生物學方法
生物學方法
生物學,細胞生物學以其實驗條件便於控制,實驗穩定,重複性好,實驗周期短,儀器試劑(包括各類試劑盒)發展快,手段豐富,國際研究普遍(使新方法,新技術層出不窮),研究積累快,參考文獻豐富,可以觀察人體的不同組織的細胞,分子(這又強於動物實驗),給應用該方法技術研究創造了絕佳的條件已進行的研究揭示和開拓出生命科學廣大的未知領域. 由於分子生物學新興,發展快,給國內外,中西醫創造了同等的發展和應用的機會,再次使中,西醫有可能站到同一起跑線上。抓住這個千載難逢的機會,充分利用它,駕御它,必將給中醫學注入強大的生命.
幾千年來,中醫在運用天然藥物方面積累了豐富的經驗。比如其中一些天然動植物藥物的粗製品,比如水蛭素,蛇毒抗栓酶類粗製品已經作為我國的傳統醫藥產業。但是當國外採用了分子生物學技術和生物工程,生產出水蛭素,類凝血酶素,既降低了成本,又提高了質量的穩定性。反銷我國和國際市場,對我國傳統醫藥產業形成了巨大競爭。有識之士開始呼籲不能坐視祖國醫學優秀遺產的優勢失去,主張抓緊採用分子生物學研究天然中藥的有效成分,開發新葯,不然勢將失去優勢。通過幾十年的研究,中藥所面臨的問題已經暴露得十分清楚,比如中藥材的質量穩定,佔用耕地,有效成分和若干有效成分最佳組合的探索,有效成分得率需要提高,以及服用的安全,方便等均有賴於大量的中藥學基礎研究,而已有的研究表明,分子生物學是十分重要,有效的研究手段. 中藥的研究有賴於中醫基礎的研究,而不加強分子生物學技術對中醫基礎的研究,沒有強大的基礎研究的積累和支撐,藥物的研究,開發將成為無本之木.
中醫藥的作用發揮,臟腑病機的變化,不同治法(具體落實到中藥復方及其有效成分,針灸,推拿等治療方法)的作用環節和最終作用的發揮,均落實到人體基因轉錄與表達的調控。已有的研究表明,中醫藥的取效,往往是通過對基因的轉錄與表達調控實現的。甚至,一些基因缺失或突變所引起的疾病,中醫藥通過對其它有關基因的轉錄調控,進行補償,達到治療疾病的目的。深入研究對於闡明中醫藥的作用機制,闡明生命的調控原理,均具有重要的科學意義。作為對中醫學優秀遺產的繼承和發展,這部分的研究具有廣闊的天地,是中醫基礎理論研究的重頭.
二。分子生物學的主要技術和方法
(一)載體
載體的使用目的:
1)重組基因,以便放大某一基因片段,用於探針,基因功能檢測,報道基因研究等。方法是:把某一DNA片段插入到相應的載體(比如質粒,噬菌體,哺乳類細胞表達載體等),給予擴增,用以標記探針,測序,cDNA庫建立,基因功能檢測等多種分子生物學實驗。因此重組質粒就成為中醫藥實驗研究中最為常規的實驗.
通常,擴增目的DNA主要藉助兩類方法,即PCR技術和載體重組技術,鑒於PCR技術受到酶的性能和方法學等多方面的限制,某些DNA和超過一定長度DNA的擴增會有困難,所以載體重組技術倍受青睞.
2)DDPCR產物的克隆和測序.
3)RACEPCR產物的克隆和測序.
4)構建基因庫,cDNA庫,等.
5)基因功能檢測.
6)基因工程(包括基因治療之類).
1.質粒。質粒是一類雙鏈,閉環的DNA分子,長度為3kb左右,存在於細菌體中,獨立於細菌染色體之外進行複製和遺傳的輔助性遺傳單位。通過改造,使實驗室常用質粒具備了以下幾種特性:1)含有多克隆位點區域,可方便的插入目的DNA片段.2)對細菌的可轉移性,即在實驗中,可將質粒誘導入細菌.3)選擇標記。常用的有抗生素抗性基因.
這樣,一旦質粒進入細菌,便可使該細菌對相應的抗生素產生抵抗能力,在含這一抗生素的瓊脂平板上傳代,如此,便於鑒定質粒誘導入細菌成功與否.4)在細菌體內可獲得較高的拷貝數,例如一種叫pUC的質粒,在單一細菌體中的拷貝數可達500-700個。因此質粒已成為分子生物學中應用最為廣泛的載體.