重組乙型肝炎疫苗

重組乙型肝炎疫苗

拼音名：Chongzu Yixingganyan Yimiao

(1)本疫苗注射時要充分搖勻。

(2)注射部位為上臂三角肌肌內。

(3)新生兒第1針在出生后24小時內注射，1個月及6個月後注射第2、3針；其他人群免疫程序為第0、1、6個月，劑量均為5ug/支。

【製法】取國家批准的重組酵母乙型肝炎疫苗的原始菌種，經一代擴增，製成生產菌種，逐級擴增後接種於發酵罐，在適宜溫度和時間內進行三級發酵，收集細胞，經破碎，吸附粗提，疏水色譜法精提乙型肝炎表面抗原，再經硫氰酸鹽處理，除菌濾過，甲醛滅活，氫氧化鋁吸附等，加入硫柳汞作為防腐劑。

取國家批准的重組CHO乙型肝炎疫苗的細胞株，用靜置培養或旋轉法培養細胞，當乙型肝炎表面抗原的分泌量達到每1.0mg/L時，收穫培養液，經硫酸銨鹽析，2～3次密度梯度離心和色譜法純化后，再經濃縮，除菌濾過，甲醛滅活，氫氧化鋁吸附等，加硫柳汞作為防腐劑，分裝製成。

【鑒別】取本品，照《中國生物製品規程》酶聯免疫吸附法，與已知乙型肝炎表面抗體確證其為乙型肝炎表面抗原。

【檢查】照《中國生物製品規程》規定的方法檢查如下項目。

純度 不得低於98%。

氫氧化鋁 每1ml不得過1mg。

硫柳汞 不得過0.01%。

甲醛 不得過0.01%。

異常毒性 取本品，依法檢查，應符合規定。

熱原 取本品，依法檢查，應符合規定。

無菌 取本品，用直接接種法檢查，應符合規定。

【效價測定】取本品，照《中國生物製品規程》測定，應符合規定。

酵母乙型肝炎疫苗的ED50不得過1.5μg。體外相對效力試驗抗原含量與參比苗的抗原比值不低於0.5。

CHO乙型肝炎疫苗的ED50與參比苗的ED50比值不低於1.0。

【類別】亞單位疫苗。

【規格】酵母乙型肝炎疫苗 0.5ml:5μg

CHO乙型肝炎疫苗 1ml:10μg

【貯藏與效期】在2～8℃的暗處保存。有效期2年。

血源乙肝疫苗經過十年上億人份人群接種，證明具有良好的安全性的免疫原性，但存在對生產者和獻血者健康有潛在危險性，生產成本高等缺陷，我國已經完成同重組乙肝疫苗對血源疫苗的替代工作。

重組乙肝疫苗主要分為酵母，（釀酒酵母和甲基營養型酵母）以及中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary cell,CHO）表達疫苗。

釀酒酵母（Saccharomyces cervisae）

1982年Valenzuela首先在釀酒酵母中成功表達乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），1986年9月美國默克公司的重級酵母乙肝疫苗首次取得專利並得到美國FDA的批准。1989年7月比利時史克比成公司的另一重組酵母乙肝炎疫苗也取得專利。重組酵母乙肝疫苗的生產廠家除默克公司，史克公司外，我國北京天壇生物，深圳康泰公司也大量生產該種疫苗。其優點為：酵母為低等真核微生物，易於在營養成份簡單的培養基中高密中發酵培養，利用工業化生產，表達量高，世界上大規模生產和上市的疫苗大多數由該表達系統製備而成。

共有4種表達系統。甲基營養型酵母生產HbsAg具有培養基廉價，目的基因與酵母染色整合的優點，不僅可克服質粒丟失，還可提高表達量。漢遜酵母（Hansenula Polymorpha，H.P.）和畢赤酵母（Pichia Pastoris，P.P.）系統已應用於工業化生產。已上市的釀酒酵母和甲基營養型酵母表達乙肝疫苗為含HbsAg成份的疫苗。

研究證明：國產血源乙肝疫苗的保護效果至少維持9-10年，國產重組乙肝疫苗（主要為酵母疫苗）的免疫效果和免疫持久性如何，是人們關心的重點。因為乙肝病毒缺乏易感動物模型，乙肝疫苗的免疫效果考核只能應用人體考核來評價，既往研究證明應用乙肝苗阻斷HbsAg、HbeAg雙陽性母親的新一兒傳播HBV是評價乙肝疫苗的效力的最直接指標，且1-10歲兒童對乙肝疫苗反應較好。我們選擇新生兒和兒童作為疫苗考核對象，進行國產酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究。階段結果報告如下：

新生兒：

（1）母嬰傳播阻斷保護率：應用6批國產量5 μg酵母疫苗對163例HbsAg，HbeAg雙陽性母親的新生兒進行母嬰傳播阻礙斷效果考核，結果保護率在81.48-92.07%之間，遠高於文獻報道的10 μg（59.2%）和20 μg（74.3%）血源乙肝疫苗，與30 μg血源乙肝疫苗的保護率(85.1%)相當，而進口5 μg M苗(46例,)10 μgA苗(58例)和10 μg S酵母疫苗(30例)的保護率分別為90.33%、86.59%和92.58%。表明國產酵母疫苗免疫效果達到國外同類產品和30 μg國產血源乙肝疫苗的保護水平。

（2）抗體GMT：未發現第一針免后3、9、12月時，HbsAg、HbeAg雙陽性孕婦所生新生兒的抗體GMT與HbsAg單陽性及健康孕婦所生新生兒抗體GMT有顯著差異。

小學生：

（1）抗體陽性率：第一針免后1年時，進口酶母疫苗，國產酵母疫苗和國產CHO疫苗抗體陽性率在第一針免疫后3、9、12月均無顯著差異。

（2）抗體CMT比較：第一針免后一年時，進口酶母疫苗（10 μg）和國產CHO疫苗（10 μg）抗體GMT峰值較高，國產酵母疫苗（5 μg）較低。

對應用0、1、6月程序免疫的小學生進行了隨訪觀察。隨訪年及3年時，2批國產酵母疫苗具有保護性抗體（10mIU/ml）的陽轉率分別為81.48%；68.66%和92.11%；74.14%，而進口A和M疫苗分別為90.38%；69.56%和93.10%；78.05%。2批國產酵母疫苗抗體GMT分別為123.99；146.10和92.11；83.52，A和M疫苗分別為120.56；67.07和145.75；74.62。

對應用0、1、2月程序免疫的400名小學生進行了免后4年的隨訪觀察，結果3批國產酵產疫苗陽性率分別為87.50%；77.33%；79.49%，而對照M（5 μg）疫苗為91.89,抗體GMT分別為：65.57；71.40；59.20和74.84。由抗體峰值6月至4年時，3批國產疫苗抗體陰轉率分別為7.2；5.26和13.79%，對照M苗為5.17%。無論抗體陽性一率，抗體GMT以及4年抗體陰轉率，3批國產疫苗和M苗間增無顯著差異。

我們隨該結果表明，2批國產酵母乙肝疫苗免后5年時抗體陽性率已降至70%以下，而同期血源乙肝抗體陽性率在81-69%之間。

表明：國產酵母重組乙肝疫苗的免疫效果達到了進口酵疫苗的免疫水平，但抗體陽性率和抗體GMT下降較快，考慮當前乙肝疫苗供應充足，酵母疫苗的加強接種應提到議事日程。

（一）聯合疫苗：

聯合疫苗具有減少注射針次、接種副反應及提高接種覆蓋率的優點。已上市的聯合疫苗如SB公司的百白破-乙肝四聯疫苗、甲-乙肝聯合疫苗，MSD公司的流感嗜血桿菌乙型肝炎偶聯疫苗等。我國全細胞百白破-乙肝四聯疫苗和無細胞百白破-乙肝四聯疫苗已完成臨床前研究，甲-乙肝聯合疫苗的開發研究制也在進行。

（二）治療性疫苗

1）現有疫苗增加前S基因或替換現有鋁佐劑

研究開發植物來源、細胞因子、人工合成和可生物降解的高分子聚合物等佐劑，目的在於提高細胞免疫效果，國外已有製品進行臨床研究。

2） DNA疫苗：可以肌肉細胞內表達乙肝表面抗菌原，誘導細胞免疫應答，同時具有長期表達抗原，可減少加強免疫及成本低，儲存方便的特點。

3）增大劑量酵母疫苗（10 μg/支）的生產：

我國現階段生產和使用的酵母乙肝疫苗均為5 μg/支，由於以下原因：①、實際應用反映5 μg酵母疫苗的抗體陽性率和滴度較低。②、我們對接種5 μg疫苗的120例成人進行檢測，發現免后抗體陽性率和滴度較低，第二針免后1個月時抗體陽性率為70.00%，抗體GMT為9.83；完成全程免疫后1個月時抗體陽性率為80.77%，抗體GMT為151.46。③、MSD疫苗成人劑量為10 μg/支。目前國內正進行10 μg疫苗的臨床考核。此外還應結合臨床（血透析，腎臟移植等）和實際需要，生產不同劑量的乙肝疫苗。

（三）對現有疫苗生產線的生產能力進一步開發，以及研製高表達量的新一代重組乙肝疫苗，以降低成本，提高疫苗的覆蓋率。

（四）加強疫苗保護機制和免疫持久性的研究。

所有的孕婦在早期產前檢查時應常規檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。乙型肝炎表面抗原陽性的孕婦應在妊娠後期再查乙型肝炎e抗原(HBeAg)。如果乙型肝炎表面抗原為陽性，在分娩前就要準備好乙肝疫苗。同時要問清楚嬰兒出生后能否在24小時內進行疫苗注射，第2針和第3針在什麼地方注射等問題。

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)雙陽性母親的嬰兒，如無異常，應在出生后6—12小時內肌內注射1支高效價乙肝免疫球蛋白，生后1個月再注射1支高效價乙肝免疫球蛋白(≥100單位/毫升)。2、3、6月齡時各注射1支20微克的乙肝疫苗。

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陽性而乙型肝炎e抗原(HBeAg)陰性母親所生新生兒，應在0(出生后24小時內)、1、6個月齡分別以10微克、10微克、10微克的劑量接種乙肝疫苗。在不具備檢查乙型肝炎e抗原(HBeAg)條件的地區，對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陽性母親的新生兒，均應按雙陽性者接種疫苗。

不具備檢查乙型肝炎表面抗原(HBsAg)條件的地區，應對所有新生兒在0、1、6月齡分別以10微克、10微克、10微克的劑量接種疫苗。