間接血凝試驗

該技術在臨床檢驗中應用廣泛，以下簡述其操作過程。

紅細胞是大小均一的載體顆粒，最常用的為綿羊、家兔、雞的紅細胞及O凝型人紅細胞。新鮮紅細胞能吸附多糖類抗原，但吸附蛋白質抗原或抗體的能力較差。致敏的新鮮紅細胞保存時間短，且易變脆、溶血和污染，只能使用2～3d。為此一般在致敏前先將紅細胞醛化，可長期保存而不溶血。常用的醛類有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。紅細胞經醛化后體積略有增大，兩面突起呈圓盤狀。醛化紅細胞具有較強的吸附蛋白質抗原或抗體的能力，血凝反應的效果基本上與新鮮紅細胞相似。如用兩種不同醛類處理效果更佳。也可先用戊二醛，再用鞣酸處理。醛化紅細胞能耐60C的加熱，並可反覆凍融不破碎，在4℃環境中可保存3—6個月，在一20℃的環境中可保存1年以上。

致敏用的抗原或抗體要求純度高，並保持良好的免疫活性。用蛋白質致敏紅在低pH，低離子濃度下，用醛化紅細胞直接吸附即可。間接法則需用耦聯劑將蛋白質結合到紅細胞上。常用耦聯劑為雙耦氮聯苯胺(bis-diazotized benzidine，BDB)和氯化鉻。前者通過共價鍵，後者通過金屬陽離子靜電作用使蛋白質與紅細胞表面結合而達到致敏的目

可在微量滴定板或試管中進行，將標本倍比稀釋，一般為1：64，同時設不含標本的稀釋液對照孔。在含稀釋標本1滴的板孔(或試管)中，加入0．5%致敏紅細胞懸液1滴，充分混勻，置室溫1～2h，即可觀察結果。凡紅細胞沉積於孔底，集中呈1圓點的為不凝集(一)。如紅細胞凝集，則分佈於孔底周圍。根據紅細胞凝集的程度判斷陽性反應的強弱，以都凝集的孔為滴度終點。