煙草環斑病毒
煙草環斑病毒
世界分佈,其流行程度僅次於煙草普通花葉病毒病。在中國,煙草環斑病毒病分佈較普遍,但多為局部小面積煙田造成危害,很少發生流行。
煙草環斑病毒可在二年生或多年生雜草寄主以及煙草和大豆種子上越冬,其帶毒的越冬寄主和帶毒種子都可成為初侵染源。大豆田問病株常晚熟,健株衰老黃化時病株仍為綠色,在健株成熟期可以通過1000m高空航空攝影檢測疫情發生區。西瓜:TRSV可自然侵染西瓜,導致植株矮化、褪綠,結的瓜多疣,葉上產生壞死斑、節問短縮、束頂。
病毒粒體球形,直徑28nm,外有稜角,有60個結構亞單位。TRSV核酸為單鏈RNA。有2個主要的RNA分子即:RNA-1、RNA-2,分子量分別為2730000、1340000。沉降係數RNA-1為32S;RNA-2為24S。
TRSV以單個或群體的粒體存在於煙草枝條頂端原始細胞核、細胞質、液泡中;在馬鈴薯表皮細胞、大豆葉細胞內。菜豆根尖中、大豆種子細胞壁上、煙草分生組織細胞內可看到成批的病毒粒體,包在微管中常與胞間連絲有聯繫,而大豆的維管束鞘、花粉壁內壁、生殖細胞壁和細胞質、珠被、珠心、胚囊壁和大配子體細胞內有聚集的病毒粒體內含體:在普通煙、黃花煙、心葉煙的病斑區細胞,或在第1~2個壞死環內,產生均一的球狀、卯形、結晶狀、非結晶形內含體,用番紅染色鮮艷清晰,這些內含體為病細胞原生質的合成與積聚,逐漸聚結在核的周圍,無被膜。
病毒具有好的免疫原性。病毒抗原經靜脈、肌肉注射兔子,較容易得到高滴度(1/2048)的特異抗血清。瓊脂雙擴散實驗產生一條沉澱線,不同株系間有血清學關係,產生刺狀沉澱線,用此試驗可以鑒別TRSV。
病毒的鈍化溫度:在煙草或法國菜豆汁液中為60~65℃,稀釋限點分別為10-3~10-4和lO-5~10-6。
體外存活期:室溫6~10d,18℃3周;2℃幾個月失去侵染性;凍干病汁液封存安培瓶中10年仍具侵染活性;在無水氯化鈣吸干葉組織置IO℃下17年,病毒仍有侵染活性。
自然寄主:範圍很廣,包括葫蘆科、藜科、莧科、豆科、菊科等植物,重要的有苘麻(Abutilontheophrasti)、美洲豚草(Ambrosiaartemisiifolia)、印地安席R(Apocynumcannabinum)、莧色藜(Chenopodiumamaranticolor)、牆生藜(Chenopodiummurale)、西瓜(Citrulluslanatus)、羅馬甜瓜(Cucumismelovar.cantalupensi)、黃瓜(Cucumissativus)、西葫蘆(Cucurbitapepo)、密生西葫蘆(Cucurbitaprpovar.melopepo)、瓜爾豆(Cyamopsistetragonoloba)、曼陀羅(Daturastramonium)、胡蘿蔔(Daucuscarota)、麝香石竹(Dianthuscaryophyllus)、大麗花(Dahliapinnata)、卵葉連翹(Forsythiaovata)、美國白蠟樹(Fraxinusamericana)、唐菖蒲屬一種(Gladiolushortulanus)、大豆(Glycinemax)、千日紅(Gomphrenaglobosa)、堆心菊(Heleniumamarum)、向日葵(Helianthusannuus)、洋麻(槿席)(Hibiscuscannabinus)、秋葵(Hibiscusesculentus)、啤酒花(Humuluslupulus)、繡球(Hydrsngeamacrophylla)、白薯(番薯)(Ipomoeabatatas)、德國鳶尾(Irisgermanica)、迎春(Jasminumnudiflorum)、萵苣(Lactucasativa)、櫥香百合(Liliumlongiflorum)、多葉羽扁豆(Lupinuspolyphyllus)、番茄(Lycopersicumesculentum)、白香草木犀(Melilotusalbus)、黃香草木犀(Melilotusofficinalis)、普通煙(Nicotianatabacum)、撞羽矮牽牛(Petuniaviolacea)、菜豆(Phaseolusvulgaris)、洋酸漿(Physalisfloridana)、豌豆(Jpisumsativum)、薔薇屬某種(Rosasp.)、銀葉茄(Solanumelaeagnifolium)、龍葵(Solanumnigrum)、馬鈴薯(Solanumtuberosum)、菠菜(Spinaciaoleracea)、紅三葉草(Trifoliumpratense)、白三葉草(Trifoliumrepens)、鬱金香(Tulipagesneriana)、豇豆(Vignasinensis)、蒼耳(Xanthiumsibiric)和百日菊(Zinniaelegans)等重要蔬菜、觀賞植物。
種子傳毒是TRSV擴散的主要途徑之一,種傳率從香瓜的3%至大豆的100%不等;胚組織帶病毒,種皮不帶病毒,花粉可以傳毒,至少有16種植物種子可帶毒傳播TRSV。大豆配子的感染是種傳的基本因素,植物感染時的生育期是決定種傳程度的最重要因素。
傳毒介體是土壤中的美洲劍線蟲(x勿hinema americanum),線蟲24h內可以獲得病毒,成蟲和幼蟲均可傳毒,隨線蟲數量增加感染頻率也增加;帶毒線蟲貯存在10℃下49周仍可傳毒。帶毒線蟲食道腔內有病毒粒體,自食道向外緩慢釋放。線蟲保存在非寄主植物8℃條件下9個月仍可傳毒;線蟲在非TRSV寄主歐洲草莓(Fragaria vesca)上生活10周后仍能傳毒。線蟲在16℃、22℃、28℃、34℃均可獲毒,除16℃以外其他溫度都可傳毒,以28℃最適宜。單頭介體線蟲可以同時傳播3個毒株的TRSV;還可以同時傳播TRSV和番茄環斑病毒(ToRSV);10頭帶毒線蟲接種植物3周傳毒成功率可達100%。
薊馬(Thrisps tabaci)的若蟲可以傳毒,但成蟲不能傳;蟎(Tetranychus sp.)、桃蚜(Myzus persicae)、煙草葉甲(Epitrix hirtipemis)、幾種葉蟬(Melanoplus differentialis,Melanoplus mexicanus,Melanoplus femurrubrum)等也可以傳毒。病毒在昆蟲體內不繁殖,也不可以將病毒傳給後代。汁液容易傳毒,但菟絲子不傳毒。
病害發生輕重與施肥關係密切,在高氮水平下病害發生較重,在低氮水平下病害發生較輕。與茬口有關,豆茬、重茬發病重。病害的發生還與煙苗移栽期有關,4月上、中旬移栽比5月上旬移栽發病重。
煙草環斑病毒可在二年生或多年生雜草寄主以及煙草和大豆種子上越冬,其帶毒的越冬寄主和帶毒種子都可成為初侵染源。病害在煙田可通過汁液摩擦、煙蚜、線蟲及煙薊馬等傳播,造成再侵染和田間傳播。
煙草環斑病毒(TRsV)感染大豆最明顯癥狀是病株頂芽捲曲,其他芽變褐色並且脆弱;在莖和複葉葉柄上
產生褐色條紋;豆莢發育不良,甚至不生長而死亡;侵染前結的莢上產生暗色斑。大豆花期或花前感染TRSV,病株重量也減輕,種子成熟延緩,產量顯著下降。病株種子還有較高比例的紫著色現象。大豆田問病株常晚熟,健株衰老黃化時病株仍為綠色,在健株成熟期可以通過1000m高空航空攝影檢測疫情發生區。
煙草種植區TRSV的發生也很普遍。TRSV在煙草上產生環斑,病斑常由斷續的壞死線局限起來,呈粉白色或棕色單環或雙環,直徑約5~8mm,與病斑相鄰組織褪綠,有時形成一個暈圈。幼葉和正在成熟的葉上易產生病斑,而老葉上很少產生。TRSV還導致煙草植株矮化,葉片小而質次,使煙草種子量減少27%。病株煙草種子發芽率僅8%~34%,健株種子則為76%~94%。
越桔屬植物:TRSV在美國導致越桔的壞死環斑病。病株矮化不結實,嫩枝頂梢枯死、壞死或產生褪綠病斑,葉片上產生環或線。
西瓜:TRSV可自然侵染西瓜,導致植株矮化、褪綠,結的瓜多疣,葉上產生壞死斑、節問短縮、束頂。TRSV侵染西瓜所結的瓜呈丘疹狀,病斑開始形成於中果皮,為小的壞死區,由過度生長的薄壁細胞分開,在生長晚期涼爽氣候條件下有更多的壞死並有畸形發展。
山東、河南、安徽、遼寧、黑龍江、雲南、貴州、福建、湖南、湖北、陝西、台灣均有分佈,整個生育期均可發生,以大田發生較多。染病葉上產生輪紋狀或波浪狀的壞死斑紋,大多褪綠變黃,維管束受害后影響水分、養分輸送,造成葉片乾枯,品質下降。莖或葉柄上可見褐色條斑或凹陷潰爛。
由於寄主範圍廣、癥狀變化大,田間觀察受到相當程度的限制,特徵性癥狀只對特殊的病毒一寄主組合有作用。如煙草上的褪綠環斑癥狀。
實驗室檢測常用血清學方法,由於病毒的免疫原性好,早期的環狀沉澱、微量沉澱、試管沉澱和凝膠擴散試驗都曾有效地應用於TRSV檢測,現在地ELISA技術靈敏度更高,是目前對TRSV進行血清學檢測的更好的方法。
電鏡觀察中的直沾法可以用於觀察病毒粒體形態大小,但由於粒體直徑較小,識別比較困難,如果用抗血清誘捕或誘捕修篩法製片,觀察效果較佳。
分子檢測可用cDNA探針和PCR,尤其RT-PCR技術顯示了更好的應用前景。
對來自日本、印度、印度尼西亞、美國、加拿大、古巴、多米尼加、巴西、澳大利亞、紐西蘭、巴布亞、摩洛哥、扎伊爾、馬拉維、比利時、荷蘭、法國、英國、愛爾蘭、歐洲等國家和地區的種子苗木應依法實施嚴格檢疫。
(1)出口國家和地區應出具檢疫證書,聲明產自未發病區或無該病毒。
(2)在核定的防蟲溫室隔離檢疫1年。
對於國內疫情發生區要封鎖控制,並做好防治工作:
(1)控制傳毒介體:防治傳毒介體線蟲可以減少病毒對寄主根部侵染。
(2)基因調控在遺傳育種上應用,獲得抗病性,可以有效地防治TRSV。
(3)施用抑制物質:氰化物抑制TRSV蛋白的合成,氰化鈉、氰化鉀不僅阻礙壞死癥狀形成,而且阻礙病毒的繁殖;疊氮鈉可以抑制病斑的形成。還有2,4-D、脫脂奶粉、清潔劑和離子、激素、黃麴黴素、桔黴素、酵母、放線菌D、菠菜汁液等都有一定的防病效果。
(4)研究應用衛星RNA構建抗病基因,控制病害的發生。