減色效應

研究了甲基紫與核酸分子相互作用的紫外——可見光譜，在pH7左右，核酸包括小牛胸腺DNA，熱變性DNA，酵母RNA能夠與甲基紫相互作用，甲基紫最大吸收峰在579nm，隨著核酸的加入發生明顯的減色效應，減色強度隨著核酸濃度加大而增強，據此建立測定核酸的新方法，該方法線性範圍寬、簡便、快速。

2.1　主要儀器和試劑　λ-17紫外——可見分光光度計(美國Pekin-Elmer公司)。核酸溶液：小牛胸腺DNA，酵母RNA(中國科學院上海生物化學研究所)操作液濃度100mg/L；甲基紫溶液：2×10－4mol/L水溶液；Tris-HCl緩衝溶液：pH=7.4。試驗用水均為二次蒸餾水。

2.2　實驗方法　在10mL比色管中加入0.90mL2×10－4mol/L甲基紫，適量核酸溶液和1.5mLTris-HCl緩衝溶液，並稀釋至刻度，然後以試劑空白作參比，測定579nm處的吸光度值。

3.1　紫外——可見光譜

甲基紫的最大吸收峰579nm，隨著核酸的加入產生減色效應，其減色強度與核酸濃度成正比，減色效應最大是小牛胸腺DNA，酵母RNA最小。

3.2　最佳酸度的選擇

試驗了不同介質條件下體系的減色效應影響，以1.5mLpH7.4Tris-HCl緩衝溶液減色效應最強，且比較穩定。

3.3　甲基紫濃度的影響

固定核酸濃度，試驗了不同濃度甲基紫對體系的影響，實驗結果表明2×10－4mol/L甲基紫0.9mL時體系減色效應最大，且與核酸濃度具有良好的線性關係。

3.4　反應時間的影響

在室溫條件下，體系的反應速度很快，5min之內體系吸光度即可達到最大，並且在30min之內基本保持穩定。

3.5　離子強度的影響

通過加入NaCl溶液來改變體系的離子強度，隨著NaCl濃度的加大，可以抑制核酸對甲基紫的減色效應，在配製溶液或緩衝溶液的選擇時應避免離子強度過大。

3.6　共存物質的干擾

按實驗方法在一定量核酸存在下，大多數離子對核酸的測定影響不大，其測定結果的允許誤差不超過±5%時，下列離子及有關物質不干擾測定(括弧內的數字是核酸濃度的倍數)，即Ca2+、Ba2+、Mg2+、Zn2+（>50)，Mo（Ⅵ）、W(Ⅵ)、Fe3+、Ti（Ⅳ）、Cu2+、Co2+、Cd2+（30），Fe2+、As3+（30），烏嘌呤(5)，胸腺嘧啶，嘌呤(3)對體系的測定無影響。唯有蛋白質對測定干擾較嚴重，測定前應預先除去蛋白質。

3.7　線性範圍

實驗了不同濃度DNA，熱變性DNA，RNA線性範圍及工作曲線，不同濃度的實驗結果表明：對於小牛胸腺DNA，熱變性DNA和酵母DNA的線性範圍分別為0～5．0，0～5．0，0～10．0mg/L。擬合的線性方程分別為A=-0.10C+0.984,A=-0.089C+0.979和A=-0.039C+0.978(A為吸光度，C為濃度)其相關係數分別為0.998，0.997和0.995。可見本方法的優點是線性範圍寬，藥品廉價易得，簡便、快速，有一定實用性。

3.8　樣品分析

採用本方法對含有20～30倍Fe3+，Cu2+、Ca2+和Zn2+的合成樣品中DNA，RNA進行了分析。對標準含量為1.50和2.00mg/L的DNA，6次測定結果分別為1.52和2.08mg/L，相對標準偏差分別為3.1%和2.5%；對標準含量為4.00和5.00mg/L的RNA，6次測定結果分別為3.92和4.91mg/L，相對標準偏差為1.7%和2.8%。

在分析化學中，是指：化合物結構改變或其他原因，使吸收強度減弱的效應，也稱為淡色效應。

在分子光譜中有機化合物的特定發色團吸收峰摩爾吸光係數降低；而且其吸收峰位置產生向藍位移現象，稱為減色效應。它是由於化合物分子結構發生變化產生向藍基團所引起的這種現象。如在相等物質的量的核苷酸溶液中，遊離核苷酸在260nm處的吸光率較單鏈DNA高，而單鏈DNA的吸光率又比雙鏈DNA高的現象。這是由於多核苷酸鏈結構中鹼基自由旋轉受阻所致。通過在波長260nm處記錄溶液的光密度，能夠追蹤DNA的變性作用。

光的減色效應是指從白光或複合光中減去某種色光，而得到另一種色光的效應。

光的減色效應概括起來有以下規律

1、原色（紅、綠、藍）濾光器，只允許和本濾色鏡顏色相同的色光透過，吸收其它色光。

白光是由等量的紅光、綠光、藍光混合而成的。當白光通過紅濾鏡時，它只允許本色光透過，吸收綠光和藍光。綠濾鏡允許透過綠光，吸收紅光和藍光；藍濾鏡允許透過藍光，吸收紅光和綠光。

2、補色（黃、品紅、青）濾光器，也稱中間色濾光器，它允許與本濾色鏡顏色相同的色光透過，同時還允許形成這一補色的其它兩種原色光透過，吸收其它色光。

補色濾鏡中的黃濾鏡，允許黃光和紅光、綠光透過，吸收與黃光互為補色的藍光；品紅濾鏡可以透過品紅光和紅光、藍光，吸收綠光；青濾鏡可能透過青光和綠光、藍光，吸收紅光。

3、兩種補色濾鏡疊加使用，只允許形成這兩補色所共有的一種原色光透過，吸收其它色光。

4、兩種原色濾鏡疊加，各種色光均被吸收，或根據某一種濾色鏡的濃淡程度，透過部分色光。

5、三補色濾鏡疊加，各種色光相繼被吸收，最終都不能透過，而呈現出黑色效果。如果三補色顏色均較淡，疊加后三濾鏡本身呈現中性灰色，這時白光還能透過一部分，但強度明顯較弱。

從上述濾光器的透光規律可以看出，濾光器不論是裝在照相機、攝影機、攝像機的鏡頭前端或後端，它都會根據濾光器的顏色、深淺程度，對不同波長的光波進行吸收與透過。當濾色鏡運用於黑白攝影中，由於濾光器的顏色不同，則會改變景物在畫面中的影調、反差。如果加用的濾色鏡與景物顏色相一致，那麼，拍攝后畫面中該景物的顏色就會形成較淺或明亮的影調；如果景物中的顏色與濾色鏡不一致，則該景物的顏色在拍攝后的畫面中影調變暗。當有色濾光器運用於彩色攝影攝像中，畫面效果會根據所加濾色鏡的顏色而形成與濾鏡顏色相一致的色調。