苯丙氨酸解氨酶

L-苯丙氨酸解氨酶L－phenylalanin ammo－nialyase

縮寫PAL。是催化直接脫掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。EC．4．3．1．5。是1961年J．Koukol，E．Conn在大麥中發現的。存在於高等植物、酵母、菌類的可溶性部分。推測分子量為30萬。這是一個可把苯丙氨酸用於酚類化合物合成的酶。在很多情況下，其反應成為酚類化合物合成的有步驟的速率階段。在組織中的活性可隨外界因素而發生顯著變化，用光照，病傷害，植物激素處理等會使活性顯著增加。另外有時還受光敏色素所支配。在多數情況下，在組織中活性增加的同時，酶發生失活作用，這時組織中具有活性酶的量很快就會減少，據認為，這種失活是與類蛋白質物質作用有關。此外也已指出有非活性的酶的存在。

活性測定

原理苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonialyase，PAL）催化苯丙氨酸的脫氨反應，使NH3釋放出來形成反式肉桂酸。此酶的在植物體內次生物質（如木質素等）代謝中起重要作用。根據其產物，反式肉桂酸在290nm處吸光度的變化可以測定該酶的活性。材料、儀器設備及試劑（一）材料：馬鈴薯塊莖（二）儀器設備：1. 紫外分光光度計；2. 離心機；3. 研缽；4. 吸濾瓶；5. 紅光裝置；6. 打孔器。（三）試劑：1. 0.05mol/L 硼酸鹽緩衝溶液（pH8.8）；2. 0.02mol/L 苯丙氨酸（用0.1mol/L pH8.8硼酸緩衝液配製）；3. 5mmol/L 巰基乙醇硼酸緩衝液。實驗步驟1. 馬鈴薯圓片製備　將馬鈴薯塊莖洗凈、削皮，用打孔器（直徑1.5cm）取圓柱，切除兩頭近表皮處，中間部分切成2mm厚的圓片。先用自來水漂洗，最後用蒸餾水洗一次，用紗布吸干表面的水。2. 光誘導　將圓片平鋪在濕潤濾紙的培養皿中，置20～30℃紅光下處理24h以誘導PAL（也可接種病原菌誘導等）。3. 酶粗提液的製備　經誘導處理的馬鈴薯圓片5g，加10ml含5mmol/L 的巰基乙醇的硼酸緩衝液、0.5g聚乙烯吡咯烷酮（PVP）或PolyclarAT（除去酚類物質毒害，防止顏色的干擾、少量石英砂在研缽中研磨。勻漿抽氣過濾，濾液10，000rpm離心15min，上清液為酶粗提液。上述操作均在0～4℃下進行。4. 活性測定與計算　1ml酶液加1ml0.02mol/L 苯丙氨酸，2ml蒸餾水，總體積為4ml。對照不加底物，多加1ml蒸餾水；反應液置恆溫水浴30℃中保溫，0.5h後用紫外分光光度計在290nm處測定吸光度。以每小時在290nm處吸光度變化0.01所需酶量為一單位（相當每毫升反應混合物形成1μg肉桂酸）。蛋白質含量用Folin－酚法進行測定。