瑞氏染色法

1 ．瑞氏染料是由鹼性染料美藍（ Methvlem blue ）和酸性染料黃色伊紅（ Eostm Y ）合稱伊紅美藍 染料即瑞氏（美藍－伊紅Y）染料。

伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍通常為氯鹽是鹼性的，美藍的中間產物結晶為三氯化鎂復鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。

2 ．用 甲醇作瑞氏 染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：

（ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美藍（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。

甲 醇

ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -

在配製的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青，美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍色，多餘 美藍就可以 使胞漿染成藍色，染色主要是化學作用，是離子彼此結合的反應。

（ 2 ）甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由於甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應。

3. 瑞氏染液配製：

(1) 瑞氏染液配製：

瑞氏染料 830gm 或 1g

甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml

先稱乾燥（事先放入溫箱乾燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內，用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到 研芝麻聲 即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入 一 清潔儲存瓶內（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重複數次，直至乳缽內染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存 3 個月以上為佳。

(2) 緩衝液：

1) 緩衝液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察 pH 值的改變，可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。緩衝液須保持 一定的 pH 使染色穩定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏鹼性染料可與緩衝液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料則與緩衝液中的鹼基起中和作用，使 pH 恆定。

2) 緩衝液配製（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：

配方 1 ：配方 2 ：

1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml

1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml

H 2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml

置室溫黑暗處，瓶口密封，防止黴菌污染，如有污染則應報廢。

1、取病料塗片、自然乾燥

2、滴加瑞氏染液染3分鐘，使標本被其中甲醛所固定;

3、加等量PH6.4的磷酸鹽緩衝液(或等量超純水)輕輕晃動玻片，均勻靜置5分鐘;

4、水洗、吸干、鏡檢。

5、細菌染成藍色，組織細胞胞漿紅色，細胞核藍色或紫色。