抗酸性染色法
菌種鑒定的依據之一
檢查抗酸細菌(如結核桿菌、麻風桿菌、分支杆菌等)的一種特殊染色法。常用的是先以濃石炭酸復紅加溫初染，隨即以鹽酸酒精或硫酸水脫色，最後用美藍液復染。如屬於抗酸細菌，呈紅色，因菌體有抗禦酸類脫色的特性，故能保持初染的紅色。如屬於一般細菌，則呈藍色，因菌體無抗酸能力，初染的紅色被酸類所脫去，故被複染成藍色。分支杆菌的細胞壁有特殊的脂類物質——分枝菌酸，分支菌酸厚且呈蠟質，可以抵禦酸性酒精的脫色作用。
本法亦可作為菌種鑒定的依據之一。此類型菌體用酸液處理后，其因特殊構造成分不易被脫色，如Mycobacteria、Actinomycetes等菌體，故稱抗酸菌。
了解抗酸性染色之化學原理
練習染色法，並將細菌分為抗酸性與非抗酸性菌。
多數之細菌可藉單染法或革蘭氏染色法而著色，但有少數菌屬尤以分支杆菌屬（Mycobacterium）中之細菌則需藉抗酸性染色法始能觀察。如此屬中之結核桿菌（Mycobacterium tuberculosis）與痲瘋桿菌（Mycobacterium leprae）乃人類之致病性菌，對於此類之鑒定，本染色法極具有診斷價值。
分支杆菌與其它菌不同，主要系因其細胞壁含有厚層臘質，染料不易滲透。但一經滲透，也不為酸性酒精所脫色。因富此特色，故稱為抗酸性，其它菌則易為酸性酒精所脫色，乃屬於非抗酸性。茲將本法所採用染色劑，分別簡述如下：
乃石炭酸復紅，因多數之分支杆菌對一般染料如甲基藍與結晶紫缺乏感受性，故於復紅中含有石炭酸，如此可使染料溶於細胞壁之脂質成分內，並使滲透而保留紅色。加熱有助於滲透作用，使石炭酸復紅經細胞壁之脂質而進入胞漿內。齊耳-倪耳生二氏法之改良法則不需加熱，而於染液中加入潮濕劑，藉以降低細胞壁與染色液間的表面張力，初染后菌體成紅色。
乃酸性酒精（3% HCl+95%乙醇）。脫色前塗抹先使冷卻，俾含臘質之細胞物質硬化。加入酸性酒精時，初因初染劑較脫色劑更易溶於該細胞臘質，故抗酸性菌對脫色具抗性，因此保留初染劑而成紅色，非抗酸性菌因缺乏細胞臘質，脫色時初染劑易移去而成無色。
石炭酸復紅，酸性酒精及甲烯藍。
拭凈玻片。
以無菌操作，每菌分別製備一抹片。於空氣中自然乾燥，並加以熱固定。
將塗抹覆以石炭酸復紅，置溫熱之電熱板上，使蒸熱約5分鐘。注意勿使染液蒸發，需要時補充之。並調節電熱板至適宜溫度，以防沸騰。若用不加熱法，可將塗抹覆以含有Turditol之石炭酸復紅，染色3~5分鐘。
將玻片放置冷卻，而後以蒸餾水輕洗之。
逐滴加入酸性酒精脫色之，至無石炭酸復紅洗出即可。
以甲烯藍復染2分鐘。
以蒸餾水輕洗之。
以吸水紙拭乾，並用油鏡觀察。