斐林試劑

1849年，德國化學家斐林（Hermann vonFehling，1812年--1885年）發明了斐林試劑。它是由氫氧化鈉的含量為0.1 g/mL的溶液和硫酸銅的含量為0.05 g/mL的溶液，還有含量為0.2g/mL酒石酸鉀鈉配製而成的，其本質是銅離子和酒石酸形成的配合物——酒石酸合銅(高中認為是新制的氫氧化銅)。

斐林試劑是二價銅離子的酒石酸鉀鈉配合物，可以被脂肪醛或還原性糖還原為氧化亞銅。斐林試劑為深藍色溶液，在與脂肪醛或還原性糖共熱時，藍色消失，析出紅色的氧化亞銅沉澱。在氧化亞銅析出過程中，反應液的顏色可能經過由藍色→綠色→黃色→紅色沉澱的逐漸變化，反應較快時，直接觀察到紅色沉澱。

它與可溶性的還原性糖（葡萄糖、果糖和麥芽糖）在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的氧化亞銅沉澱。因此，斐林試劑常用於鑒定可溶性的還原性糖的存在與否。

配製方法：0.1 g/mI NaOH(甲液)和0.05 g/mI CuSO(乙液)。甲液配製方法是將125 g氫氧化鈉和137 g酒石酸鉀鈉溶於500 mI，蒸餾水中(貯於帶橡皮塞的瓶中)。乙液配製方法是將34.5 g結晶硫酸銅溶於500 ml水中，加0.5 mI硫酸。混合均勻。

斐林試劑的使用方法：一般將斐林試劑甲液和乙液等體積混合(或在2 mL甲液中滴4～5滴乙液)，再將混合后的斐林試劑倒入待測液，水浴加熱或直接加熱。如待測液中存在還原糖，則呈現磚紅色沉澱；如待測液中不存在還原糖，則仍然呈藍色。

1：向試管內注入2ml待測組織樣液。

2：向試管內注入1ml斐林試劑（甲乙液混合均勻，甲液量較多，乙液只需少量。然後再注入）。【人教版高一生物必修一第十八頁說的是“甲乙液等量混合均勻后再注入】

3：將試管放入盛有50~65℃溫水的大燒杯中加熱約2min。

4：觀察試管中出現的顏色變化。

(應為淺藍色-----棕色——磚紅色（沉澱）)

核糖、[麥芽糖、葡萄糖、果糖]（還原性糖）均為磚紅色沉澱；蔗糖、澱粉無變化（因為蔗糖、澱粉為非還原性糖）。

斐林試劑和班氏試劑的使用方法及原理不盡相同。斐林試劑和班氏試劑都是檢驗還原性糖的試劑，二者的使用方法及原理、成分也有區別，下面就從這幾種試劑的使用原理、成分及使用方法等方面做一簡單總結。

（1）班氏試劑常用於尿糖的鑒定，其配方與斐林試劑不一樣，其配方為：

①400mL水中加85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉；

②50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅。製成溶液；

③把CuSO溶液倒入檸檬酸鈉溶液中，邊加邊攪，如產生沉澱可濾去。

（2）其反應原理與斐林試劑略有差別。利用斐林試劑鑒定時，斐林試劑甲和斐林試劑乙直接反應生成酒石酸絡銅離子

酒石酸絡銅離子和可溶性還原糖在加熱條件下反應產生磚紅色沉澱。而班氏試劑中的產生卻是這樣的：檸檬酸鈉作為絡合劑，由碳酸鈉提供鹼性。CuSO與檸檬酸鈉溶液和NaCO溶液混合時生成檸檬酸絡銅離子，檸檬酸絡銅離子與葡萄糖中的醛基反應生成磚紅色沉澱。

（3）兩種試劑的保存方式不同。斐林試劑甲和斐林試劑乙混合後會因酒石酸有一定的還原性而自發地緩慢產生氧化亞銅沉澱，因此斐林試劑一般為現用現配；而班氏試劑的配方中，檸檬酸鈉比較穩定，實際鹼性也不強，不易還原銅離子產生氧化亞銅沉澱，因此該試劑可長期保存。

當然，無論用班氏試劑還是斐林試劑，歸根結底都是二價銅與醛基在沸水浴加熱條件下反應而生成磚紅色的沉澱，兩者反應現象一樣，這就是二者的相同之處。

斐林試劑和雙縮脲試劑

斐林試劑和雙縮脲試劑都由NaOH溶液（斐林試劑中還有酒石酸鉀鈉）和CuSO溶液組成，但二者有如下三點不同：

（1）溶液濃度不同

CuSO溶液稱為斐林試劑乙，其濃度為0.05 g/mL；

CuSO溶液（雙縮脲試劑B）的濃度為0.01 g/mL。

（2）使用原理不同

斐林試劑是新配製的溶液，它在加熱條件下與醛基反應，被還原成磚紅色的沉澱，可用於鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍色→棕色→磚紅色（沉澱）。

鑒定生物組織中是否含有蛋白質時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發生的是雙縮脲反應。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。蛋白質的肽鍵在鹼性溶液中能與Cu 絡合成紫紅色的化合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。

（3）使用方法不同

斐林試劑使用時，先等體積混合甲、乙兩液，而後立即使用，反應需要加熱（有時不加熱也反應）；雙縮脲試劑使用時，先加入NaOH溶液（1mL），振蕩搖勻，造成鹼性的反應環境，然後再加入3~4滴CuSO溶液，振蕩搖勻后觀察現象。