顯微攝影術

顯微攝影是使目鏡中的影像投射出來，射在照相底片上，使底片感光而記錄下視野中現象的方法。在顯微攝影時，影像的投射情況如圖1所示，光線自片子中微小物件W射入物鏡O后，在I1處造成一個放大而倒立的實像，I1在目鏡焦平面Fe稍下處，二者距離為d。此實像被目鏡再進一步放大后，射出目鏡在I2處的屏幕上形成一個放大的實像。假如屏幕為一毛玻璃，即可取景對焦，准焦后換上底片即可進行拍攝。

最簡單的顯微攝影裝置包括光學顯微鏡、照相機或電影攝影機及取景器（圖2）。作用在照相底板上的有效光學影像一般是由顯微鏡的全部光學系統（物鏡+目鏡）形成。而照相機則與一般照相機不同，它們是專為顯微照相設計的，沒有照相機透鏡，可直接裝在顯微鏡鏡筒上。此外，藉助於照相接筒可以把照相機與鏡筒連接起來用於顯微照相。一般在接筒上有一個帶長方形取景框和聚焦目鏡合稱取景器。用來取景、調焦、調整像的寬度。選用合適的曝光時間，有的還可以連接自動曝光裝置，以便更準確地確定曝光時間。

顯微攝影是隨著現現代生代物技術的發展而產生的新的名詞，從本質上來講，顯微攝影是在原來顯微技術的基礎上增加了拍攝功能，即利用專業的顯微攝影設備將顯微鏡下看到的視野範圍通過照片的形式表現出來的一門技術。是科學研究，經驗交流中不可缺少的手段之一。

如何拍攝一張好的顯微攝影圖片，最主要的還是取決於顯微鏡以及攝影設備的成像質量，在這些硬體設備一定的條件下，要拍攝一張滿意的顯微攝影圖像，應該注意以下幾點：

●製作清晰的標本片，其中組織切片應厚薄適度，染色片不應有多餘的染料等。

●選擇性能優良乾淨的載玻片和蓋玻片。

●使用高性能的物鏡（最好用復消色差的平場物鏡）和聚光器。

●拍攝時應準確地調焦

●正確的做好白平衡

●選擇合理的曝光時間

●適當控制背景雜訊

●合理選擇設備參數

●相機和顯微鏡連接

●將隨機附帶的光碟插入光碟機，完成相機驅動和軟體的安裝

●檢查顯微鏡的光否乾淨無學系統是污染，樣品是否乾淨

●目鏡下調焦，觀察樣品。

●啟動相機：相關相機軟體，啟動相機

●調焦：使用高速預覽模式調焦。圖森相機具有高速預覽功能，方法是在調焦的時候將相機的解析度調至較小值，以增大預覽速度。而拍照的時候，則應選擇在高解析度模式下。

●白平衡：左右移動載玻片，至樣品完全移出聚光鏡範圍以外，點擊自動白平衡

●調節相機參數：相機參數的調節可以極大的影響圖片的質量，這些參數主要包括曝光時間調節，增益調節，以及gamma值，飽和度，亮度的調節，為了拍攝更為真實的顯微攝影圖片，應採用適當的曝光時間同時盡量減小增益，以降低背景雜訊，同時應保證gamma值，飽和度和亮度的值為0。

●進行拍攝：點擊拍攝按鈕，系統將彈出保存界面，將文件命名之後即可保存，也可設置自動保存。

●錄像：點擊錄像按鈕，即可進行錄像

●剪切拍攝功能：可以選擇對視野範圍的局部進行拍照