血漿凝固酶

血漿凝固酶：是多數致病菌株能產生凝固酶，能使含有肝素等抗凝劑的人或兔血漿發生凝固的酶類物質，致病株大多數能產生，是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標.

取肉湯培養物0.3mL同0.5mL凝固酶試驗兔血漿於8mm×100mm試管內充分混合，置36±1℃培養，定時觀察是否有凝塊形成，至少觀察6h,以內容物完全凝固，使試管倒置或傾斜時不流動者為陽性。試驗中需同時做巳知陽性和陰性對照。

血漿凝固酶分子量為80449.3，等電點為8.82，耐熱性強，100℃30min仍然保持活性，可被蛋白酶破壞。金黃色葡萄球菌血漿凝固酶有兩種分佈：一種分泌至菌體外的，稱為遊離凝固酶（free coagulase）；另一種存在於菌體細胞壁上，稱為結合凝固酶（bound coagulase）或凝聚因子（chumping factor）。血漿凝固酶具有較強免疫原性，慢性金黃色葡萄球菌感染患者血液內能檢測到大量血漿凝固酶抗體的存在。血漿凝固酶能被人血漿中的協同因子（cofactor）激活變成凝血酶類似物，進而催化可溶性纖維蛋白原變為不溶性纖維蛋白，從而使血漿凝固。不溶性纖維蛋白包裹在菌體表面，在其保護下菌體既能免受血清中殺菌物質的作用，也能抵抗巨噬細胞的吞幢。

金黃色葡萄球菌引起的感染易於局限化和形成血栓，不常發生全身性感染，這與凝固酶密切相關。血漿凝固酶試驗是判斷金黃色葡萄球菌的致病力的重要手段，同時也是金黃色葡萄球菌最重要的鑒別手段 。

血漿凝固酶的檢測最常用的方法是兔血漿凝固法，標準操作方法如下：

用生理鹽水將兔血清1:5稀釋，取化0.5mL稀釋后的兔血清加入到試管中，再加0.3mL待測液，樣品和血清混合均勻置37℃恆溫培養箱內，每間隔30min觀察1次結果。該試驗需要同時做已知樣品的陽性、陰性對照。若6h內樣品管出現凝固，陽性對照管出現凝固，陰性對照管不凝固，才可判斷樣品為陽性。

1.每隔30min應當及時觀察，因為某些菌株可產生葡萄球菌激酶，葡萄球菌激酶是一種溶纖維蛋白酶，可使己凝聚的血漿重新溶解，如不及時觀察就會產生假陰性結果。

2.使用的血漿應為無菌血漿，如果血漿受溶血性細菌污染則會產生假陰性，如果血漿受環境中的金黃色葡萄球菌污染則會產生假陽性。

3.不可在高鹽培養基上挑取菌落直接進行血漿凝固酶實驗，因為鹽能使血漿自凝導致假陽性。

4.應當使用BHI新鮮培養物，放置時間過長的培養物內血漿凝固酶活性會降低導致假陰性。