基因診斷技術

1、針對直接病因診斷

2、特異性強，靈敏度高

3、適應性強，診斷範圍廣

4、目的基因是否處於活化狀態均可，無組織和發育特異性

5、在感染性疾病的基因診斷中，可檢測正在生長的病原體或潛伏病原體

細胞樣本

可以是任何有核細胞，包括：

1、外周血白細胞、口腔黏膜細胞

2、活檢標本、石臘包埋的組織塊

3、沉澱細胞（唾液、痰液、尿液）

4、羊水細胞、絨毛細胞、進入母體循環的胎兒細胞（應用PCR，樣本可微量化到一個細胞）

1、被檢測基因是否已在染色體上定位；

2、被檢測基因結構是否明確；

3、被檢測基因已知的突變類型；

4、被檢測基因有無緊密連鎖的 DNA多態標記；

5、被檢基因的功能及其在疾病發生髮展中的作用

基因突變的檢測、基因連鎖分析、基因表達的分析

①核酸分子雜交 ②聚合酶鏈反應 ③連接酶鏈反應 ④DNA測序 ⑤基因晶元技術

是從核酸分子混合液中檢測特定大小的核酸分子的傳統方法。核酸雜交反應是一對一的反應，即膜上有一個被檢測分子時，相應就有一個標記的探針分子與它雜交。其原理是核酸變性和復性理論。即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開，而在條件恢復后又可依鹼基配對規律形成雙鏈結構。雜交通常在一支持膜上進行，因此又稱為核酸印跡雜交。根據檢測樣品的不同又被分為DNA印跡雜交（Southern blot）、RNA印跡雜交（Northern blot）、點雜交和原位雜交。

用聚合酶鏈反應來擴增靶分子以特異性地增加靶分子量，達到提高敏感性的目的。

目前在實驗室手工測序常用Sanger雙脫氧鏈終止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和雙脫氧鏈終止物測定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一種單鏈的DNA模板或經變性的雙鏈DNA模板和一種恰當的DNA合成引物。其基本原理是DNA聚合酶利用單鏈的DNA模板，合成出準確互補鏈，在合成時，某種dNTP換成了ddNTP（2′，3′-雙脫氧核苷三磷酸），這時，DNA聚合酶使ddNTP滲入到寡核苷酸鏈的3′末端，導致無3′-OH的核苷酸無法繼續與其他核苷酸連接而終止了DNA鏈的生長。雙脫氧核苷酸的種類不同，摻入的位置不同，就造成了在不同的位置終止的長度不等的互補鏈。通過摻入的放射性核苷酸結合聚丙烯醯胺凝膠電泳，即可讀出模板DNA的互補鏈序列。

基因晶元技術是近年來發展十分迅速的大規模、高通量分子檢測技術。其基本原理是核酸雜交，其基本過程是將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規律的排列固定於支持物上，形成矩陣點。現在的技術可以做到在25px2上排列成千上萬個“點”。樣品DNA/RNA通過PCR擴增、體外轉錄等技術摻入熒游標記分子，然後按鹼基配對原理進行雜交，再通過熒光檢測系統等對晶元進行掃描，並配以計算機系統對每一探針上的熒光信號做出比較和檢測，得出所要的信息。