃縮。但該方法成本較高，通常需要離心 l h 以上，且各批樣品間重現性差，藥物的包封率不高，原因可能是由於離心過程中造成一部分小脂質體丟失，或離心力導致脂質體中藥物滲漏丟失。

3. 凝膠柱層析法 :

常用的層析柱為葡聚糖凝膠( Sephadex ) 柱和瓊脂糖凝膠 (Sepharose) 柱 , 利用脂質體和遊離藥物相對分子質量的差異進行離，但存在洗脫時間長、洗脫體積大、藥物濃度低等問題。

4. 陽離子交換樹脂法 :

陽離子交換樹脂法的機制是基於離子交換，即只要物質表面有可交換的離子存在，便可被離子交換樹脂通過離子交換而捕捉，故無論是遊離藥物，還是藥物晶或是脂質體碎片，均可被吸附而與含葯脂質體分離。陽離子交換樹脂法測定包封率具有樣品用量少、耗時短、操作簡 單、成本低等優點。

5. 超濾膜過濾法 :

超濾膜過濾法利用遊離藥物能通過濾膜，而含葯脂質體被截留在濾膜上來分離遊離藥物與脂質體。該法存在濾過時間長、濾膜體積大、藥物濃度不高等缺點。

1.藥物的性質和濃度 :

固定脂質材料組成和製備工藝后，脂質體的包封率則由藥物本身性質所決定，包括藥物的溶解性、電性、相對分子質量及藥物濃度等。

脂溶性或水溶性特別好(即4.5< log Poct< -0.3) 的藥物可包封成具有較好包封率的脂質體 , logPoc為藥物在辛醇-水兩相中的分配係數Poct對數值。對於具有中間值的藥物，就難於形成理想的脂質體，為此，首先將藥物製成鹽 (log Poct < -0.3 ) 或酯化 (log Poct > 4.5 ) 再包封成脂質體。氫化可的松 ( 0.59 < log Poct < 1.93 )不易製成脂質體，先酯化成氫化可的松棕桐酸醋(log Poct > 9 ) 后再製備 , 脂質體的包封率高且穩定。

不同等電點的藥物包封情況如下，用 PC: CH : SA 為 7 : 2 : l ( 摩爾比)正電荷脂質體包封眼鏡蛇毒、人IgG 、牛血清蛋白和DNA的包封率分別為10.6 % 、17.7 % 、36.3% 和84.0 % , 其大小與4種物質等電點(9.16、7.3、4.7和1.3)相反。

2.脂質體的製備方法和結構類型:

結構類型與包封率大小的一般順序是 : LUV > REV -MLv > SPLV > MLV > SUV。當處方擬定后，製備方法就可決定結構類型。分別採用水化法、脫水-再水化法、前體脂質體法，以大豆卵磷脂(sPC)製備了超氧化物歧化酶(SOD )脂質體，前體脂質體法的包封率為39.0% -65.4% , 而水化法和脫水-再水化法的包封率分別為0.7 % -12.6 % 和 1.8 % -2.9 % 。

其他方法如凍融法一般有較高的包封率，冷凍乾燥法冷凍過程往往導致包封率下降，選用適當的凍干保護劑可大大改善包封率。超聲法的脂粒都小，小脂質體包封率與雙分子層膜彎曲度有關，膜彎曲度越小，包封率越低。超聲法或激烈攪拌都會使水溶性藥物包封率降低。另外製備脂質體使用的容器、溫度和各過程程序、時間等均對包封率有影響。

3.類脂膜的組成 :

膜的組成與脂質體的結構密切相關，對其包封率亦有影響，如在PC中加人適量CH可增加包封率。採用脫水再水化法製備 SOD 脂質體時 , 包封率高達 (66 士5) % , 原因可能是採用了飽和度較高的蛋黃卵磷脂 (EPC ) 和膽固醇，使脂肪鏈的氧化程度大大降低，膽 固醇填充了磷脂分子間的空 隙 , 使膜上的磷脂排列 更加緊密。

4.穩定劑、分散劑的種類和濃度 :

PVP和環糊精等一些物質對脂質體的包封率也有一定影響。如先把藥物製成凝膠微球或加工 成環糊精包合物后，再包於脂質雙層膜，製得具有固態核心的脂質體，不僅具有靶向勝和良好的穩定性，而且還能提高包封率。

1. 對藥物結構進行適當改造，增強藥物的脂溶性或水溶性 :

在製備脂質體的過程中，先把10-羥基喜樹鹼和7-乙基-10-羥基喜樹鹼通過與油酸的酯化反應，生成10-羥基喜樹鹼油酸酯和7-乙基-10-羥基喜樹鹼油酸酯，增加 10-羥基喜樹鹼和7-乙基-10-羥基喜樹鹼的脂溶性，提高其油/水分配係數，從而提高所製備脂質體包封率。

2. 調節膜的組成:

製備脂質體時 , 在磷脂中加人少量的CH ,可提高包封率與穩定性。這是因為一定比例的 CH 可以增加脂質雙分子膜中分子的排列緊密程度，有助於減輕加熱時脂質分子經基的 彎曲結構增加，從而穩定脂質體和減少滲漏作用。但CH增加較多可能增加脂質雙分子膜的不對稱性，在加熱條件下，不對稱性更易導致膜的疏鬆，使藥物滲漏。

3 .提高膜的強度 :

在雙分子層膜中加入保護劑，使雙分子層膜剛性增加，結構緊密，可使脂質體較好地維持原包封率。

包封率是脂質體研究的主要內容 , 提高包封率一直是脂質體研究中的熱點和難點。影響脂質體包封率的因素較多 , 又因藥物性質的不同而不同。上述各種脂質體藥物包封率測定法存在一個共同的問題 , 即所得包封率均較低。如透析法、層析法及濾膜法都是利用分子大小或密度差異進行分離 , 故較難將脂質體與藥物晶體和/ 或脂質體碎片分離 , 影響包封率測定的結果；且 3 種方法都耗時較長 , 與藥物濃度有很大關係 , 在柱或者濾膜的選擇上也存在困難；離心法速度較快，但易造成脂質體中藥物的滲漏 , 且成本高；相比之下 , 陽離子交換樹脂法耗時短，成本低，不會造成藥物的滲漏、損失 , 能夠真正反映出脂質體的包封率。

在提高包封率方法中, 藥物結構改造具有一定的局限性 , 因為並非所有藥物均能製成符合條件的脂溶性或水溶性增強的藥物；在雙分子層膜 中加人保護劑，雖然提高了膜的強度 , 但是尋求合適的保護劑很困難；通過調整類脂的組成和比例，控制PH值、離子強度和選擇適當的製備方法等，也可製得高包封率的脂質體。因此，深入研究包載過程中藥物與脂質體膜相互作用，將成為新的技術和方法的理論依據，促進脂質體作為藥物載體的開發和使用。