MPn
用於指導微生物檢測的計數
MPn是most probable number的縮寫,指最大或然數,計數又稱稀釋培養計數,適用於測定在一個混雜的微生物群落中雖不佔優勢,但卻具有特殊生理功能的類群。
其特點是利用待測微生物的特殊生理功能的選擇性來擺脫其他微生物類群的干擾,並通過該生理功能的表現來判斷該類群微生物的存在和丰度。本法特別適合於測定土壤微生物中的特定生理群(如氨化、硝化、纖維素分解、固氮、硫化和反硫化細菌等。)的數量和檢測污水、牛奶及其他食品中特殊微生物類群(如大腸菌群)的數量,缺點是只適於進行特殊生理類群的測定,結果也較粗放,只有在因某種原因不能使用平板計數時才採用。
MPn
1915年,McCrady首次發表了用MPN法(最大可能數法)來估算細菌濃度的方法,這是一種應用概率理論來估算細菌濃度的方法。目前,中國仍普遍將MPN法用於大腸菌群,大腸桿菌等的檢測。因此了解MPN法的原理及局限性,對實驗室的微生物檢測及食品工業的微生物控制都有著重要的指導作用。
⑴
式中 V— 樣本體積;
l — 樣品中的細菌濃度,cfu/ml(g);
MPn
⑵
式中 pi — 第i組稀釋度中的陽性管數。
例:當取3個稀釋度,每組管數為3管時,細菌存在的概率為:
⑶
由⑵式求,並令 =0
此條件下求得的l值即為最大可能數(MPN),對應的P為最大概率。
例:當取3個稀釋度,每組管數為3管時,稀釋度1 ml(g),0.1 ml(g),0.01ml(g)時,陽性
管數分別為2-0-0時,代入⑶式得:
⑷
P對l作圖可得:
由⑷式求,並令 =0
得l = 90 cfu/100 ml(g),即MPN值為90 MPN/100 ml(g);Pmax = 31.9 %;其95%的可置信區間為10~360 cfu/100 ml(g)。
具體含義:當陽性管數為2-0-0時,菌落濃度為90 cfu/100 ml(g)的可能性最大,其概率(P值)為31.9%;當置信度為95 %時,對應的菌落濃度區間為10~360 cfu/100 ml(g)。
3個連續稀釋度,每組3個管,不同陽性管數組合對應的MPN值,最大概率值,95%可信區間見附錄1。由附錄1可見,部分陽性管數並沒有列出對應的95%可信區間,是因為這些陽性管數對應的Pmax較小,95%可信區間範圍過大,已失去了實際意義[2]。
MPN法的局限性
相同MPN值,但含義不同
陽性管數 MPN Pmax(%) 95%置信區間
1 ml(g)×3 0.1ml(g)×3 0.01 ml(g)×3 100 ml(g) 下限 上限
0 0 3 90 0.00000 - -
0 1 2 90 0.00035 - -
0 3 0 90 0.00417 - -
2 0 0 90 31.91613 10 360
例如,MPN值為90時,有四種不同情況的陽性管數。陽性管數為“0-0-0”“0-1-2”對應的最大概率(Pmax)極小,此時的MPN值 90 MPN/100 ml(g)無意義,所以在《FDA細菌學手冊》中,已刪除了這兩種情況。陽性管數為“0-3-0”對應的最大概率(Pmax)為0.00417%,而國標中並沒有列出相應的95%置信區間,是考慮到該置信區間過廣,已沒有很大的指導意義。而陽性管數為“2-0-0”的最大概率(Pmax) 為31.91613%,表明實際的菌落數在10~360 cfu/100 ml(g)之間。
所以,測定MPN值時,要考慮陽性管數。相同的MPN值,代表的實際菌落數範圍卻有很大的差別。假如你的產品標準為100 MPN/100 g,實測值為90 MPN/100 g (陽性管數“0-3-0”),那麼很難判定你的產品是否合格。
MPN值非連續 在附錄1的MPN表中,可見MPN值是不連續的。例如中國某些產品的大腸菌群標準為100 MPN/100 ml(g)或 450 MPN/100 ml(g),但在MPN表中卻沒有相應的陽性管數。
MPN值的準確度隨Pmax的減小而減小
在附錄1的MPN表中,可見不同MPN值對應的Pmax值不同,且隨著Pmax值的減小,MPN值的準確度也明顯下降,所以在《FDA細菌學手冊》中已刪除了極低Pmax值(<0.004%)的情況,因為這些Pmax值對應的MPN值沒有實際的指導意義[2]。
MPN法檢測的隱性成本
MPN法是一種採用數學理論推算,用置信區間描述菌落濃度的一種間接計數法。雖然實驗結果以MPN值表示,但MPN值並不能表示實際菌落數,而實際菌落數落在置信區間內的任何一點。
假如你產品的大腸菌群標準為30 MPN/100 g,而當你某個樣品的檢測結果為90 MPN/100 g,那麼你可能會認為你的產品不合格。但是,讓我們看一下90 MPN/100 g的置信區間,為10 ~ 360 cfu/100g,也就是說有部分結果為90 MPN/100 g的產品,且實際菌落數在10~30 cfu/100g之間,會被當作不合格產品處理。
另外,30 MPN/100 g的置信區間為<5~90 cfu/100 g (陽性管數0-0-1)或<5~130 cfu/100 g (陽性管數0-1-0)。也就是說部分實際菌落數為30~130 cfu/100g的產品,會被當作合格產品,從而微生物風險增加。
直接計數法
MPN法是一種常見的間接計數法,但其存在一定的局限性。目前,以Petrifilm紙片法[3]、VRB(Violet Red Bile)平板法等直接計數法正越來越得到人們的廣泛使用。
MPN法:適用於檢測帶有大量競爭菌的食品及其原料和未經處理的含少量金黃色葡萄球菌的食品。
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(新現語義)時下的網路用語
MPN(MyPhone Number):
參考資料:來自網路