分子生物學基本技能和策略
分子生物學基本技能和策略
本書以分子生物學理論為指導，以基因工程技術流程為主導路線，系統介紹了基因克隆、基因表達、蛋白質分析等經典理論和實用技術，既包括簡明扼要的綱領性技術原理，又覆蓋了生物化學與分子生物學領域最常見和最實用的技術方法和實驗方案。本書適合於高等院校生命科學專業的師生和從事生命科學研究的工作者使用。
第一篇 基因工程原理
概論
0?1分子生物學概述
0?2基因工程概述
0?3基因重組技術的應用前景
1?1目的基因的獲取
1?2基因載體的選擇
第2章 限制性內切核酸酶的應用
2?1概念
2?2序列特徵
2?3作用方式
2?4同裂酶和同尾酶
2?5影響酶切活性的主要因素
第3章 目的基因和基因載體的體外連接
3?1DNA連接酶
3?2連接方式
4?1受體細胞的選擇
4?2重組基因的導入方法
4?3轉化細胞的擴增
第5章 重組體陽性克隆的篩選
5?1遺傳檢測法
5?2物理檢測法
5?3菌落雜交篩選法
5?4免疫化學檢測法
5?5DNA-蛋白篩選法
5?6PCR法確定重組體
5?7DNA序列分析
5?8真核宿主細胞的篩選標記
第6章 外源基因表達及表達產物的檢測
6?1宿主細胞
6?2表達載體
6?3表達產物和表達水平
6?4表達產物的檢測
6?5表達蛋白質的分離純化
第二篇 常用生化技術原理
第1章 電泳技術
1?1電泳基本原理
1?2影響泳動度的主要因素
1?3常用的電泳方法
第2章 層析技術
2?1概述
2?2層析原理
2?3柱層析法
2?4凝膠過濾層析法
2?5氣相色譜和高效液相色譜
第3章 分光光度技術
3?1光學原理
3?2Lambert-Beer定律
3?3分光光度計的基本構造
3?4紫外可見光分光光度計
3?5熒光分光光度計
3?6酶標儀
第4章 離心分析法
4?1離心機基本原理
4?2離心機的分類
4?3離心機的結構
4?4離心方法
第5章 透析
5?1透析膜(袋)
5?2溶劑
5?3物理條件
第三篇 分子生物學常用技術
第1章 目的基因和基因載體的分離
實驗1 質粒DNA的提取
實驗2 真核生物基因組DNA的提取
實驗3 DNA的瓊脂糖凝膠電泳
實驗4 DNA的定量分析
實驗5 PCR基因擴增
實驗6 哺乳動物DNA的純化與鑒定
實驗7 基因組DNA文庫的建立
第2章 酶切與連接
實驗1 限制性內切核酸酶的酶切與鑒定
實驗2 載體與目的基因的連接
第3章 重組DNA的轉化與篩選
實驗1 重組質粒轉化大腸桿菌及初步篩選
實驗2 核酸探針的製備和標記
實驗3 原位雜交法進行重組質粒的篩選
實驗4 Northern雜交
實驗5 真核細胞基因轉染和篩選
實驗6 轉染細胞的篩選
第4章 外源基因在宿主細胞中的表達
實驗1 在大腸桿菌（E.coli）表達蛋白產物
實驗2 變性聚丙烯醯胺凝膠電泳
實驗3 蛋白質雜交法檢測表達蛋白
附：常用生物化學實驗技術
實驗1 不連續聚丙烯醯胺凝膠電泳
實驗2 凝膠過濾法測定蛋白質相對分子質量
實驗3 透析實驗
實驗4 雙縮脲反應
實驗5 胰島素及腎上腺素對血糖含量的影響
實驗6 血糖含量測定
實驗7 蛋白質定量測定
第四篇 分子生物學實驗室基本操作和數據
第1章 分子生物學實驗室常規儀器設備
1?1實驗室的常規儀器及設施
1?2離心機室的裝備
1?3分析儀器室的設置
1?4核素實驗室
1?5細胞培養室
1?6暗室
1?7冷室
第2章 實驗室基本操作
2?1玻璃儀器的洗滌
2?2攪拌和振蕩
2?3容量玻璃儀器的使用方法
2?4分光光度計的使用
2?6電熱恆溫水浴
2?7酸度計
第3章 實驗室常用數據
第4章 常用載體圖譜
主要參考文獻
