生物化學實驗

生物化學實驗

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作者：黃建華、袁道強、陳世峰 主編

出版日期：2009年3月 書號：978-7-122-04311-5

開本：16 裝幀：平 版次：1版1次 頁數：252頁

本書共分三篇，分別是生物化學實驗室規則及基本操作、基本生化實驗技術、實驗部分。在第二篇中，特別對基本生化實驗技術理論進行了較詳實的介紹，以期使用者能夠掌握生化實驗的背景和原理，在做實驗的同時使自己的專業理論水平真正得到提高。

本書可作為高等院校動物科學、動物醫學、食品科學、發酵工程、衛生檢驗、生物技術、化工、環保等專業的實驗教材，也可供相關專業的學生、教師和科技工作者參考。

第一篇生物化學實驗室規則及基本操作1

1實驗室規則1

2預習報告要求1

3實驗記錄要求1

4實驗報告書寫要求及參考格式2

41實驗報告的格式2

42實驗報告的內容2

43實驗結果3

5儀器的清洗與清潔3

51初用玻璃儀器的清洗3

52使用過的玻璃儀器的清洗3

53石英和玻璃比色皿的清洗3

54塑料器皿的清洗3

55玻璃和塑料器皿的乾燥4

6清洗液的配製及使用4

61鉻酸洗液的配製4

62其他洗滌液4

7移液器的種類和使用4

71滴管4

72移液管(吸管)5

73微量進樣器5

74自動取液器5

8定量容器的種類和使用6

81量筒、量杯6

82容量瓶7

9溶液的混勻7

91攪拌7

92旋轉7

93彈打7

10實驗室意外情況及處理措施8

101著火8

102爆炸8

103中毒9

104外傷9

105觸電10

第二篇基本生化實驗技術11

1分光光度技術11

11紫外和可見光光譜11

12熒光光度分析17

13原子吸收光譜18

2電泳技術19

21電泳技術總論19

22紙電泳和乙酸纖維薄膜電泳23

23聚丙烯醯胺凝膠電泳23

24瓊脂糖凝膠電泳28

25免疫電泳29

26等電聚焦電泳30

27毛細管電泳31

28電泳結果處理34

3色譜技術36

31色譜技術概述36

32凝膠色譜42

33離子交換色譜50

34親和色譜56

35具體的一些色譜方法62

36高效液相色譜66

4PCR技術70

41PCR基本原理70

42PCR的基本過程70

43PCR實驗技術要點71

44提高PCR擴增特異性73

5膜分離技術74

51透析74

52超濾75

6免疫技術——酶聯免疫吸附測定法(ELISA)76

61原理76

62操作要點76

7生物大分子製備技術81

71概述81

72生物大分子製備的前處理82

73生物大分子的分離純化84

74樣品的保存85

第三篇實驗部分87

第一部分糖類實驗87

實驗一還原糖和總糖的測定(3,5二硝基水楊酸法)87

實驗二可溶性總糖的蒽酮比色法測定88

實驗三費林試劑法測定總糖89

實驗四磷鉬酸比色法測定血糖91

實驗五黏多糖——肝素鈉效價的測定93

實驗六澱粉的提取及性質實驗94

實驗七澱粉與纖維素的測定95

實驗八肝糖原的提取及鑒定97

實驗九果膠的提取與膠凍的製備98

實驗十可溶性糖的硅膠G薄層色譜99

實驗十一糖的聚醯胺薄層色譜101

實驗十二細菌細胞壁糖的薄層色譜102

實驗十三葡萄糖1磷酸的製備及其純度的測定104

第二部分脂類實驗107

實驗十四脂肪的鹼水解及組分鑒定107

實驗十五粗脂肪的定量測定——索氏抽提法108

實驗十六皂化值的測定109

實驗十七酸值的測定110

實驗十八碘值的測定111

實驗十九卵磷脂的提取及鑒定113

實驗二十磷硫鐵法測定血清膽固醇114

實驗二十一分光光度法測定膽紅素(改良JG法)115

實驗二十二紅細胞膜的製備及其成分分析(磷脂、膽固醇)116

第三部分氨基酸和蛋白質類實驗120

實驗二十三氨基酸的紙色譜120

實驗二十四薄層色譜法分離氨基酸122

實驗二十五甲醛滴定法測定氨基酸123

實驗二十六華勃氏呼吸計法測定L谷氨酸124

實驗二十七旋光法測定谷氨酸127

實驗二十八蛋白質的沉澱反應、顏色反應、兩性反應、電荷及等電點的測定128

實驗二十九粗蛋白的定量測定——微量凱氏定氮法132

實驗三十紫外光吸收法測定蛋白質含量135

實驗三十一雙縮脲法測定蛋白質含量137

實驗三十二考馬斯亮藍G250法(Bradford法)測定蛋白質含量138

實驗三十三Folin酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質139

實驗三十四尿素對蛋白質的變性作用141

實驗三十五蛋白質DNS分析法(DNS—Cl膜色譜技術)142

實驗三十六乙酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質144

實驗三十七垂直板聚丙烯醯胺凝膠電泳分離蛋白質146

實驗三十八等電聚焦電泳測定蛋白質等電點147

實驗三十九SDSPAGE電泳測定蛋白質相對分子質量149

實驗四十凝膠色譜法測定蛋白質相對分子質量151

實驗四十一酪蛋白的提取152

實驗四十二植物葉蛋白的提取153

實驗四十三細胞色素C的製備及其測定155

第四部分核酸類實驗158

實驗四十四質粒DNA的鹼裂解法提取與純化158

實驗四十五植物組織中核酸的提取和測定160

實驗四十六酵母RNA的分離與組分鑒定162

實驗四十七DNA的瓊脂糖凝膠電泳163

實驗四十八RNA的聚丙烯醯胺凝膠電泳165

實驗四十九DNA重組167

實驗五十PCR聚合酶擴增DNA168

實驗五十一逆轉錄聚合酶(PCR)鏈反應169

第五部分酶類實驗170

實驗五十二過氧化氫酶和過氧化物酶的作用170

實驗五十三溫度、pH、激活劑和抑製劑對唾液澱粉酶活性的影響172

實驗五十四大麥萌發前後澱粉酶活力的比較174

實驗五十五枯草桿菌蛋白酶活力的測定175

實驗五十六轉氨酶GPT、GOT活性的測定177

實驗五十七脲酶的動力學研究178

實驗五十八糖化型澱粉酶活力的測定183

實驗五十九蛋清溶菌酶的製備及活力測定184

實驗六十正交法測定對酶活力影響的幾種因素185

實驗六十一鹼性磷酸酶的分離與純化188

實驗六十二結晶乳酸脫氫酶(LDH)的製備190

實驗六十三琥珀酸脫氫酶的活性測定及丙二酸的抑制作用191

實驗六十四辣根過氧化物酶的製備及酶比活力的測定192

實驗六十五發色底物測定大麴中α葡萄糖苷酶活力195

實驗六十六酵母蔗糖酶的純化及性質研究197

實驗六十七固定化酵母細胞及蔗糖酶的檢測201

實驗六十八親和色譜法純化胰蛋白酶202

第六部分維生素類實驗205

實驗六十九維生素A的測定(三氯化銻比色法)205

實驗七十還原型維生素C的測定206

實驗七十一總維生素C的測定——2,4二硝基苯肼比色法207

實驗七十二熒光法測定維生素B2(核黃素)209

實驗七十三高效液相色譜法測定脂溶性維生素210

第七部分代謝類實驗212

實驗七十四肌糖原的酵解作用212

實驗七十五發酵過程中無機磷的利用214

實驗七十六糖酵解中間產物的鑒定215

實驗七十七氨基轉移反應的定性鑒定216

實驗七十八脂肪酸的β氧化218

第八部分其他實驗220

實驗七十九辛酸硫酸銨法從人血清中純化免疫球蛋白(IgG)220

實驗八十免疫電泳技術221

實驗八十一ELISA法測定單克隆抗體的效價222

實驗八十二分光光度法測定葉綠素含量224

附錄226

附錄1一些常用化合物的溶解度(20℃)226

附錄2酸、鹼溶液的配製226

附錄3常用酸鹼體積分數、相對密度和物質的量濃度的關係226

附錄4某些有機溶劑的主要物理常數228

附錄5一些常用酸鹼指示劑228

附錄6混合指示劑229

附錄7氧化還原染料229

附錄8染料和熒游標准試劑229

附錄9生物發色團230

附錄10某些重要生化物質的摩爾消光係數230

附錄11氨基酸的一些物理常數231

附錄12元素的相對原子質量表232

附錄13調整硫酸銨溶液飽和度計算表(25℃)233

附錄14調整硫酸銨溶液飽和度計算表(0℃)233

附錄15氣體乾燥劑234

附錄16液體乾燥劑234

附錄17易變質及需要特殊方法保存的試劑234

附錄18冷卻劑234

附錄19常用緩衝溶液的配製235

參考書目240