生物化學實驗

全書分為生物化學實驗技術基礎和生物化學實驗兩部分，共8章。第一部分生物化學實驗技術基礎介紹生物化學實驗須知和分光光度技術、離心技術、色譜技術、電泳技術四種常用的生物化學實驗技術基本原理；第二部分生物化學實驗包括基礎實驗、綜合應用型實驗和設計性實驗共49個實驗，保留了一些對加強學生基本實驗方法和技能訓練行之有效的傳統實驗，又緊跟生物化學發展的需要開設了綜合應用型實驗和設計性實驗。

本書可供全國高等院校生物、食品、環境、農學、林學、醫學、藥學等相關專業的學生和科技人員使用。

第一部分生物化學實驗技術基礎

第1章生物化學實驗須知1

1.1生物化學實驗的目的1

1.2生化實驗室實驗規則1

1.3生化實驗室安全及防護知識2

1.3.1實驗室安全知識2

1.3.2實驗室急救3

1.4實驗誤差與數據處理4

1.4.1系統誤差4

1.4.2偶然誤差4

1.4.3操作錯誤5

1.4.4數據處理5

1.5實驗報告6

第2章分光光度技術7

2.1分光光度技術原理7

2.1.1光譜7

2.1.2光吸收定律8

2.2分光光度計的構造10

2.2.1光源10

2.2.2單色光器10

2.2.3比色皿12

2.2.4檢測器12

2.37220型分光光度計13

2.3.1儀器外部結構及各部分名稱和功能13

2.3.2儀器使用方法15

2.3.3注意事項15

2.4分光光度技術在生化試驗技術中的應用16

第3章離心技術17

3.1離心技術的基本原理17

3.2離心機的類型和主要構造18

3.2.1離心機的類型18

3.2.2離心機的主要構造19

3.3離心方法的選擇21

3.3.1差速離心21

3.3.2密度梯度離心21

3.4離心條件的確定22

3.4.1離心力22

3.4.2離心時間22

3.4.3溫度23

3.4.4pH值23

第4章色譜技術24

4.1色譜技術原理24

4.2色譜的基本概念24

4.2.1固定相與流動相24

4.2.2分配係數與遷移率24

4.2.3分離度（解析度）25

4.2.4交換容量（或操作容量）26

4.2.5正相色譜與反相色譜26

4.3色譜技術的分類26

4.3.1按流動相固定相分類26

4.3.2按實驗方法分類27

4.3.3按分離的機制分類27

4.4常用的幾種色譜技術28

4.4.1紙色譜28

4.4.2薄層色譜30

4.4.3離子交換色譜32

4.4.4凝膠色譜35

4.4.5高效液相色譜41

4.4.6氣相色譜49

4.4.7親和色譜51

第5章電泳技術60

5.1電泳的基本原理60

5.1.1電荷的來源60

5.1.2泳動度60

5.1.3影響電泳的主要因素61

5.2電泳的分類62

5.2.1按分離原理分類62

5.2.2按分離目的分類63

5.2.3按用途分類63

5.3常用的電泳技術63

5.3.1紙電泳63

5.3.2醋酸纖維薄膜電泳65

5.3.3瓊脂糖凝膠電泳66

5.3.4聚丙烯醯胺凝膠電泳67

5.3.5毛細管電泳72

5.3.6免疫電泳技術73

5.3.7等電聚焦電泳74

5.3.8雙向凝膠電泳77

第二部分生物化學實驗

第6章生物化學基礎實驗79

實驗1糖的顏色反應和還原性鑒定79

Ⅰ.莫氏（Molisch）反應鑒定糖79

Ⅱ.塞氏（Seliwanoff）反應鑒定酮糖81

Ⅲ.杜氏（Tollen）反應鑒定戊糖82

Ⅳ.糖的還原性鑒定82

實驗2植物組織中可溶性糖含量測定——蒽酮比色法84

實驗3還原糖和總糖的測定——3,5-二硝基水楊酸法87

實驗4血糖的定量測定90

Ⅰ.鄰甲苯胺法測定血糖含量90

Ⅱ.葡萄糖氧化酶法測定血糖含量（GOD-PAP法）92

實驗5澱粉的提取、性質和含量測定93

實驗6肝糖原的提取和鑒定96

實驗7粗脂肪的含量測定——索氏抽提法97

實驗8油脂的化學性質99

Ⅰ.油脂皂化值的測定99

Ⅱ.油脂酸值的測定101

Ⅲ.油脂碘值的測定101

實驗9卵磷脂的提取及鑒定104

實驗10血清總膽固醇的定量測定105

Ⅰ.磷硫鐵法測定血清膽固醇106

Ⅱ. Abell法測定血清膽固醇107

Ⅲ.膽固醇氧化酶法測定血清膽固醇108

實驗11蛋白質的顏色反應和沉澱作用110

Ⅰ.蛋白質的顏色反應110

Ⅱ.蛋白質的沉澱反應113

實驗12蛋白質濃度測定（微量凱氏定氮法）115

實驗13蛋白質含量測定——紫外吸收法117

實驗14蛋白質的含量測定（二）——雙縮脲法、考馬斯亮藍結合法、BCA法119

Ⅰ.雙縮脲法測定蛋白質濃度119

Ⅱ.考馬斯亮藍結合法測定蛋白質濃度121

Ⅲ. BCA法測定蛋白質含量122

實驗15非蛋白氮（NPN）的測定124

實驗16DNP、DNS-氨基酸的製備和鑒定126

實驗17肽的序列分析——PTH法130

實驗18醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白132

實驗19SDS-聚丙烯醯胺電泳法測定蛋白質的相對分子質量134

實驗20血清白蛋白的分離與純化138

實驗21葡聚糖凝膠柱色譜分離純化蛋白質140

實驗22火箭免疫電泳143

實驗23核酸的含量測定144

實驗24DNA瓊脂糖凝膠電泳147

實驗25動物肝臟中DNA的提取與紫外檢測148

實驗26CTAB法提取植物基因組DNA150

實驗27酵母RNA的提取與鑒定152

實驗28質粒DNA的提取153

實驗29肝臟中谷丙轉氨酶的活力測定155

實驗30過氧化氫酶米氏常數的測定157

實驗31測定多種因素對唾液澱粉酶活力的影響159

實驗32豬血中超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活力測定161

實驗33多酚氧化酶的製備和化學性質163

實驗34維生素A的定性測定164

實驗35維生素B1的定性測定165

實驗36維生素C的定量測定（磷鉬酸法）167

第7章綜合應用型實驗170實驗37溶菌酶的提純和活力測定170

實驗38蘆薈多糖的製備和含量測定172

實驗39發酵過程中的無機磷和ATP檢測174

實驗40胰島素和腎上腺素對血糖濃度的影響176

實驗41葉綠體色素的提取、分離和含量測定178

實驗42用正交法測定幾種因素對牛胰蛋白水解酶活力的影響180

實驗43DNA聚合酶鏈式反應及產物鑒定（PCR）184

實驗44氣相色譜法檢測果蔬中有機氯類和擬除蟲菊酯類農藥186

實驗45質粒DNA的提取、酶切及鑒定189

實驗46漢防己中生物鹼的提取、分離和鑒定192

第8章設計性實驗195

實驗47果皮廢棄物中果膠的製備195

實驗48茶葉中茶多酚物質的提取與含量測定196

實驗49蛋白質的表達、分離、純化和鑒定197

附錄198

附錄1常用緩衝液的配製198

附錄2硫酸銨飽和度常用表203

附錄3常見蛋白質相對分子質量參考值（單位：Da）204

附錄4色譜法常用數據及性質205

附錄5各類物質常用的薄層顯色劑208

附錄6凝膠染料的種類及特點209

參考文獻210