甲苯胺紅不加熱血清試驗

梅毒是一種由梅毒螺旋體( TP)引起全身各器官的性傳播疾病，當梅毒螺旋體進入人體3~ 6周后，可在患者血清中檢出2種抗體，一種是針對螺旋體抗原的抗體，另一種是針對非螺旋體抗原的抗體。臨床梅毒檢測常用的血清學試驗分為非梅毒螺旋體抗原試驗( 如VDRL,TRUST,RPR)和梅毒螺旋體抗原試驗( 如TPPA,ELISA等)。

梅毒螺旋體感染人體后，宿主迅速對螺旋體表面的脂質作出免疫應答，在3~4周產生抗類脂質抗原的抗體（反應素），此時TRUST試驗可呈陽性。

用正常牛心肌的心類脂（Cardiolipin 二磷酸醯甘油衍生物）作為抗原，而不是用螺旋體作為抗原，來測定病人血清中的反應素（非特異性抗體---抗心磷脂抗體）。用來初步篩查梅毒螺旋體感染。反應素在初期梅毒病灶出現后1~2周就可測出，在二期梅毒滴度最高，三期梅毒較低。

1. 儀器材料：

1.1 水平旋轉儀

1.2 試劑盒：TRUST抗原液，直徑為18mm圓圈的卡片，抗原滴管，針頭

2. 樣本採集：

2.1 抽取靜脈血，室溫靜止凝固后，分離新鮮血清。也可以用凍存的血清

2.2 血漿：各種抗凝劑製備的血漿

3. 操作步驟：

3.1 定性試驗：

3.1.1 加樣：吸取50μL樣本放在卡片圓圈中，並均勻的塗布在整個圈內。

3.1.2 加抗原：將TRUST抗原輕輕搖勻，用9號針頭（60滴/mL）加一滴抗原。

3.1.3 將卡片置水平旋轉儀上旋轉8分鐘（100±2轉/分鐘），立即在亮光下觀察結果。

3.2 定量試驗：

3.2.1稀釋液準備：在圓圈內加入50μL生理鹽水（根據確定稀釋度），勿將鹽水塗開。

3.2.2加樣：吸取50μL樣本與各圈內鹽水作系列稀釋，並塗布整個圈內。

3.2.3 加抗原，同上

3.2.4將卡片置水平旋轉儀上旋轉8分鐘（100±2轉/分鐘），立即在亮光下觀察結果。

4. 結果判讀：

凝集反應強度分級：

3+ ~ 4+：圓圈內出現中到大的紅色絮狀物，液體清亮

2+：圓圈內出現小到中的紅色絮狀物，液體較清亮

2+：圓圈內出現小的黑色絮狀物，液體渾濁

- ：圓圈內僅見甲苯胺紅顆粒集中於中央一點或均勻分散

5. 結果報告：

5.1 定型試驗：

5.1.1 陽性：出現1+ ~ 4+強度的凝集反應

5.1.2 陰性：不產生凝集反應

5.2 定量試驗：

滴度：出現凝集反應的最高血清稀釋倍數

TRUST試驗適用於梅毒篩查、療效觀察、複發或再感染的檢查。由於所用抗原不具有特異性，除梅毒病人外，一些非梅毒疾患也可暫時或長期地存在反應素。例如麻風、結核、傳染性單核細胞增多症、紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、雅司、回歸熱、以及一些發熱性疾病。此外，在孕婦、老年人和吸毒者有生物學假陽性反應。對未經治療的一期、二期和潛伏梅毒患者的敏感性分別為：86%、100%、98%。

TRUST法適用於梅毒篩查，其定量試驗可作為療效評價，但風濕、紅斑狼瘡患者可與之發生交叉反應。

TP-ELISA 雙抗原夾心法敏感性高於TRUST, RPR 法，價格低，且操作簡單方便，儀器操作規範，便於資料保存，適用於樣本量大的體檢及流行病學的調查。

TPPA方法特異性好，適用於梅毒篩查后陽性標本的確證，不宜作為梅毒篩查及療效判斷。

WHO推薦用VDRL和RPR 法對血清進行過篩試驗，出現陽性者用TPPA, TPHA 等方法做確證試驗。

RPR法和TRUST法存在不同程度的假陽性，從醫療單位避免醫療糾紛和患者減少心理壓力及家庭矛盾兩方面考慮，標本的檢測最好採用ELISA 和TRUST雙法篩查，陽性標本再用TPPA方法進行生物學假陽性甄別。