藻膽蛋白

藻膽蛋白主要存在於藍藻、紅藻、隱藻和少數一些甲藻中 ,其主要功能是作為光合作用的捕光色素複合體 ,在一些藻類中藻膽蛋白也可以作為儲藏蛋白 ,以使藻類在氮源缺乏的季節得以生存。

分類

藻膽蛋白的種類已知的藻膽蛋白主要可以分為以下4大類

1、藻紅蛋白(Phycoerythrin,PE)

2、藻藍蛋白(Phycocyanin,PC)

3、藻紅藍蛋白(Phycoerythrocyanin,PEC)

4、別藻藍蛋白(Allophycocyanin,APC)

藻膽蛋白是一種新型的熒游標記物，在熒光免疫分析方面有著廣闊的應用前景。其應用領域主要包括熒光激活細胞分類、流式細胞熒光測定、熒光免疫檢測以及單分子檢測等。在可溶性抗原、抗體檢測方面的研究則開展較少。

能量轉移

STOKES位移是熒光分析中的重要參數，它的大小決定著熒光探針的可靠性和靈敏性。熒游標記物如具有較大的STOKES位移，熒光檢測時來自瑞利散射、拉曼散射的干擾就較小。STOKES位移越大，發射的熒光就越靠近可見光譜的紅端，這有利於分析生化樣品。因為在紅區生化基質和血清成分造成的熒光干擾劇減，檢測靈敏度可顯著提高。藻膽蛋白具有較大的STOKES位移。其中藻紅蛋白就高達80nm，直接用作探針，就能達到較高的靈敏度。如要進一步提高靈敏度，一種方法就是利用能量轉移原理，選擇適宜的配對試劑構成能量轉移試劑對製備性質穩定、可標記性強、熒光性能更好的藻膽蛋白偶聯熒游標記物來增大STOKES位移。在免疫熒光分析中，藻膽蛋白既是有效的能量供體，又是適宜的受體材料。除不同種類的藻膽蛋白之間可形成交聯體複合物外，其它熒光染料如熒光素、德克薩斯紅等都可與藻膽蛋白組成能量轉移試劑對。1996年，Roederer等以花青染料Cy7與PE、APC分別交聯，其中Cy7與PE的交聯物的STOKES位移高達300nm。熒光級聯的PE-APC交聯體，STOKES位移也將近200nm，能量轉移效率高達90%。

藻膽蛋白共價偶聯物

藻膽蛋白包含大量的賴氨酸殘基，B-PE分子含有約85個賴氨酸殘基，而APC含36個。通過這些賴氨酸殘基側鏈，藻膽蛋白可與其它生物大分子相偶聯。常用的方法是使用異雙功能試劑（如SPDP等）與待偶聯的大分子反應，使其衍生化；以吡啶二硫化物使藻膽蛋白巰基化，再將兩者按一定比例混合併溫育，得藻膽蛋白共價偶合物。

在提純藻膽蛋白偶聯產物時，凝膠過濾不失為一種有效手段。以瓊脂糖凝膠為填料的層析柱，其分離效果就很理想。此外，基於羥基磷灰石的離子交換色譜也較為實用。

藻膽蛋白的應用領域主要包括熒光激活細胞分類、流式細胞熒光測定、熒光免疫檢測以及單分子檢測等多項技術領域。但在檢測可溶性抗原、抗體方面，藻膽蛋白熒光探針的試劑化、商品化程度還不很高。