索氏提取法

利用溶劑迴流和虹吸原理，使固體物質每一次都能為純的溶劑所萃取，所以萃取效率較高。萃取前應先將固體物質研磨細，以增加液體浸溶的面積。然後將固體物質放在濾紙套內，放置於萃取室中。如圖安裝儀器。當溶劑加熱沸騰后，蒸汽通過導氣管上升，被冷凝為液體滴入提取器中。當液面超過虹吸管最高處時，即發生虹吸現象，溶液迴流入燒瓶，因此可萃取出溶於溶劑的部分物質。就這樣利用溶劑迴流和虹吸作用，使固體中的可溶物富集到燒瓶內。

由於有機溶劑的抽提物中除脂肪外，還或多或少含有遊離脂肪酸、甾醇、磷脂、蠟及色素等類脂物質，因而索氏提取法測定的結果只能是粗脂肪。

油料作物種子、中速濾紙

索氏提取器，乾燥器(直徑15～18cm，盛變色硅膠)，不鏽鋼鑷子（長20cm），培養皿，分析天平（感量0.001g），稱量瓶，恆溫水浴，烘箱，樣品篩（60目）。

無水乙醚或低沸點石油醚（A.R.）

1、切片

將濾紙切成8cm×8cm，疊成一邊不封口的紙包，用硬鉛筆編寫順序號，按順序排列在培養皿中。將盛有濾紙包的培養皿移入105±2℃烘箱中乾燥2h，取出放入乾燥器中，冷卻至室溫。按順序將各濾紙包放人同一稱量瓶中稱重（記作a）、稱量時室內相對濕度必須低於70%。

2、包裝和乾燥

在上述已稱重的濾紙包中裝入3g左右研細的樣品，封好包口，放入105±2℃的烘箱中乾燥3h，移至乾燥器中冷卻至室溫。按順序號依次放入稱量瓶中稱重（記作b）。

3、抽提

將裝有樣品的濾紙包用長鑷子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的1.67倍的無水乙醚，使樣品包完全浸沒在乙醚中。連接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恆溫水浴中進行抽提，調節水溫在70～80℃之間，使冷凝下滴的乙醚成連珠狀（120～150滴/min或迴流7次/h以上），抽提至抽取筒內的乙醚用濾紙點滴檢查無油跡為止（約需6～12h）。抽提完畢后，用長鑷子取出濾紙包，在通風處使乙醚揮發（抽提室溫以12～25℃為宜）。提取瓶中的乙醚另行回收。

4、稱重

待乙醚揮發之後，將濾紙包置於105±2℃烘箱中乾燥2h，放入乾燥器冷卻至恆重為止（記作c）。

粗脂肪含量（%）=（b－c）/（b－a）×100

式中：a：稱量瓶加濾紙包重（g）

b：稱量瓶加濾紙包和烘乾樣重（g）

c：稱量瓶加濾紙包和抽提后烘乾殘渣重（g）

1．測定用樣品、抽提器、抽提用有機溶劑都需要進行脫水處理。

第一，抽提體系中有水，會使樣品中的水溶性物質溶出，導致測定結果偏高；第二，抽提體系中有水，則抽提溶劑易被水飽和（尤其是乙醚，可飽和約2%的水），從而影響抽提效率；第三，樣品中有水，抽提溶劑不易滲入細胞組織內部，結果不易將脂肪抽提乾淨。

2.試樣粗細度要適宜。

試樣粉末過粗，脂肪不易抽提乾淨；試樣粉末過細，則有可能透過濾紙孔隙隨迴流溶劑流失，影響測定結果。

3.索氏抽提法測定脂肪最大的不足是耗時過長。

如能將樣品先迴流1～2次，然後浸泡在溶劑中過夜，次日再繼續抽提，則可明顯縮短抽提時間。

4.必須十分注意乙醚的安全使用。

抽提室內嚴禁有明火存在或用明火加熱。乙醚中不得含有過氧化物，保持抽提室內良好通風，以防燃爆。乙醚中過氧化物的檢查方法是：取適量乙醚，加入碘化鉀溶液，用力搖動，放置1min，若出現黃色則表明存在過氧化物，應進行處理後方可使用。處理的方法是：將乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的稀KOH溶液洗滌2～3次，以除去乙醇；然後用鹽酸酸化，加入1/5乙醚量的FeSO4或Na2SO3溶液，振搖，靜置，分層后棄去下層水溶液，以除去過氧化物；最後用水洗至中性，用無水CaCl2或無水Na2SO4脫水，並進行重蒸餾。

萃取法提取粗咖啡因，粗脂肪酸提取等。

適用範圍

適用於商品糧食、油料中粗脂肪含量的測定。

原理

試劑

無水乙醚（A.R）

海砂

儀器設備

分析天平：感量0.0001 g

索氏抽提器一套（各部件必須洗凈，用105℃溫度烘乾，其中抽提瓶烘至恆重）；

試樣製備

禾穀類糧食和豆類（花生除外）分取除去雜質的凈試樣30～50 g，磨碎通過直徑1.0 mm圓孔篩裝入廣口瓶內備用。

操作步驟

預試驗

空白試驗

樣品測定

1 精密稱取2～5g試樣（可取測定水分后的樣品），必要時拌以海砂，全部移入濾紙筒內。

2 將濾紙筒放入脂肪抽提器內，連接已乾燥至恆重的接受瓶，由抽提器抽提冷凝管上端加入無水乙醚或石油醚至瓶內容積的2/3處，於水浴上加熱，使乙醚或石油醚不斷迴流提取，一般抽提6～12小時。

3 取下接受瓶，回收乙醚或石油醚，待接受瓶內乙醚剩1～2ml時在水浴上蒸干，再於95～105℃乾燥2小時，放入乾燥器內冷卻0.5小時后稱量。

工作曲線

結果計算

X1= (m1-m0)/m2 x 100

式中： X1—樣品中脂肪的含量，%

m1—接受瓶和脂肪的質量，g

m0—接受瓶的質量,g

m2—樣品的質量,g

精密度

雙試驗結果允許差：糧食、油料不超過0.4%

參考文獻

GB 5009.6－85 食品中脂肪的測定方法。

注意事項

脂肪廣泛存在於許多植物的種子和果實中，測定脂肪的含量，可以作為鑒別其品質優劣的一個指標。脂肪含量的測定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、電測和核磁共振法等。國內外普遍採用抽提法，其中索氏提取法（Soxhlet extractor method）是公認的經典方法，也是我國糧油分析首選的標準方法。索氏抽提法以索氏提取器為提取儀器，採用低沸點有機溶劑（乙醚或石油醚）迴流抽提，除去樣品中的粗脂肪，以樣品與殘渣重量之差，計算粗脂肪含量。由於有機溶劑的抽提物中除脂肪外，還或多或少含有遊離脂肪酸、甾醇、磷脂、蠟及色素等類脂肪物質，因而抽提法測定的結果只能是粗脂肪。

河南農業大學自2006 年開設農產品標準化與貿易專業以來，農產品中脂肪含量測定實驗一直是本專業的本科生主要實驗之一，結合近年來實驗教學中總結的一些體會，筆者就索氏提取法測定農產品中脂肪含量實驗中試劑選擇、樣品處理、提取等幾個注意事項進行探討。

抽提試劑的選擇

利用相似相溶規律，農產品中脂肪極性一般較小，可採用石油醚或乙醚作為抽提試劑。常見實驗室用石油醚有低沸程（30~60℃）和高低沸程（60~90℃）兩種，一般選用低沸程石油醚為抽提溶劑有利於縮短提取時間。若選擇乙醚為抽提試劑，則必須十分注意乙醚的安全使用。

樣品粉碎度

試樣粗細度要適宜。試樣粉末過粗，脂肪不易抽提乾淨；試樣粉末過細，則有可能透過濾紙孔隙隨迴流溶劑流失，影響測定結果。

實驗中的乾燥處理

測定用樣品、抽提器、抽提用有機溶劑都需要進行脫水處理。這是因為：（1）抽提體系中若有水，會使樣品的水溶性物質溶出，導致測定結果偏高；（2）抽提體系中若有水，則抽提溶劑易被水飽和（尤其是乙醚，可飽和約2%的水）,從而影響抽提效率；(3)樣品中若有水，抽提溶劑不易滲入細胞組織內部，結果不易將脂肪抽提乾淨。

抽提過程中注意事項

將裝有樣品的濾紙包用長鑷子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的1.67 倍的石油醚，使樣品包完全浸沒在石油醚中。連接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恆溫水浴中進行抽提，調節水溫在70~80℃之間，使冷凝下滴的乙醚成連珠狀（120~150 滴/min 或迴流7 次/h 以上），抽提至抽取筒內的乙醚用濾紙點滴檢查無油跡為止（約需6~12h）。抽提完畢后，用長鑷子取出濾紙包，在通風處使乙醚揮發（抽提室溫以12~25℃為宜）。提取瓶中的乙醚另行回收。

其他方面

（1）索氏抽提法測定脂肪最大的不足是耗時過長，如能將樣品先迴流1~2 次，然後浸泡在溶劑中過夜，次日再繼續抽提，則可明顯縮短抽提時間。

（2）若實驗中樣品較多的話，可採用容量更大的YG- Ⅱ型油分測定器來測定脂肪含量，溫度控制在70℃左右，8h 可提取完畢。