印跡技術

印跡技術

印跡技術是指將待測核酸分子結合到一定固相支持物上的方法。

southern印跡,將電泳分離的DNA片段轉移到一定的固相支持物上的過程。

過程


DNA分子被限制酶切,經瓊脂糖凝膠電泳,將DNA片段按照分子量大小分離,然後將含DNA片段的瓊脂糖凝膠變性,將其中單鏈DNA轉移到硝酸纖維濾膜或者其他固相支持物上。而DNA片段的相對位置保持不變。可做下一步雜交反應。
northern印跡,將RNA變性及電泳分離后,將其轉移到固相支持物上的過程。

免疫印跡

也稱Western免疫印跡(WesternBlot或WesternBlotting),是指將蛋白質樣品經聚丙烯醯胺凝膠電泳分離,然後轉移至到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,然後用抗體通過免疫學反應檢測目的蛋白,分析基因的表達程度。能用鹼變性,防止水解。用甲醛變性。

步驟

1從組織中提取DNA
2用特定的核酸內切酶酶切
3瓊脂糖凝膠電泳
4鹼變性
5中和反應
6轉膜
7固定
8雜交
9雜交信號檢測
northern印跡的步驟:
1從細胞中提取總RNA
2甲醛凝膠變性電泳
3轉膜
4固定
5雜交
6雜交信號檢測
western印跡的步驟
1蛋白質樣品製備
2SDS-PAGE電泳
3轉膜
4封閉
5一抗孵育
6二抗孵育
7顯色