真菌免疫調節蛋白

真菌免疫調節蛋白(Fungal immunomodulatory protein，Fip)是近年來從一些高等擔子菌(蘑菇類)子實體中提取的與植物凝集素和免疫球蛋白的結構和免疫功能相似的一類小分子蛋白質。

1989年，Kino等從靈芝(Ganodermalucidum)菌絲體提取物中分離到第一個真菌免疫調節蛋白，命名為Ling Zhi一8(LZ-8)他們利用兩相色譜系統和凝膠過濾以及離子交換方法純化了該蛋白質，蛋白質測序表明LZ-8由l1O個氨基酸殘基組成，氨基端乙醯化．分子量為12．4ku．等電點為4．4．1990年，他們叉從靈芝菌絲體cDNA文庫中克隆了LZ-8的編碼基因LZ-8，並發現由該基因的編碼序列推導的氨基酸序列與先前所獲氨基酸序列一致．所獲得的LZ-8全基因組序列上游轉錄起始區含有1個TATA—box和2個CCAAT樣序列．其5端非轉譯區含有1個61bp的小內含子，從而把該基因分成2個外顯子．

真菌免疫調節蛋白的生物學特徵

基本組分組成特徵：Kino等(1989)和Lin等(1995)都採用了相似的提取方法從靈芝菌絲體和金針菇、草菇子實體提取粗蛋白，進一步用柱層析、離子交換層析和凝膠過濾等方法分離純化出有生理活性的真菌免疫調節蛋白。氨基酸測序表明這4種真菌免疫調節蛋白由110～114個氨基酸組成，沒有組氨酸(His)、半胱氨酸(Cys)和甲硫氨酸(Met)，但是富含天冬氨酸(Asp)和纈氨酸(Val)。其N端的氨基酸均為乙醯化阻斷氨基酸，分子量約為13kDL1．5J。該類蛋白與人類及鼠類的免疫球蛋白A(Ig—A)重鏈可變區有28％的同源性，其中11％高度保守。另外，不同的真菌免疫調節蛋白之間具有較高的同源性，約為6o％～70％。草菇免疫調節蛋白(Fip—WO)、靈芝免疫調節蛋白(8)和金針菇免疫調節蛋白(Fip—lye)的氨基酸順序比較如圖1所示。真菌免疫調節蛋白基本特徵如表1所示。

結構特徵：Lin等(1997)利用酵母雙雜交系統和定點突變誘導松杉靈芝真菌免疫調節蛋白(Fip-gts)基因N端二聚化的方法發現，真菌免疫調節蛋白的二級結構中富含p結構，其中包括7個B-摺疊，2個a-螺旋和一個B-轉角(圖2A)，真菌免疫調節蛋白的N端大約13個氨基酸形成的a一螺旋對真菌免疫調節蛋白二聚化的形成以及有效行使其免疫調節功能十分必要，而天然的真菌免疫調節蛋白都是由兩個相同的亞基組成的同源二聚體。該結構特點與免疫球蛋白A(Ig-A)重鏈可變區很相似：免疫球蛋白A(Ig-A)重鏈可變區也富含B結構(9個B-摺疊)，二者在相似的區域形成p一摺疊，免疫球蛋白A(Ig-A)也是由相同的亞基形成的同源二聚體。Palasingam等(2003)利用NaBr滲透對金針菇真菌免疫調節蛋白(Fip—fve)進行單向不規則的晶體衍射發現，Fip—fve的N端緊接著a一螺旋存在一個纖連蛋白摺疊，該摺疊結構為“假一h型拓撲結構”，是7個J3一摺疊一s型與8個J3一摺疊h型的中間過度構型(圖2B）。