常用染色劑

常用染色劑

在我們做生物醫學實驗或者某些物理化學實驗時,為了更好地觀察到實驗效果,通常會選用合理的染色劑,在選擇適當的染色劑后,我們就能夠很好地觀察到預期的實驗現象或結果。染色劑依據來源可分為天然染色劑和人工合成染色劑,各種不同的實驗選擇不同的染色劑,同一種染色劑也可以用不同的配方進行調配製成。

性能


天然染料

1、蘇木精 蘇木精是從南美的蘇木(熱帶豆科植物)干枝中用乙醚浸制出來的一種色素,是最常用的染料之一。蘇木精不能直接染色,必須暴露在通氣的地方,使他變成氧化蘇木精(又叫蘇木素)后才能使用,這叫做“成熟”。蘇木精的“成熟”過程需時較長,配置后時間愈久,染色力愈強。被染材料必須經金屬鹽作媒劑作用后才有著色力。所以在配製蘇木精染劑時都要用媒染劑。常用的媒染劑有硫酸鋁銨、鉀明礬和鐵明礬等。
蘇木精是淡黃色到銹紫色的結晶體,易溶於酒精,微溶於水和甘油,是染細胞核的優良材料,他能把細胞中不同的結構分化出各種不同的顏色。分化時組織所染的顏色因處理的情況而異,用酸性溶液(如鹽酸—酒精)分化后呈紅色,水洗后仍恢復青藍色,用鹼性溶液(如氨水)分化后呈藍色,水洗后呈藍黑色。
2、洋紅 洋紅又叫胭脂紅或卡紅。一種熱帶產的雌性胭脂蟲乾燥后,磨成粉末,提取出蟲紅,再用明礬處理,除去其中雜質,就製成洋紅。單純的洋紅不能染色,要經酸性或鹼性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸,鹼性溶液有氨水、硼砂等。
洋紅使細胞核的優良染料,染色的標本不易褪色。用作切片或組織塊染都適宜,尤其適宜於小型材料的整體染色。用洋紅配成的溶液染色后能保持幾年。洋紅溶液出現渾濁時要過濾后再用。

人工染料

人工染料,即苯胺染料或煤焦油染料,種類很多,應用極廣。它的缺點是經日光照射容易褪色,苯胺藍、亮綠、甲基綠等更易褪色。在製片中注意掌握酸鹼度,並避免日光直射,也能經幾年不褪色。

主要配方


1、酸性品紅 酸性品紅是酸性染料,呈紅色粉末狀,能容於水,略溶於酒精(0.3%)。他是良好的細胞制染色劑,在動物製片上應用很廣,在植物製片上用來染皮層、髓部等薄壁細胞和纖維素壁。他跟甲基綠同染,能顯示線粒體
組織切片在染色前先浸在帶酸性的水中,可增強它的染色力。酸性品紅容易跟鹼起作用,所以染色過度,易在自來水中褪色。
2、剛果紅 剛果紅是酸性染料,呈棗紅色粉末狀,能溶於水和酒精,遇酸呈藍色。他能作染料,也用作指示劑。他在植物製片中常作為蘇木精或其他細胞染料的襯墊劑。他用來染細胞質時,能把膠制或纖維素染成紅色。在動物組織製片中用來染神經軸、彈性纖維、胚胎材料等。剛果紅可以跟蘇木靜作二重染色,也可用作類澱粉染色,由於他能溶於水和酒精,所以洗滌和脫水處理要迅速。
3、甲基藍 甲基藍是弱酸性染料,能溶於水和酒精。甲基藍在動植物的製片技術方面應用極廣。他跟伊紅合用能染神經細胞,也是細菌製片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生動物的活體染色劑。甲基藍極易氧化,因此用他染色后不能長久保存。
4、固綠 固綠是酸性染料,能溶於水(溶解度為4%)和酒精(溶解度為9%)。固綠是一種染含有漿質的纖維素細胞組織的染色劑,在染細胞和植物組織上應用極廣。他和蘇木精、番紅並列為植物組織學上三中最常用的染料。
5、蘇丹Ⅲ 蘇丹Ⅲ是弱酸性染料,呈紅色粉末狀,易溶於脂肪和酒精(溶解度為0.15%)。蘇丹Ⅲ是脂肪染色劑。
6、伊紅 這類染料種類很多。常用的伊紅Y,是酸性染料,呈紅色帶藍的小結晶或棕色粉末狀,溶於水(15攝氏度是溶解度達44%)和酒精(溶於無水酒精的溶解度為2%)。伊紅在動物製片中廣泛應用,是很好的細胞質染料,常用作蘇木精的襯染劑。
7、鹼性品(復)紅 鹼性品紅鹼性染料,呈暗紅色粉末或結晶狀,能溶於水(溶解度1%)和酒精(溶解度8%)。鹼性品紅在生物學製片中用途很廣,可用來染色膠原纖維、彈性纖維、嗜復紅性顆粒和中樞神經組織的核質。在生物學製片中用來染維管束植物的木質化壁,又作為原球藻、輪藻的整體染色。在細菌學製片中,長用來鑒別結核桿菌。在 爾根氏反應中用作組織化學試劑,已核查脫氧核糖核酸
8、結晶紫 結晶紫是鹼性染料,能溶於水(溶解度9%)和酒精(溶解度8.75%)。結晶紫在細胞學、組織學和細菌學等方面應用極廣,是一種優良的染色劑。他是細胞核染色常用的,用來顯示染色體的中心體,並可染澱粉、纖維蛋白、神經膠質等。凡是用番紅和蘇木精或其他染料染細胞核不能成功時,用它能得到良好的結果。用番紅和結晶紫作染色體的二重染色,染色體染成紅色,紡錘絲染成紫色,所以也是一種顯示細胞分裂的優良染色劑。用結晶紫染纖毛,效果也很好。用結晶紫染色的切片,缺點是不易長久保存。
9、龍膽紫 龍膽紫是混合的鹼性染料,主要是結晶紫和甲基紫的混合物。在必要是,龍膽紫能跟結晶紫互相替用。醫藥上用的紫藥水,主要成分是甲基紫,需要時能代替龍膽紫和結晶紫。
10、中性紅 中性紅是弱鹼性染料,呈紅色粉末狀,能溶於水(溶解度4%)和酒精(溶解度1.8%)。它的鹼性溶液中呈現黃色,在強鹼性溶液中呈藍色,而在弱酸性溶液中呈紅色,所以能用作指示劑。中性紅無毒,常做活體染色的染料,用來染原生動物和顯示動植物組織中活細胞的內含物等。陳久的中性紅水溶液,用作顯示尼爾體的常用染料。
11、番紅 番紅是鹼性染料,能溶於水和酒精。番紅是細胞學和動植物組織學生常用的染料,能染細胞核、染色體和植物蛋白質,示維管束植物木質化、木栓化和角質化的組織,還能染孢子囊。
12、亞甲藍美藍 亞甲藍或美藍是鹼性染料,呈藍色粉末狀,能溶於水(溶解度9.5%)和酒精(溶解度6%)。亞甲藍是動物學和細胞學染色上十分重要的細胞核染料,其優點是染色不會過深。
13、甲基綠 甲基綠是鹼性染料。它是綠色粉末狀,能溶於水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基綠是最有價值的細胞和染色劑,細胞學上常用來染染色質,跟酸性品紅一起可作植物木質部的染色。
把硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中,邊加邊攪拌,如果產生沉澱,要過濾。本尼迪克溶液配製后能長期使用(存放時間較久而產生沉澱是,取上層清液使用,不必重新配製)。
本尼迪克溶液用來測試食物、血液和尿中的葡萄糖,可測出0.15 ~0.20%的葡萄糖。這種溶液跟未知物同加熱時,如果未知物中有葡萄糖,會形成紅色的氧化亞銅沉澱物。

裴林溶液


(1)把34.5克硫酸銅溶於500毫升蒸餾水中。
(2)把125克氫氧化鉀(鈉)和173克酒石酸鉀鈉溶解在500毫升蒸餾水中。
上述兩種溶液應分別保存。在檢測葡萄糖時,使他們等量的混合,加入待測物的試管內,加熱到沸騰。如果有葡萄糖,會形成紅色的氧化亞銅沉澱物。
2、檢查澱粉的試劑
魯哥氏(Lugol’s)溶液(碘液)
取6克碘化鉀溶於20毫升蒸餾水中,攪拌到溶解后,加入4克碘,等碘充分溶解,在加入80毫升蒸餾水,貯存在棕色試劑瓶內。
碘液用來測試食物樣品或葉片中的澱粉,也用作染色劑,例如可染色鞭毛、纖毛和細胞核等。
3、檢查蛋白質的試劑

米倫試劑


配方一

在60毫升濃硝酸(比重1.42)中溶解40克汞(水浴加溫可助溶),溶解后加入兩倍體積的蒸餾水稀釋,靜置澄清后,取它上層的清液備用。這種試劑可長期保存。
在待測物中加入少量米倫試劑,加熱,如果有蛋白質,會出現紅色。這種試劑不能用來測定尿中的蛋白質。

配方二

分別配製10%氫氧化鈉溶液和1%硫酸銅溶液。
在3毫升待測物中加入1毫升10%氫氧化鈉溶液和1滴1%硫酸銅溶液。如果有蛋白質,會出現紫色反應。
4、檢查脂肪的試劑
蘇丹Ⅲ(Ⅳ)酒精飽和溶液
取0.2克蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ),放入純酒精中,加熱,使它充分溶解,成為飽和酒精溶液,過濾后密閉在試劑瓶內保存備用。

酚酞試劑


配方一

酚酞試劑 取1克酚酞,溶解在100毫升60%的酒精溶液里,裝在試劑瓶內密閉保存。
酚態試紙 取1克酚酞,溶解在100毫升95%酒精溶液里,加入00毫升蒸餾水。把綠紙條放入酚酞溶液中浸濕后,取出,放在無氨氣影響處晾乾。
酚泰試劑(試紙) pH值變色範圍8.2~10,在酸性和中性溶液中都無色,再鹼性溶液中呈深紅色。

配方二

取市售石蕊1克,放在80毫升10%酒精溶液中攪拌,使它溶解,然後過濾。把濾液分成兩份。1份滴入稀磷酸或稀硫酸,到出現紅色為止。另1份滴入稀氫氧化鈉溶液,到出現藍色為止。在上述製備的溶液中分別浸濕濾紙條,隨後取出濾紙條,放在蔽光處、無酸鹼性氣體影響的地方晾乾,即的紅、藍兩種石蕊試紙
紅石蕊試紙在鹼性溶液中變藍,藍石蕊試紙在酸性溶液中變紅。
6、檢查二氧化碳的試劑
檢查二氧化碳的試劑,可用溴代麝香草酚藍溶液和石灰水。

酚藍溶液


配方一

取0.1克溴代麝香草酚藍,溶解在100毫升蒸餾水裡,滴入少量0.1%氫氧化鉀溶液,使它成為弱鹼性溶液而呈藍色。
溴代麝香草酚藍溶液pH值變色範圍是6.0(黃)~7.6(藍)。待測物中如果有二氧化碳,會形成碳酸而使溶液變成黃色。

配方二

在蒸餾水中加入生石灰(氧化鈣),變加邊攪拌,直到加入的生石灰不再溶解,呈飽和狀態時為止。在石灰水澄清后,傾出上層清液,用濾紙過濾,放在密閉瓶內保存。
如果測定的物質中有二氧化碳,會生成碳酸鈣,使石灰水變渾濁。
7、檢查細胞生活力的試劑
檢查細胞有無生活力,可用中性紅甲基藍試劑。配製的方法是先分別配製1%中性紅溶液和1%甲基藍溶液,這兩種溶液各取1份混合,用來鑒定細胞的死活。該試劑使活細胞的液泡染上紅色,而使死細胞全部染成藍色

分離液


1、肌細胞分離液
配方一 馬克凱郎(Maccallum)液
取1份濃硝酸、2份甘油、3份水,混合后就得到馬克凱郎液。
把新鮮的肌肉組織小塊(橫紋肌、心肌和平滑肌)投入這種溶液里浸漬,分離時間需1~3日。這種溶液尤其適於分離橫紋肌核心肌細胞。
配方二 氫氧化鉀溶液
取35克氫氧化鉀,放在100毫升蒸餾水中,加熱,使它完全溶解后,在室溫下冷卻。
把新鮮的肌肉組織塊投入氫氧化鉀溶液中,浸泡15~30分鐘后,肌細胞便可分離。
2、上皮細胞分離液
稱取58.44克氯化鈉,用蒸餾水溶解,再稀釋到1000毫升,加入2毫升福爾馬林。
這種溶液是很好的上皮細胞分離液,分離很迅速,而且能保護纖細的上皮細胞纖毛。小腸和氣管的上皮組織小塊,放在此溶液里2小時即可分離,口腔和皮膚上皮組織小塊的細胞分離一般需3日左右。
配方二 水和氯醛溶液
稱取5克水和氯醛,用蒸餾水溶解,再稀釋到100毫升,就得到5%水合氯醛溶液
從洗凈的動物胃、腸和口腔內壁上取下上皮組織一小塊,投入以上溶液中,浸泡24~48小時。
3、神經細胞分離液
配方一 可以用上皮細胞分離液配方一福爾馬林—氯化鈉溶液來分離神經細胞(見2)。
配方二 硼酸生理鹽水溶液
在生理鹽水溶液內加入一些硼酸,攪拌到不再溶解時為止,使成為飽和溶液。
把脊椎灰質和腦皮質部位的神經組織一小塊投入這種溶液中分離。
4、植物莖細胞分離液
傑弗里氏(Jeffrey’s)液
取等量的10%鉻酸溶液和10%硝酸溶液混合,成鉻酸—硝酸溶液。
這種溶液用來分離木本植物莖部的導管、管胞、篩管、伴胞和韌皮纖維等。把材料切成小塊放在水裡,加熱煮沸,冷卻后再加熱煮沸。這樣重複幾次,到材料全部沉於水底后,投入分離液內,分離時間是24~48小時。
5、植物根尖細胞分離液
配方一 鹽酸—酒精溶液
在1份95%酒精中慢慢的加入1份濃鹽酸,即成鹽酸—酒精溶液,裝瓶密閉保存。
把植物根尖部位截下一小段,投入以上溶液中分離。
配方二 4%鹽酸溶液
配製4%鹽酸溶液。
截下植物根尖部位,投入盛有4%鹽酸溶液的小燒杯內,在60攝氏度溫水中隔水溫熱1~2分鐘,使根尖軟而不酥,這時分離效果最好。
6、植物纖維分離液
取10克氫氧化鈉(或氫氧化鉀),溶解在90毫升水裡,製成10%氫氧化鈉(或氫氧化鉀)溶液,放在瓶里密閉保存。
把植物莖縱切成細條,剪成小段后,投入分離液內。
7、植物細胞質壁分離液
配方一 30%蔗糖溶液
取30克蔗糖,溶解在70毫升蒸餾水裡,裝瓶備用。
配方二 5%氯化鈉溶液
取5克食鹽,溶解在95毫升蒸餾水裡,裝瓶備用。
配方三 5%硝酸鉀溶液
取5克硝酸鉀,溶解在95毫升蒸餾水裡,裝瓶備用。

生理鹽水


配方一 各種動物需用的生理鹽水
哺乳類 需用生理鹽水濃度是0.9%。稱取0.9克氯化鈉,溶解在少量蒸餾水中,稀釋到100毫升。
鳥類 需用的生理鹽水濃度是0.75%。稱取0.75克氯化鈉,溶解後用蒸餾水稀釋到100毫升。
兩棲類 需用的生理鹽水濃度是0.65%。稱取0.65克氯化鈉,溶解後用蒸餾水稀釋到100毫升。
配方二 任氏(Ringer’s)生理鹽水
氯化鈉 6.5克 碳酸氫鈉 0.2克
氯化鉀 0.14克 磷酸二氫鈉 0.01克
氯化鈣 0.12克
先把氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉分別溶解在少量蒸餾水中,混合後用蒸餾水稀釋到980毫升。然後取氯化鈣溶解在20毫升蒸餾水中,把氯化鈣溶液逐滴加入到上述溶液內,邊滴、邊攪拌,以免產生不溶解的磷酸鈣沉澱。
此溶液用於變溫動物,尤其常用於兩棲類。
配方三 樂氏(Locke’s)生理鹽水
氯化鈉 9.0克 碳酸氫鈉 0.1~0.3克
氯化鉀 0.42克 氯化鈣 0.24克
把氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉分別用少量蒸餾水溶解,混合后加蒸餾水到980毫升。把氯化鈣溶解在20毫升蒸餾水裡,逐滴加入上述溶液中。
以上溶液用於恆溫動物,尤其常用於哺乳類。

培養液


1、人造海水
配方一
氯化鈉( ) 24.72克
氯化鉀( ) 0.67克
氯化鈣( ) 1.36克
氯化鎂( ) 4.66克
硫酸鎂( ) 6.29克
碳酸氫鈉( ) 0.18克
蒸餾水 加到1升
把上述各種鹽溶解在少量蒸餾水中,再加入碳酸氫鈉,最後用蒸餾水稀釋到1000毫升。
配方二
氯化鈉 45.0克 硫酸鎂 0.1克
氯化鎂 5.0克 氯化鐵(1%溶液) 1滴
先把硫酸鎂、磷酸一氫鉀、氯化鐵用少量蒸餾水溶解,加蒸餾水到980毫升。隨後取硝酸鈣溶解在20毫升蒸餾水裡,把此溶液逐滴加到上述溶液內,裝瓶保存。
配方二 克諾普氏(Knop’s)溶液
硝酸鉀 1克 硫酸鎂 1克
磷酸二氫鉀 1克 硝酸鈣 3克
先把硝酸鉀、硫酸鎂、磷酸二氫鉀用少量蒸餾水溶解,加蒸餾水到980毫升。隨後取硝酸鈣,用20毫升蒸餾水溶解,加入到上述溶液內。溶液灰形成白色沉澱,在使用是必須搖動。
在以上溶液中加入蔗糖溶液(1~4%),能刺激某些藻類形成遊動孢子。該液用於培養綠藻
3、植物無土培養液
配方 霍格倫德(Hoagland)和斯納德(Snyder)液
硝酸鈣 0.821克 硝酸鉀 0.506克
磷酸二氫鉀 0.136克 硫酸鎂 0.120克
酒石酸鐵 0.005克
把上述鹽類溶解在少量蒸餾水裡,然後稀釋到1000毫升。

培養基


1、細菌培養基
配方一 牛肉膏瓊脂培養基
牛肉膏 0.3克 蛋白腖 1.0克
氯化鈉 0.5克 瓊脂 1.5克
水 1000毫升
在燒杯內加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白腖和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號后,放在火上加熱。待燒杯內各組分溶解后,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解後補足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調整pH值到7.2~7.6,分裝在各個試管里,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌30分鐘。
配方二 馬鈴薯培養基
取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細細剁成肉末后,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白腖。在燒杯上做好記號,煮沸,轉用文火燉2小時。過濾,濾出的肉末乾燥處理,濾液pH值調到7.5左右。每支試管內加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,備用。
配方四 根瘤菌培養基
葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克
碳酸鈣 3克 硫酸鎂( ) 0.2克
酵母粉 0.4克 瓊脂 20克
水 1000毫升 1%結晶紫溶液 1毫升
先把瓊脂加水煮沸溶解,然後分別加入其他組分,攪拌使溶解后,分裝,滅菌,備用。
2、放線菌培養基
配方一 澱粉瓊脂培養基(高氏培養基)
可溶性澱粉 2克 硝酸鉀 0.1克
磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克
硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克
瓊脂 2克 水 1000毫升
先把澱粉放在燒杯里,用5毫升水調成糊狀后,倒入95毫升水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解后,補足失水。調整pH值到7.2~7.4,分裝后滅菌,備用。
配方二 麵粉瓊脂培養基
麵粉 60克 瓊脂 20克
水 1000毫升
把麵粉用水調成糊狀,加水到500毫升,放在文火上煮30分鐘。另取500毫升水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調勻,補充水分,調整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。
配方一 薩市(Sabouraud’s)培養基
蛋白腖 10克 瓊脂 20克
麥芽糖 40克 水 1000毫升
先把蛋白腖、瓊脂加水后,加熱,不斷攪拌,待瓊脂溶解后,加入40克麥芽糖(或葡萄糖),攪拌,使它溶解,然後分裝,滅菌,備用。
本培養菌是培養許多種類真菌所常用的。
配方二 馬鈴薯糖瓊脂培養基
把馬鈴薯洗凈去皮,取200克切成小塊,加水1000毫升,煮沸半小時后,補足水分。在濾液中加入10克瓊脂,煮沸溶解后加糖20克(用於培養黴菌的加入蔗糖,用於培養酵母菌的加入葡萄糖),補足水分,分裝,滅菌,備用。
把這培養基的pH值調到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖還可用來培養放線菌芽孢桿菌
配方三 黃豆芽汁培養基
黃豆芽 100克 瓊脂 15克
葡萄糖 20克 水 1000毫升
洗凈黃豆芽,加水煮沸30分鐘。用紗布過濾,濾液中加入瓊脂,加熱溶解後放入糖,攪拌使它溶解,補足水分到1000毫升,分裝,滅菌,備用。
把這培養基的pH值調到7.2~7.4,可用來培養細菌和放線菌。
配方四 豌豆瓊脂培養基
豌豆 80粒 瓊脂 5克
水 200毫升
取80粒干豌豆加水,煮沸1小時,用紗布過濾后,在濾液中加入瓊脂,煮沸到溶解,分裝,滅菌,備用
4、食用菌菌種培養基
配方一 馬鈴薯—蔗糖--瓊脂培養基
20%馬鈴薯煮汁 1000毫升
蔗糖20克 瓊脂18克
把馬鈴薯洗凈去皮后,切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200克,加水1000毫升,煮沸20分鐘后,過濾。在濾汁中補足水分到1000毫升,即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,補足水分,分裝,滅菌,備用。使用該培養基對pH值要求不嚴格,可以不測定。
配方二 綜合馬鈴薯培養基
20%馬鈴薯煮汁 1000毫升
磷酸二氫鉀3克 硫酸鎂1.5克
葡萄糖20克 維生素 10毫克
瓊脂18克
先配製20%馬鈴薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各種組分,加熱溶解後補足水分,調整pH值到6。分裝,滅菌,備用。
該培養基用於培養和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。

染色劑


1、細菌染色劑
配方一 齊氏(Ziehl)石炭酸品紅染液
甲液 取石炭酸5克,溶解在95毫升蒸餾水中。
乙液 取0.3克鹼性品紅,放入研缽中研磨,逐漸加入10毫升95%酒精,繼續淹沒,使它溶解。
將甲液和乙液混合后,搖勻,過濾,裝瓶,備用。
配方二 羅氏(Loeffler’s)美藍染液
甲液 取5克美藍,溶於100毫升95%酒精中,製成美藍—酒精飽和液。
乙液 取氫氧化鉀0.01克(或1%氫氧化鉀溶液1毫升),溶液也可用於放線菌染色,0.1%濃度可用於酵母菌染色。
配方三 革蘭氏(Gram’s)染液
用此液染色因先用甲液染色,再加乙液固定,用丙液處理,最後用丁液復染。四種液體的配方如下:
甲液(結晶紫液)
(1)結晶紫2克 95%酒精 20毫升
(2)草酸銨0.8克 蒸餾水 80毫升
使用錢江(1)、(2)液相混,靜置48小時后使用。
乙液(碘液)
碘1克 碘化鉀2克 蒸餾水 300毫升
將碘化鉀溶於少量蒸餾水中,然後加入碘,待碘全部溶解后,加水稀釋至300毫升。
丙液 95%酒精溶液
丁液(番紅花紅液)
2.5%番紅花紅酒精溶液 10毫升 蒸餾水 100毫升
2、細菌特殊染色劑
配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后,用乙液復染。
甲液 取5克孔雀綠,加入少量蒸餾水,使它溶解后,用蒸餾水稀釋到100毫升,即成孔雀綠染液。
乙液 取番紅花紅0.5克,加入少量蒸餾水,使它溶解后,用蒸餾水稀釋到100毫升,集成番紅花紅復染液。
配方二 莢膜染液 此配方先用甲液染色,後用乙液復染。
甲液 取結晶紫0.1克,溶於少量蒸餾水后,加水稀釋到100毫升,再加入0.25毫升冰醋酸一結晶紫染液。
乙液 取硫酸銅( )31.3克,溶於少量蒸餾水后,加水稀釋到100毫升,即成20%硫酸銅脫色劑。
配方三 鞭毛染液
甲液
飽和明礬溶液 2毫升 5%石炭酸溶液 5毫升
20%丹寧酸溶液 2毫升
乙液
鹼性品紅11克 95%酒精 100毫升
使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混,過濾即可。
3、植物細胞壁染色劑
配方一 纖維素細胞壁染液(Ⅰ)
取固綠0.1克,溶於100毫升95%酒精中,即成0.1%固綠—酒精溶液。
該液能染色纖維素細胞壁,還用於動植物中作漿質染色劑。
配方二 纖維素細胞壁染液(Ⅱ)
氯化鋅20克 碘化鉀6.5克
碘1.5克 蒸餾水加至100毫升
先把氯化鋅溶於少量蒸餾水中,再加入6.5克碘化鉀,在碘完全溶解后,用蒸餾水稀釋到100毫升,即成碘—氯化鋅溶液。
該染液能把細胞壁染成紫色,胞質染成淡黃色,胞核染成棕色。
配方一 纖維素細胞壁染液(Ⅲ)
甲液 取1克碘和1.5克碘化鉀,溶於100毫升蒸餾水中,即成1%碘液。
乙液 取7份硫酸和3份蒸餾水相混,即成66.5%硫酸溶液。
染色時,在材料上滴加甲液,再加一滴乙液,纖維素細胞壁就染成黃色。
配方四 木質化細胞壁染液(Ⅰ)
硫酸化苯胺(或鹽酸話本安) 1份
蒸餾水 70份 95%酒精 30份
硫酸 30份
將上述各組分相混,將細胞材料放入混合液里染色,可是木質化細胞壁呈鮮黃或薑黃色。
配方五 木質化細胞壁染液(Ⅱ)
間苯三酚4~5克,溶於100毫升95%酒精中,即成間苯三酚—酒精液。
先在材料上滴上1滴濃鹽酸,然後滴上間苯三酚—酒精液1滴,木質化的細胞壁就染上櫻紅或紫紅色。
配方六 木質化細胞壁染液(Ⅲ)
取1克番紅,溶於99毫升蒸餾水中,即成1%番紅溶液。
4、細胞質染色劑
配方一 伊紅染液
伊紅染液一般配用水溶液和酒精溶液兩種。
(1)取1克伊紅,溶於99毫升蒸餾水中,即成1%伊紅水溶液(市售紅墨水內含伊紅成分,可以用紅墨水稀釋液來代替本溶液)。
(2)取1克伊紅,溶於99毫升70%酒精中,即成1%伊紅—酒精溶液。
配方二 甲基藍染液
取1克甲基藍,溶於29毫升70%酒精中,加入70毫升蒸餾水,即成1%甲基藍染液。
配方三 亮綠染液
取0.5克亮綠,溶解在100毫升蒸餾水中,即成0.5%亮綠溶液。
5、細胞核染色劑
配方一 甲基綠染液
取1克甲基綠,溶於99毫升蒸餾水中,加入1毫升冰醋酸。本染液能染細胞核,還用來染木質化細胞壁。
配方二 龍膽紫染液
取1克龍膽紫,溶於少量2%醋酸溶液中,加2%醋酸溶液,直到溶液不呈深紫色止。
配方三 美藍(亞甲基藍)染液
取0.5克美藍,溶於30毫升95%酒精中,加100毫升0.01%氫氧化鉀溶液,保存在棕色瓶內。
此溶液能染細胞核,還用來染細菌、血和神經組織等。
配方四 硼砂—洋紅染液
取4克硼砂,溶於96毫升蒸餾水中。再加入2克洋紅,加熱溶解后煮沸30分鐘,靜置3日,用100毫升70%酒精沖淡,放置24小時後過濾。
此染液能染細胞核,還用來染糊粉粒和一般動物、植物的整體染色,如水螅、血吸蟲等整體標本。
配方五 德氏(Delafield’s)蘇木精染液
甲液 取1蘇木精,溶於6毫升無水酒精中,即成蘇木精—酒精溶液。
乙液 取10克銨礬溶於90毫升蒸餾水中,即成10%銨礬水溶液。
取甲液逐滴加入到乙液中,用紙遮蓋,放在陽光明亮處,使它充分氧化。3~4天後將溶液過濾,在濾液中加入25毫升甘油和25毫升甲醇,保存在密閉玻璃瓶內。靜置1~2個月,待該液顏色變深時過濾,可長久保存。
本染液是染色體的優良染色劑,除能染細胞核外,還用來染纖維素、細胞壁和動植物組織。
配方六 席夫(Schiff’s)試劑
稱取0.5克鹼性品紅,加到100毫升煮沸的蒸餾水中,再微微加熱5分鐘,不斷攪拌,使它溶解。在溶液冷卻到50攝氏度時過濾,濾液中加入10毫升1N鹽酸。再冷卻到25攝氏度時加入0.5克偏重亞硫酸鈉()或無水亞硫酸氫鈉( )。把溶液裝入棕色試劑瓶內,搖蕩后,塞緊瓶塞,放在黑暗中24小時。在溶液顏色退到淡黃色時,加入0.5克活性炭,用力搖蕩1分鐘,過濾后把濾液貯在棕色試劑瓶內,塞緊瓶塞,濾液應該是無色的。在使用時勿讓溶液長時間暴露在空氣中和見光(瓶外用黑紙或暗盒遮光)。如溶液變成紅色,即失去染色能力。
鹼性品紅是較強的核染色劑,在孚爾根氏(Feulgen’s)反應中作為組織化學試劑,以檢查DNA。
6、染色體染色劑
配方一 醋酸—洋紅染液
取45毫升冰醋酸,加蒸餾水55毫升,煮沸后徐徐加入洋紅1克,攪拌均勻后加入1顆鐵鏽釘,煮沸10分鐘,冷卻後過濾,貯存在棕色瓶內。
配方二 醋酸—地衣紅染液
取45毫升醋酸,跟55毫升蒸餾水相混,加熱,徐徐加入地衣紅粉末1~2克,攪拌溶解后,緩緩煮沸2小時。冷卻後過濾,貯存在棕色瓶里。
配方三 龍膽紫染液
取1克龍膽紫,用少量蒸餾水溶解后,加蒸餾水,稀釋到100毫升,保存在棕色瓶內。
配方四 甲苯胺藍染液
取0.5克甲苯胺藍,溶解在100毫升蒸餾水中,即成0.5%甲苯胺藍水溶液。

線粒體染色劑


配方一 詹鈉斯綠B(Janu’s green 酒精飽和溶液
取125毫升詹鈉斯綠B,加入到62.5毫升無水酒精中,攪拌,即成煙魯綠B酒精飽和染液。
(1)取詹鈉斯綠酒精飽和染液按1:30000比例加蒸餾水稀釋,用來染原生動物線粒體。
(2)取詹鈉斯綠酒精飽和液,按1:10000比例加蒸餾水稀釋,用來染新鮮蛙血線粒體。
配方二 詹鈉斯綠B中性紅染液
先配製詹鈉斯綠B和中性紅酒精飽和液。詹鈉斯綠酒精飽和液見配方一。中性紅酒精飽和液配製方法:取125毫升中性紅,加入到50毫升無水酒精中,攪拌。
在10毫升生理鹽水(兩棲類生理鹽水濃度為0.65%;哺乳類生理鹽水濃度為0.9%)中,加入詹鈉斯綠B酒精飽和液0.7~1毫升,中性紅酒精飽和液2毫升,混合。
詹鈉斯綠B稀釋液是活體染液