DEAE-纖維素

用於柱色譜分析等方面的纖維素

小離子電量:0.88~1.08meg/dg(dg=dry gram,千克重)。正常PH範圍:2~9.5,蛋白容積:425mg/dg(蛋白體積是指0.01M ph8.5磷酸緩衝液—牛血清白蛋白),蛋白容積/柱體積:60mg/ml每升所需的離子交換劑㎏,柱床體積:0.19(離子交換劑重量的數字考慮到溶脹,容易去除及使用過程中離子離子交換剩餘顆粒),填料密度的狀態為0.05M PH7.5磷酸緩衝液。

概述


性狀:乾燥纖維狀
用途:用於柱色譜分析,用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等,陰離子交換填料
保存:常溫乾燥封袋保存

使用方法


DEAE—纖維素的活化
稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹后DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。抽干,改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用無離子水漂洗,使pH至8左右(用pH試紙檢查)。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩衝液,浸泡平衡后使用。
DEAE—纖維素的再生
用過的離子交換劑可以反覆使用,使其恢復原狀的方法俗稱“再生”。再生並非每次用酸、鹼反覆處理,通常只要“轉型”處理即可。所謂轉型就是使交換劑帶上所希望的某種離子,如希望陽離子交換劑帶上NH+4則可用NH4OH浸泡,如希望陰離子交換劑帶上Cl—則用NaCl溶液處理。本實驗中DEAE—纖維素在酸鹼處理后,用0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩衝溶液浸泡即可轉型,以HPO4取代DEAE中的OH—。一般由於DEAE—纖維素使用后因帶有大量雜蛋白,所以再生時,先用0.5mol/L NaOH浸洗,用去離子水洗至pH8左右,再轉型,即可再使用。

保存方法


介質使用過後,再生,只有介質保存於20%的乙醇中,存放4℃,目的是防止介質滋生細菌。