纖維蛋白溶解酶
纖維蛋白溶解酶
纖維蛋白溶解酶(Plasmin,PL)是PLG在其激活物(PA)的作用下產生的,是導致纖維蛋白降解最直接的因子。生理狀態下,PL與PLG、t-PA等結合在血管內皮細胞表面,一旦有少量纖維蛋白形成,PLG被激活為PL,後者則在局部將纖維蛋白降解,以避免血栓形成,保證血流通暢。
纖維蛋白可與染料剛果紅結合成不溶於水的複合物,被檢血漿中的纖維蛋白溶解酶可水解纖維蛋白釋放出剛果紅,在酸性條件下剛果紅顯藍色,其顏色的深淺與血漿纖維蛋白溶解酶活性成正相關。
NaOH溶液53ml,加蒸餾水至1000ml。
(2)1g/L剛果紅溶液:剛果紅0.5g加生理鹽水500ml。
(3)1mol/L HCl溶液。
(4)50g/L CaCl2溶液。
(5)基質粉製備:血漿與生理鹽水、50g/L CaCl2溶液按10∶100∶5比例混勻,37℃水浴60min,用玻棒將纖維蛋白全部卷出,用生理鹽水洗滌兩次后,擠干,置56℃溫箱中烘乾備用。取10g纖維蛋白,加1g/L剛果紅溶液100ml,37℃水浴中不斷攪拌,保溫30min,3000r/min離心10min,棄去上清液,用pH7.8硼酸緩衝液反覆洗滌至上清無色為止,將與剛果紅結合的纖維蛋白置56℃溫箱烘乾備用。
(6)分光光度計。
(1)按表1操作:
(2)離心上述溶液,取上清,分光光度計600nm波長比色,空白調0,測其吸光度值,查標準曲線即可得出纖維蛋白溶解酶活性。
附註:
檢測前禁止服用抗凝藥物,如阿斯匹林等。
纖維蛋白溶解酶活性:85.55%±27.83%
(發色底物法)
21.1~48.9U
(剛果紅顯色法)
(1)運動對纖溶系統的影響:Weiss等為探討運動程度(中、重)與凝血、纖溶系統的關係,檢測了12例健康男性在騎踏車1h前後反映血漿凝血酶、纖維蛋白和纖維蛋白溶解酶形成的指標。結果顯示,在中等度的運動中t-PA抗原從3.7±0.5ng/ml升高到14.6±1.8ng/ml,P<0.01,PAP從2.1±0.3nmol/L升高到4.2±0.7nmol/L,P<0.01。然而,血漿凝血酶原片段1+2(pro-thrombin fragment1+2,F1+2)、凝血酶-抗凝血酶Ⅲ複合物(thrombin-antithrombinⅢ complexes,TAT)和纖維蛋白肽A(fibrin-opeptide A,FPA)卻無明顯變化。重度運動后,t-PA和PAP的水平分別超過正常高限的2.5倍及2倍,而血漿中F1+2、FAT、FPA卻在正常範圍內明顯增高(P值分別<0.01、<0.05、<0.01)。研究認為:在健康的年輕個體中,運動導致凝血活性增高的同時也引起纖溶活性增高,中等強度運動僅導致纖維蛋白溶解酶形成,而重強度運動時纖維蛋白溶解酶的形成超過了凝血酶和纖維蛋白的形成。
(2)在纖維蛋白溶解亢進症的意義:機體內纖溶系統活性是由於纖維蛋白溶解酶出現的結果,而纖維蛋白溶解酶在血中的活性是由釋放入血的激活物而調控。因此各種原因導致的纖溶亢進症,無論是先天性還是後天獲得性,無論是原發還是繼發性,最終結果是纖維蛋白溶解酶生成過多而導致纖維蛋白溶解酶活性增強。上海瑞金醫院對肝病患者纖維蛋白溶解酶的檢測結果顯示:急性肝炎、慢性肝炎和肝硬化病人血漿纖維蛋白溶解酶明顯升高,表明此時患者纖維蛋白溶解酶活性增強。
(3)在血栓前狀態及血栓性疾病中的意義:血栓前狀態及血栓性疾病中常由於t-PA活性及含量減低和PAI-1活性增高而導致纖維蛋白溶解酶活性(PL)減低。缺血性腦病患者α2-AP水平降低而纖維蛋白溶解酶-α2-AP複合物(PAP)增高,有資料表明,缺血性腦病患者PAP水平(1.09±0.45mg/L)明顯高於正常對照組(0.59±0.13mg/L)。血栓性疾病,如急性心肌梗死、肺梗死、深靜脈血栓、腎病綜合征、DIC等引起的繼發性纖溶亢進時PAP水平增高。Oikawa等對42例腎病綜合征患兒檢測了血漿PAP(PL-α2-AP)和D-Dimer等,發現在腎病綜合征的活動期PAP(0.67±0.48μg/ml)及D-Dimer(154±105ng/ml)水平與其靜止期(PAP 0.43±0.18μg/ml,D-Dimer 72±48ng/ml)比較具有顯著性差異(P<0.01,P<0.001)。儘管臨床上尚未發現血栓形成,但PAP、D-Dimer水平升高卻能反映腎病綜合征時的血液高凝狀態。
(4)血栓性疾病溶栓治療中的意義:在血栓性疾病如急性心肌梗死、肺栓塞、靜脈血栓形成等應用溶栓藥物(如鏈激酶、尿激酶、t-PA或重組t-PA等)進行溶栓治療時,由於外源性纖維蛋白溶解酶原激活物的作用使纖維蛋白溶解酶原轉變為纖維蛋白溶解酶,由此而降解纖維蛋白(原)達到溶解血栓的目的。因此溶栓后纖維蛋白溶解酶活性增高。纖維蛋白溶解酶-α2-AP複合物(PAP或PIC)增高,有報道α2-AP與纖維蛋白溶解酶形成的複合物(PAP)是可以靈敏地反應纖溶系統激活的分子標誌物。應用溶栓藥物治療時血漿PAP可明顯增高。
FA 肺栓塞 肝硬化 急性心肌梗死 靜脈血栓 靜脈血栓形成 腎病綜合征 血栓形成
纖維蛋白溶解酶是由提純的鏈激酶激活纖維蛋白溶解酶原而得,是一種蛋白水解酶。纖維蛋白溶解酶可使纖維蛋白分解成纖維蛋白降解物,而使纖維蛋白溶解。
凝血障礙、出血狀態、嚴重肝腎功能不全、麻醉和手術后忌用。
靜脈點滴,劑量取決於臨床反應,一般每小時5萬~10萬U,每天用1~6h,連用3~4天,並密切監測凝血功能。
纖維蛋白溶解酶是由提純的鏈激酶激活纖維蛋白溶解酶原而得,是一種蛋白水解酶。可使纖維蛋白分解成纖維蛋白降解物,而使纖維蛋白溶解。主要用於血栓栓塞性疾病,也可作為抗凝血葯治療的輔助葯。