白介素-6

白細胞介素-6，簡稱白介素6 (IL-6)，是一種細胞因子，屬於白細胞介素的一種。白細胞介素（interleukin，IL），簡稱白介素，是指在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子。白細胞介素在傳遞信息，激活與調節免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎症反應中起重要作用。

中文名稱：白介素6

英文名稱：interleukin-6；縮寫 IL-6

白介素6 是一種多肽，來源於白細胞介素6受體。 IL-6由2條糖蛋白鏈組成；1條為α鏈，分子量80kd；另1條為β鏈，分子量130kd。α鏈缺少胞內區，只能以低親合性與il-6結合，所形成的複合物迅即與高親和性的β鏈結合，通過β鏈向細胞內傳遞信息。

白介素6是由纖維母細胞、單核／巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞、上皮細胞、角質細胞、以及多種瘤細胞所產生。IL-1、TNF-a, PDGF、病毒感染、雙鏈RNA及c AMP等，均可誘導正常細胞產生白介素6。

1、誘導B細胞分化；

2、支持漿細胞瘤和骨髓瘤增生；

3、誘導IL-2和IL-2受體表達；

4、誘導單核細胞分化；

5、誘導CTL；

6、增強NK細胞活性；

7、誘導急性期反應分子並刺激肝細胞；

8、誘導神經元分化；

9、誘導腎小球膜細胞生長；

10、誘導角質化細胞生長；

11、抑制細胞凋亡；

12、支持造血幹細胞分化。

1、IL-6與IL-1一起可協同地促進T細胞增殖，部分與T細胞IL-2受體上調有關；

2、對IL-3的多向祖細胞刺激作用有協同效果，它還可促使B細胞的分化；

3、IL-6和IL-1一樣參與炎症反應和發熱反應，某些人體腫瘤細胞、特別是骨髓瘤細胞，可分泌IL-6作為自身生長因子刺激其生長。

1、冠心病患者血中白介素-6和白介素-10濃度的變化

目的：探討細胞因子白介素 6、白介素 10在冠心病心絞痛患者血中的變化規律。

結論：冠心病患者血清細胞因子白介素 6、白介素 10的濃度升高。

2、白介素在先心病合併肺動脈高壓圍術期的變化

目的：探討白介素 6和白介素 8在先心病圍術期變化規律 ,以及在先心病合併肺動脈高壓圍術期的變化特點。

結論：體外循環使白介素 6和白介素 8合成增加 ,合併肺動脈高壓者大於無肺動脈高壓者。

3、IL-6和IL-10單核苷酸多態性與HBV相關肝細胞癌遺傳易感性關係的研究

了解廣西地區人群細胞因子白介素6(IL-6)和白介素10(IL-10)基因啟動子區3個位點單核苷酸多態性(SNP)的分佈特點，探討研究人群中IL-6、IL-1（略）慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染、肝細胞癌(HCC)患病風險的關係，分析各基因型與肝癌家族史、吸煙、飲酒等肝癌危險因素在HCC發生中的交互作用以及基因與基因的交互作用（略）V誘導HCC的發病機理、尋找個體對肝癌易感的分子標誌物提供參考依據。

4、白介素-6與心血管疾病

研究表明充血性心力衰竭(congestiveheartfailure,CHF)患者循環及組織中白介素-6(inter-leukin-6,IL-6)升高。持續過度的IL-6產生會破壞細胞因子網路而促進心肌損傷。IL-6可能導致各種不同病因的CHF患者心肌損傷及功能障礙的進展。作為心肌炎、心肌病、移植排斥及左心室輔助裝置(LVAD)等情況所致CHF的原因之一，循環IL-6水平與左室功能障礙的嚴重程度密切相關，而且是後續嚴重臨床併發症的預測因子。IL-6可能通過IL-6信號轉導受體成分—糖蛋白130(gp130)而導致心臟肥大。IL-6家族在多種心血管疾病病理生理過程中起核心作用。

人白介素6 （IL-6）酶聯免疫分析試劑盒

本試劑盒僅供研究使用

檢測範圍：15.6 pg/ml - 1000 pg/ml

最低檢測限：3.9 pg/ml

特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人IL-6，且與其他相關蛋白無交叉反應。

有效期：6個月

預期應用：ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中IL-6含量。說明1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。

2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。

4．剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。

白細胞介素或白介素（interleukin，IL）是一組細胞因子（分泌的信號分子）。最早發現在白細胞中表達作為細胞間信號傳遞的手段。實際上，白細胞介素可以由多種細胞產生。免疫系統的功能，在很大程度上依賴於白細胞介素。一些罕見的白細胞介素缺陷不足都常出現自身免疫性疾病或免疫缺陷。IL-6是一種分子量為26ｋＤ的蛋白質，由184個氨基酸組成。最初人們只發現其在白細胞中合成並在白細胞間發揮作用而命名。隨研究的不斷進展，人們逐漸發現不僅激活的淋巴細胞、單核巨噬細胞可以合成和分泌IL-6，而且骨髓細胞和部分腫瘤細胞等也可以產生IL-6。其作為一種機體在免疫應答中產生的重要介質，具有多種生物學活性。IL-6是一種多效性細胞因子，能調節多種細胞功能，包括細胞增殖、細胞分化、免疫防禦機制及血細胞生成等。IL-6與多種腫瘤發生、發展關係密切，它通過干預細胞的黏附性和活動力、血栓形成、腫瘤特異性抗原的表達及腫瘤細胞的增殖，從而影響腫瘤的進展。它還能調節多種細胞功能，包括細胞增殖、細胞分化、免疫防禦機制及血細胞生成等。

用純化的抗體包被微孔板，製成固相載體，往包被抗IL-6抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗IL-6抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌後用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的IL-6呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

1. 酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

1. 標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恆溫培養箱

4. 乾淨的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等

標本的採集及保存

1. 血清：全血標本請於室溫放置2小時或4℃過夜後於1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放於-20℃或-80℃保存，但應避免反覆凍融。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本採集后30分鐘內於2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放於-20℃或-80℃保存，但應避免反覆凍融。

3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放於-20℃或-80℃保存，但應避免反覆凍融。

註：標本溶血會影響最後檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

標本的稀釋原則：

首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的範圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。最後計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。

標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然後反覆顛倒/搓動以助溶解，其濃度為1000 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋1000 pg/ml，500 pg/ml，250 pg/ml，125 pg/ml，62.5 pg/ml，31.2 pg/ml，15.6 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配製。

如配製500 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少於0.5ml）1000 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其餘濃度以此類推。

生物素標記抗體的稀釋原則：

臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配製（每孔100μl），實際配製時應多配製0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配製，輕輕混勻，在使用前一小時內配製。

辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：

臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配製（每孔100μl），實際配製時應多配製0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配製，輕輕混勻，在使用前一小時內配製。

操作步驟

實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加於酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配製，輕輕混勻，在使用前一小時內配製），37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應儘快加入終止液。

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

註：

1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。

2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是最後加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

3. 為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放於鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。

4. 未使用完的酶標板或者試劑，請於2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。

5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗台上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩衝液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重複此過程數次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算

以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。

2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

3. 一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。

5. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請最後乘以稀釋倍數。

6. 在配製標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配製，不能混淆。

7. 底物請避光保存。

8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。