核酸雜交技術

核酸雜交技術

核酸雜交技術是一種分子生物學的標準技術,用於檢測DNARNA分子的特定序列(靶序列)。

核酸雜交技術


DNA或RNA先轉移並固定到硝酸纖維素或尼龍膜上,與其互補的單鏈DNA或RNA探針用放射性或非放射性標記。在膜上雜交時,探針通過氫鍵與其互補的靶序列結合,洗去未結合的遊離探針后,經放射自顯影或顯色反應檢測特異結合的探針。

DNA印跡雜交


DNA印跡雜交(DNA blot hybridization):
1:將DNA或RNA溶液直接點樣於硝酸纖維素膜或尼農膜上(斑點或狹線印跡)
2:經瓊脂糖凝膠電泳將片段的DNA或RNA轉移到膜上(Southern和Northern印跡法)。DNA在電泳前先用限制性內切酶消化。

RNA印跡雜交


RNA印跡雜交(RNA blot hybridization):

斑點雜交

將少量核酸樣品點樣在硝酸纖維素濾膜上,80℃烘烤后可牢固地固定在膜上,再用探針進行雜交。尼龍膜,特別是聚偏氟乙烯PVDF)與DNA結合力更高,堅韌、易操作。點樣可手工,也可用手工點樣品。檢測可用放射性探針自顯影或非放射性探針顯色。

原位雜交

在保持細胞形態條件下,進行細胞內雜交,顯影或顯色。可用於DNA或RNA分析。熒光原位雜交(FISH)進行染色體DNA分析可用於生物學研究的許多領域以及臨床細胞遺傳學研究。其主要優點是不僅可以在細胞分裂的中期,而且可在分裂間期核中診斷染色體的變化。