鹽析法
用於蛋白質分離純化的方法
膠體的鹽析是加鹽而使膠粒的溶解度降低,形成沉澱析出的過程,是膠體的聚沉現象的一種
如向蛋白質溶液中加入某些濃的無機鹽[如(NH)SO或NaSO]溶液后,可以使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用就叫做鹽析。這樣析出的蛋白質仍可以溶解在水中,而不影響原來蛋白質的性質。因此,鹽析是一個可逆的過程。利用這個性質,可以採用多次鹽析的方法來分離、提純蛋白質
蛋白質在水溶液中的溶解度取決於蛋白質分子表面離子周圍的水分子數目,亦即主要是由蛋白質分子外周親水基團與水形成水化膜的程度以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。蛋白質溶液中加入中性鹽后,由於中性鹽與水分子的親和力大於蛋白質,致使蛋白質分子周圍的水化層減弱乃至消失。同時,中性鹽加入蛋白質溶液後由於離子強度發生改變,蛋白質表面的電荷大量被中和,更加導致蛋白質溶解度降低,之蛋白質分子之間聚集而沉澱。由於各種蛋白質在不同鹽濃度中的溶解度不同,不同飽和度的鹽溶液沉澱的蛋白質不同,從而使之從其他蛋白中分離出來。簡單的說就是將硫酸銨、硫化鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液,使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞,導致蛋白質在水溶液中的穩定性因素去除而沉澱。
在蛋白質溶液中加入一定濃度的強電解質鹽,如(NH) SO 等,蛋白質從溶液中析出,這種作用稱為鹽析。蛋白質鹽析是高中階段的重要演示實驗,但實際操作中常常不能出現沉澱。鹽析作用的實質是高濃度的強電解質破壞蛋白質分子表面的水化膜,同時電解質離子中和了蛋白質所帶的電荷,蛋白質的穩定因素被消除,使蛋白質分子相互碰撞而凝聚沉澱。蛋白質的溶解性受所帶電荷和溶液離子強度的影響,而蛋白質所帶電荷與溶液的pH有關,溶液離子強度與強電解質的無機鹽自身性質有關
該法還可用於揮髮油的提取與分離,可在浸泡藥材的水中或蒸餾液中加入一定量的鹽(常用氯化鈉),然後蒸餾,可加速揮髮油的餾出。在重蒸餾液中加入一定量的氯化鈉,可促使油水分層。
鹽析法簡單方便,可用於蛋白質抗原的粗提、丙種球蛋白的提取、蛋白質的濃縮等。鹽析法提純的抗原濃度不高,只用於抗原的初步純化。