冷凍保存

將體外培養物懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，並在此溫度下對其長期保存的過程。

按照冷凍保護液在凍結后是否形成冰晶來劃分，凍存方法可分為非玻璃化和玻璃化凍存兩種。

非玻璃化凍存是利用各種溫級的冰箱分階段降溫至-70℃~-80℃，然後直接投入液氮進行保存；或者是利用電子計算機程式控制降溫儀以及利用液氮的氣、液，按一定的降溫速率從室溫降至-100℃以下，再直接投入液氮的方法，以該種方法凍結的細胞懸液或多或少都有冰晶的形成。

玻璃化凍存則是指利用多種高濃度的冷凍保護劑聯合形成的玻璃化冷凍保護液保護懸浮細胞，直接投入液氮進行凍存的方法，以該種方法凍結的細胞懸液沒有冰晶的形成，細胞凍存是最常用的仍是前一種方法。

精液保存是體外受精、人工受精培育動物的一個關鍵問題。目的在於延長精子在體外的存活時間，通過運輸擴大使用範圍。精液保存分為常溫保存（15-25℃）、低溫保存（0-5℃）、冷凍保存（-79℃、-196℃）3種。

卵母細胞的冷凍保存比精子和胚胎困難。冷凍后卵母細胞的線粒體、微管、囊泡等亞細胞結構會受到損傷，冷凍保護劑也會促使透明帶過早硬化。如果冷凍造成了卵母細胞亞細胞結構的損傷，會影響到卵母細胞復甦后的質量。

借鑒胚胎冷凍方法卵母細胞的冷凍技術得以建立。1986年人的成熟卵母細胞冷凍獲得成功。1992年日本游冷凍的牛成熟卵母細胞體外受精成功獲得牛犢。具體方法包括：緩慢冷凍法、一步冷凍法、玻璃冷凍法、超快速冷凍法等，其中緩慢冷凍法由於費時、冷凍劑對卵母細胞損傷大而已經基本不使用。玻璃化冷凍法是使用比較廣泛的卵母細胞冷凍保存方法。

與保存精子相比，胚胎冷凍保存具有優越性，可以移植給任何品種獲得純種後代。與鮮胚移植相比，胚胎冷凍保存便於胚胎的運輸和移植，但是面臨著生產率比較低、流產率較高等不足。關於冷凍對細胞核、細胞形態和代謝上的影響以及胚胎冷凍基礎研究還比較欠缺。但是，牛、兔、綿羊、山羊、大鼠等的胚胎均已實驗超低溫冷凍長期保存。迄今已經有20多種動物的胚胎經冷凍后移植至受體而成功獲得後代。

胚胎冷凍技術為建立優良品種的胚胎庫提供條件，還可以長期保存珍貴或瀕臨滅絕的動物資源。