農桿菌介導法
農桿菌介導法
農桿菌是普遍存在於土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位，並誘導產生冠癭瘤或髮狀根。根癌農桿菌和髮根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞后，可將T-DNA插入到植物基因組中。因此，農桿菌是一種天然的植物遺傳轉化體系。人們將目的基因插入到經過改造的T-DNA區，藉助農桿菌的感染實現外源基因向植物細胞的轉移與整合，然後通過細胞和組織培養技術，再生出轉基因植株。
轉基因技術的飛速發展為生物定向改良和分子育種提供了一種較佳的方法，並使其成為基因工程和育種的最有效途徑，目前應用較廣泛的轉基因技術有農桿菌介導法、花粉通道法、顯微注射法、基因槍法、離子束介導法等等，其中農桿菌介導法以其費用低、拷貝數低、重複性好、基因沉默現象少、轉育周期短及能轉化較大片段等獨特優點而備受科學工作者的青睞。農桿菌介導法主要以植物的分生組織和生殖器官作為外源基因導入的受體，通過真空滲透法、浸蘸法及注射法等方法使農桿菌與受體材料接觸，以完成可遺傳細胞的轉化，然後利用組織培養的方法培育出轉基因植株，並通過抗生素篩選和分子檢測鑒定轉基因植株後代。
農桿菌介導法
農桿菌介導法
②在信號分子的誘導下，農桿菌向受傷組織集中，並吸附在細胞表面。
③轉移DNA上的毒粒基因被激活並表達，同時形成轉移DNA的中間體。
④轉移DNA進入植物細胞，並整合到植物細胞基因組中。因為單子葉植物不是農桿菌的天然寄主，況且其不能合成起誘導作用的信號分子，所以限制了農桿菌介導法在單子葉植物中的應用。不過近年來大量成功轉化的實例表明，植物、真菌、哺乳動物甚至人類細胞都可以作為農桿菌的受體
農桿菌介導法