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其標記物的發光原理是一種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，實際上包含了化學發光（CL)與電化學發光（ECL）的兩個過程。

用電化學發光劑三聯吡啶釕[ Ru(bpy)3]標記抗體，通過抗原抗體反應和磁顆粒分離技術，根據 三聯吡啶釕在電極上發出的光強度的大小對待測抗原或抗體進行定性或定量分析。

抗原抗體反應

本方法中抗原抗體反應類型與酶發光免疫測定技術一致，主要也有雙抗體夾心法，雙抗原夾心法和固相抗原競爭法三種模式。現已臨床上常用的HBsAb的含量測定採用的雙抗體夾心法舉例：生物素標記的HBsAg , 三聯吡啶釕絡合物標記的HBsAg與待測樣品共同孵育, 形成三聯吡啶釕-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素的複合體; 和親和素標記的磁微粒孵育, 形成三聯吡啶釕-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素-親和素磁微粒複合體。

B和F分離

常用磁顆粒分離技術。蠕動泵將反應液吸入流動室, 磁微粒由磁鐵吸附到電極表面。

電化學發光反應與結果計算

蠕動泵加入含三丙胺（TPA)的緩衝液，同時電極加電壓，啟動ECL反應過程。該過程在電極表面周而復始的進行，產生許多光子，由光電倍增管檢測光強度，光強度與三聯吡啶釕的濃度呈線性關係，根據標準曲線算出待測抗原的含量。最後，終止電壓，移開磁珠，加入清洗液沖洗流動測量室，準備下一個樣品測定。

方法學評價

三聯吡啶釕在電場中因不斷的得到三丙胺提供的電子，而周而復始地發光，持續時間長，信號強度強，容易測定，容易控制。標記物的循環再利用，使發光強度更強、時間更長、更易於測定。三聯吡啶釕直接標記抗原或抗體，結合穩定，不影響標記物的理化特性，標記物的穩定性好。本法具有靈敏度高（可達pg/ml水平）、線性範圍寬、反應時間短等特點。