DAPI

在熒光顯微鏡觀察下，DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發。當DAPI與雙股DNA結合時，最大吸收波長為358nm，最大發射波長為461nm，其發散光的波長範圍含蓋了藍色至青綠色。DAPI也可以和RNA結合，但產生的熒光強度不及與DNA結合的結果，其發散光的波長範圍約在500nm左右。

DAPI的發散光為藍色，且DAPI和綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發散波長，僅有少部分重疊，研究員可以善用這項特性在單一的樣品上進行多重熒光染色。

DAPI

中文名：4，6-聯脒-2-苯基吲哚(?)

英文名：4',6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine，DAPI dihydrochloride

CAS number：28718-90-3

光譜性質： DAPI的最大激發波長為340nm，最大發射波長為488nm

與雙鏈DNA結合時最大吸收/最大發射為358 nm/461 nm；與RNA結合時，最大發射移動到400 nm左右。

染色原理：

DAPI 為一種熒光染料，可以穿透細胞膜與細胞核中的雙鏈DNA結合而發揮標記的作用，可以產生比DAPI自身強20多倍的熒光，和EB相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。顯微鏡下可以看到顯藍色熒光的細胞，熒光顯微鏡觀察細胞標記的效率高(幾乎為100 %) ，且對活細胞無毒副作用。DAPI染色常用於細胞凋亡檢測，染色後用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用於普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。細胞經熱激處理後用DAPI染色3分鐘，在熒光顯微鏡下可以看到到細胞核的形態變化。

a、正常的煙草細胞核：核形完整，染色質均勻。

b、染色質固縮，向外周聚集，形成周邊化。

c、染色質進一步固縮，形成很多顆粒物質。

d、細胞核破裂形成碎片，核解體。

在細胞移植前，將DAPI 以一定的濃度加入培養基中，與細胞共同孵育過夜，用PBS 緩衝液漂洗至少6 次以洗掉未結合的DAPI，在用酶消化后離心收集細胞，加入DMEM 培養基製成細胞懸液以備用。

存儲條件：-20℃避光保存

每次使用，用量較少，可反覆凍融，無需分裝

注意事項：

1、DAPI強烈致癌，操作時要戴上手套。

2、貯存液用70%酒精配製，濃度100 µg/ml，可用黑紙包住，長期凍存。使用液按1:1000用PBS稀釋，最終濃度100 ng/ml。

3、DAPI是非常優秀的DNA染料，固定過和沒有固定過的活細胞均可用DAPI染色。

1971年DAPI在一項關於制抗錐蟲病的藥物的研究中第一次被合成於OttoDann的實驗室。它雖然不是一種成功的藥物，但更深入的研究表明它與DNA強力結合併在此時發出更強的熒光，這導致了1975年它被用在超速離心分析法中以標記線粒體DNA。與DNA結合時激發的強熒光使它被廣泛用於熒光顯微鏡技術中對DNA的染色。上世紀70年代末證實DAPI可以被用來在植物，微生物，多細胞動物和細菌細胞中追蹤DNA，1977年證實它可以被用來定量給細胞中的DNA染色，同時也證實DAPI可在流式細胞術中用作DNA染料。

當DAPI與雙股DNA結合時,在熒光顯微鏡觀察下，DAPI染劑在358nm(紫外線)處有一個最大吸收峰，並在461nm(藍)處有一個最大發射峰，其發射光的波長範圍含蓋了藍色至青綠色，因此在熒光顯微技術中DAPI被紫外線照亮且被藍或青色濾鏡檢出。DAPI也可以和RNA結合，但產生的熒光強度不及與DNA結合的結果，其發射光的波長範圍約在400nm左右。

DAPI可用於固定細胞染色，但是因為活細胞染色對DAPI濃度有嚴格要求，它很少被用於活細胞染色。DAPI能快速進入活細胞中與DNA結合，因此DAPI對生物體而言，也被視為一種毒性物質與致癌物。然而在MSDS中它被標記為無毒。儘管DAPI沒有顯現出對E.coli的誘變性，它在機器製造商提供的信息上被認為是一種DNA誘變劑。由於DAPI可以摻入DNA螺旋中，它很有可能有底層的DNA誘變性，因此應小心配置和使用DAPI。

類似於DAPI技術，赫斯特染色是一種既可以用於活細胞也可以用於固定細胞的藍色熒光染料，並且可以使用與DAPI相同的機器濾鏡設置。