耐熱DNA聚合酶

耐熱DNA 聚合酶(Taq DNA 聚合酶)：1969年人們從美國黃石國家森林公園火山溫泉中分離出一種嗜熱的水生真菌Thermusaquaticus，能在70~ 75C生長，從該菌分離純化得到一種耐熱的、依賴DNA 的DNA 聚合酶，簡稱Taq DNA 聚合酶。

耐熱DNA聚合酶是一種可抗高溫的蛋白質，5'-3'聚合酶活性，有Taq DNA 聚合酶、.Tth DNA 聚合酶、Bca Best DNA 聚合酶、Sac DNA 聚合酶幾種類型。

耐熱DNA聚合酶多。各種耐熱DNA聚合酶均，但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除錯配，；5'-3'外切酶活性可以消除合成障礙。由於上述這些不同，可以將耐熱DNA聚合酶分為三類：

1.Taq DNA 聚合酶

由一種水生棲熱菌yT1株分離提取出，是發現的耐熱DNA聚合酶中活性最高的一種，達200,000單位/mg。具有5'-3'外切酶活性，但不具有3'-5'外切酶活性，因而在合成中對某些單核苷酸錯配沒有校正功能。

TaqDNA聚合酶還要具有非模板依賴性活性，可將PCR雙鏈產物的每一條鏈3'加入單核苷酸尾，故可使PCR產物具有3'突出的單A核苷酸尾；另一方面，在僅有dTTP存在時，它可將平端的質粒的3'端加入單T核苷酸尾，產生3'端突出的單T核苷酸尾。應用這一特性，可實現PCR產物的T-A克隆法。

2.Tth DNA 聚合酶

從Thermus thermophilus HB8中提取而得，改酶在高溫和MnCl2條件下，能有效地逆轉錄RNA；當加入Mg2+后，該酶的聚合活性大大增加，從而使cDNA合成與擴增可用一種酶催化。

1.pfu DNA 聚合酶

是從Pyrococcus furiosis中精製而成的高保真耐高溫DNA聚合酶，它不具有5'-3'外切酶活性，但具有3'-5'外切酶活性，可校正PCR擴增過程中產生的錯誤，使產物的鹼基錯配率極低。PCR產物為平端，無3'端突出的單A核苷酸。

2.Vent DNA 聚合酶

改酶是從Litoralis棲熱球菌中分離出的，不具有5'-3'外切酶活性，但具有3'-5'外切酶活性，可以去除錯配的鹼基，具有校對功能。

DNA序列測定中應用的耐熱DNA聚合酶

1.Promega公司測序級TaqDNA聚合酶

是在TaqDNA聚合酶的基礎上對它進行修飾，去除5'-3'外切酶活性，保證測序記過的高度準確性，可產生強度均一的測序條帶，背景清晰。

2.Bca Best DNA 聚合酶

從Bacillus Caldotenax YT-G菌株中提純，並使其5'-3'外切酶活性缺失的DNA聚合酶。它的伸長性能優越；可抑制DNA二級結構形成，可以得到均一的DNA測序帶。

3.Sac DNA 聚合酶

從酸熱浴流化裂片菌中分離，無3'-5'外切酶活性，可用於DNA測序，但測序反應中ddNTP/dNTP的比率要高。