腺病毒包裝

腺病毒包裝

腺病毒包裝中的難點主要在於怎麼將外源基因表達框或者外源的shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上。由於腺病毒骨架載體比較大（>30kb），而且載體中的一些常用酶切位點幾乎都有多個，如果用常規的酶切-連接的方式將外源基因或者shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上，成功率很低，因此，目前的腺病毒表達系統基本上都是用同源重組的方法將外源基因或shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上。

本公司的腺病毒包裝出自Invitrogen公司的BLOCK-iT™ Adenoviral Expression System，與市面上其它腺病毒包裝往往利用大腸桿菌或者293細胞自身的同源重組系統不同，本公司的腺病毒表達系統採用的是Invitrogen公司的Gateway技術，即利用LR重組酶進行體外重組。與其它腺病毒表達系統相比，這種體外重組更加方便、快速，重組效率更高！此外，本公司對這套腺病毒表達系統多個部分進行了優化和改造，使得整套系統適用範圍更廣，鑒定更方便、準確，病毒構建及包裝更快捷。

圖3. 1 腺病毒骨架載體pAd/BL-DEST質粒圖譜

腺病毒骨架載體pAd/BL-DEST質粒圖譜

圖3. 2 穿梭載體pYr - adshuttle -1 (表達基因用)質粒圖譜

穿梭載體pYr-adshuttle-1（表達基因用）質粒圖譜

圖3. 3 穿梭載體pYr - 1. 1 ( 表達shRNA用) 質粒圖譜

穿梭載體pYr-1.1-hU6-EGFP（表達shRNA用）質粒圖譜

贏潤生物腺病毒包裝系統--穿梭載體簡介

穿梭載體名稱 穿梭載體特點

表達shRNA用

pYr-1.1 hU6啟動子；EGFP熒游標記

pYr-1.2 mU6啟動子；EGFP熒游標記

pYr-1.3 hH1啟動子；EGFP熒游標記

pYr-1.4 h7SK啟動子；EGFP熒游標記

pYr-2.1 hU6啟動子；無熒游標記

pYr-2.2 mU6啟動子；無熒游標記

pYr-2.3 hH1啟動子；無熒游標記

pYr-2.4 h7SK啟動子；無熒游標記

表達mirshRNA用

pYr-mir30-shRNA CMV啟動子；micro30雙臂，EGFP熒游標記

表達基因用

pYr-adshuttle-1 CMV啟動子；無熒游標記

pYr-adshuttle-2 CMV啟動子；EGFP熒游標記，融合表達用

pYr-adshuttle-3 CMV、hEF1α雙啟動子，可同時表達兩個基因

pYr-adshuttle-4 CMV、hEF1α雙啟動子；hEF1α啟動子后插入EGFP熒光基因，CMV啟動子后空著

pYr-adshuttle-5 CMV啟動子；RFP熒游標記，融合表達用

pYr-adshuttle-6 CMV啟動子；外源基因-IRES-EGFP形式

pYr-adshuttle-7 CMV、hEF1α雙啟動子；CMV啟動子后插入EGFP熒光基因，hEF1α啟動子后空著