吖啶橙
吖啶橙
吖啶橙：3，6－（二甲胺基）吖啶鹽酸鹽，分子式C17H19N3·HCl·ZnCl₂，分子量438.12g/mol，是一種熒光色素，其檢測激發濾光片波長488nm，阻斷濾光片波長515nm。它與細胞中DNA和RNA結合量存在差別，可發出不同顏色的熒光，與DNA結合量少發綠色熒光，與RNA結合量多發桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性，能透過細胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細胞中，因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上緻密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染，因EB只染死細胞使之產生桔黃色熒光，由此可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。它還可以用作移碼突變的誘變劑，能鑲嵌於兩個相鄰的鹼基對之間，這樣在DNA複製過程中，會使DNA鏈增加或缺失一個鹼基，造成移碼突變。吖啶橙染液有毒，操作時要戴手套，需避光。
2017年10月27日，世界衛生組織國際癌症研究機構公布的致癌物清單初步整理參考，吖啶橙在3類致癌物（現有證據未能對人類致癌性進行分級評價）清單中。
簡稱：AO
AO能與無機酸形成鹽，具有綠色熒光。如果再稀釋的話，便水解成遊離的AO，而呈現紫色熒光。
吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色測定PC12細胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：
（1）細胞爬片：在6孔培養板中預先置入玻璃蓋玻片，接種細胞懸液，干預后，予95%乙醇固定15分鐘，微干，然後準備熒光染色。將100mg/L溶於PBS的吖啶橙和100mg/L溶於PBS的溴化乙錠各5μl（臨用前混合加入，加樣量宜小，有時各2μl-5μl足夠，量太大容易形成細胞凋亡的假陽性），在照相前混勻后加入，輕輕吹打，30秒後用激光共聚焦顯微鏡觀察照相。（有人用15mg吖啶橙溶於100ml pH6.8的PBS中過濾，避光保存）計取5個視野，共100個細胞中凋亡細胞百分數。
（2）如製成細胞懸液：取100μl PBS稀釋的細胞懸液，加2μl的染色液，其中AO/EB，各含100μg/ml，加入染料30秒后觀察攝像。
用作熒光指示劑，腫瘤細胞及細菌、核酸染色劑及移碼突變的誘變劑。
吖啶橙是一種熒光色素，吖啶橙激發濾光片波長488nm。阻斷濾光片波長515nm。吖啶橙與細胞中DNA和RNA結合量存在差別，可發出不同顏色的熒光（即著色特異性），這是由於DNA是個高度聚合物，吸收熒光物質的位置較少，發綠色熒光，而RNA聚合度低，能和熒光物質結合的位置多，故發紅色熒光。
項目 電泳級
λmax.,50%EtOH:490-495 nm
E 1%/1 cm,λmax.:>1200(EtOH 50%)
乾燥損失Loss on drying:≤5%
pH(1%;H2O):約4.0(20°C)
品級Grade分子生物學級,≥80.0%
(for molecular biology，Dye Content≥80.0%（HPLC))
外觀Appearance Red to Brown Powder
紅外光譜Infrared spectrum Conforms to Structure
水溶性Solubility c=1mg/ml;Water，Dark Orange to Amber，Clear
氮Nitrogen 8.5-12.5%
染料含量Dye Content(HPLC)≥80.0%
橙色粉末。溶於水、乙醇。溶液為橙黃色帶綠色熒光。pH值為8.4～10.4則無熒光。能鑲嵌於兩個相鄰的鹼基對之間，使部分雙螺旋DNA鬆開，該兩個鹼基對的距離拉大一倍。這樣的DNA複製過程中，會使DNA鏈增加或缺失一個鹼基，造成移碼突變。
熔點:165℃
相對密度:-
溶解性:soluble
| Risk： | R20/21/22Harmful by inhalation, in contact with skin and if swallowed. 吸入、皮膚接觸及吞食有害。R68Possible risk of irreversible effects. 可能有不可逆後果的危險。 | ||
| Safety : | S36/37Wear suitable protective clothing and gloves. 穿戴適當的防護服和手套。S45In case of accident or if you feel unwell, seek medical advice immediately (show the label whenever possible.) 若發生事故或感不適，立即就醫(可能的話，出示其標籤)。 | ||
| Hazard : | Xn-Harmful 有害物品 Xi-Irritant 刺激性物品 | ||
國際癌症研究所（IARC）對已進行致癌研究的化學物分為四類：一類，對人致癌性證據充分；二類，A組對人致癌性證據有限，但對動物致癌性證據充分，B組人致癌性證據有限，對動物致癌性證據也不充分；三類，現有證據未能對人類致癌性進行分級評價；四類，對人可能是非致癌物。
基本信息
- 中文名
- 吖啶橙
- 外文名
- Acridine Orange
- 化學式
- C17H19N3
- 熔點
- 165ºC (dec.)(lit.)
- 密度
- 1.2±0.1 g/cm3
- 水溶性
- soluble
- 沸點
- 468.6±25.0 °C at 760 mmHg
- 閃點
- 237.2±23.2 °C
- 摩爾質量
- 739.9426
- 警示術語
- Harmful
- RTECS
- 233-353-6
- CAS號
- 10127-02-3
- 分子量
- 265.353
- 中文別名
- 鹼性橙 14； 丫啶橙;3,6-雙(二甲氨基)吖啶
- MDL
- MFCD00081043
- Beilstein
- 3734978
- 英文名稱
- Basic Orange 14；Basic Orange 14; C.I. 46005; 3,6-Bis(dimethylamino)acridine zinc chloride hydrochloride