心肌酶譜
心肌酶譜
對心肌酶檢查，檢查心肌酶主要是確定心肌缺血壞死或細胞膜通透性。
1.血清酶總論：P232
乳酸脫氫酶（LDH）、穀草轉氨酶（AST）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB），α－HBD COOH COOH
α-酮戊二酸 丙氨酸 谷氨酸 丙酮酸
eg：轉氨酶、已糖激酶、磷酸化酶
3.水解酶：催化底物之間發生水解反應的酶類
ALP
對－硝基苯酚磷酸鹽對－硝基苯酚+磷酸鹽
水解
4.裂解酶類：催化底物移去一個基因而留下雙鍵的反應或逆反應的酶類。
eg：碳酸酐酶，醛縮酶
5.異構酶類：催化各種同分異構體之間互相轉化的酶類
eg：磷酸已糖激酶，消旋酶
磷酸已糖激酶
6－磷酸葡萄糖－磷酸果糖
6.合成酶類（連接酶類）：催化兩分子底物合成－分子的化合物，同時必須偶聯有ATP磷酸鍵斷裂。
1.習慣命名法：根據酶來源，催化反應性質及底物來命名。
底物：澱粉酶，蛋白酶
性質：脫氫酶、轉移酶
來源：胰澱粉酶、胃蛋白酶
底物+性質：穀草轉氨酶
2.系統命名法：酶反應底物、性質均要列出，各底物間以“：”隔開
編號：（1）1為氧化還原酶類
2為轉移酶類
3為水解酶類
4為裂解酶
（2）反應作用的位置，即可用於哪個基因
1.1 －CH－OH
1.2 －C=0
1.3 －C=CH
1.4 －C=NH
1.5 －CH－NH2
1.6 NADH、NADPH
（3）
1.1.1 氯化還原酶 CH－OH 受體：NAD+ NADP-
1.1.2 氯化還原酶 CH－OH 受體：細胞色素
1.1.3 氯化還原酶 CH－OH 受體：分子氧
（一）血清酶的排泄：P234
1.尿路：是血清中低分子量酶類主要去路
2.膽汁不是血清酶排泄途徑
（二）肝或網狀內皮系統對血清酶的清除：
肝臟對以酶原形式存在的酶類有消除作用
（三）酶蛋白在血管內的失活和分解：
（四）轉入其它體液
心肌酶譜
（一）酶的活性單位：在規定條件，每分鐘催化1umol的基質發生轉化所需要的酶量。
規定條件包括：溫度、PH、緩衝系統、基質濃度及輔助因素
（二）酶的單位計算
1.根據標準計算：
（U/L）酶活力單位=A樣品/A標準×C標準×Vt/Vs×1/t×1000
總體積-樣品+基質
2.根據反應底物的消光係數：
酶活力=A樣品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000
消光係數 比色杯厚度
（三）血清酶的生理差異：
1.性別：男>女
2.年齡：兒童 磷酸酶>成人 嬰兒 LDH 2倍成人
3.進食：對酶活力本身無影響，但可影響比色時的濁度
4.活動：
5.妊娠：ALT、LDH、ALP↑
心肌酶譜
（一）合成異常：P238
1.合成減少
2.合成增加
（二）酶從損傷細胞中釋放增加：
是疾病時大多數血清酶↑的主要機制
（三）其它機制：
腎衰→尿少→ 血澱粉酶↑
藥物，毒物可作為酶的抑製劑
2.AST的測定：
AST 穀草轉氨酶（GOT）
天門冬氨酸氨基移換酶
一、AST分佈：
主要存在線粒體中（M－AST）。胞漿中（C－AST）僅佔12%，是可溶性的正常血清中AST很少，只有上述組織發生病變
時，才釋放入血。
（一）賴氏比色法：P115 1.原理：
COOH COOH COOH COOH
（CH2）2 + CH2 AST （CH2）2 + CH2
C=O HC-NH2 37℃ HC－NH2 C=0
COOH COOH COOH COOH
酮戊二酸 天門冬氨酸 谷氨酸 草醯乙酸
COOH CH3
CH2 檸檬酸苯胺 C=0+CO2
C=0 脫羧 COOH
COOH
丙酮酸
CH3
C=0 + →丙酮酸－2.4－ = +H2O
COOH 硝基苯腙
2.4－二硝基苯肼 酸性，草黃色，加鹼，棕紅色
與標準濃度丙酮酸生成的苯腙比色（505nm）
2.正常參考值：8-28u
3.注意事項
（1）溶血標本不能用於AST測定，因為RBC中AST是血清10倍。
（2）M－AST、C－AST理化性質，Ag性均不同，由不同基因控制，但催化相同反應，是同I酶
（3）賴氏比色法簡易性，相對準確性，所以是普及的原因
（4）難以確定在酶反應期內，產物的生成與時間成正比。
草醯乙酸是AST競爭抑製劑，隨反應進程，產物，酶反應不斷。
（5）顯色反應及底物濃度問題。
酮戊二酸也可與2.4－二硝基苯肼反應，產生另一棕色苯腙，使AST測定假陽性增高。
為了減少其干擾，波長選在490-530nm，此時丙酮酸為－酮戊二酸2倍
2.4－二硝基苯肼在鹼性溶液中也可呈色，使吸光度偽性增高。
（6）A、偶聯轉氨作用：
ALT
丙酮酸+谷氨酸丙氨酸
所以肝疾病AST、ALT同時，使丙酮酸消耗，AST測定結果減低。
B、產物旁路
乳酸
LDH ↑NADH+H+
丙酮酸
↑
α-酮戊二酸+天門冬aa AST 草醯乙酸+谷aa.
↓MDH+NADH+H+
蘋果酸
所以受LDH、MDH干擾，使AST測定結果減低
（二）酶偶聯一些外連續監測法：
1.原理：L－天門冬aa.+α-酮戊二酸 AST 草醯乙酸+谷aa.
草醯乙酸+NADH+H+ MDH L－蘋果酸+NAD+
340nm
吸光度下降值，計算AST活力
2.參考值：男<40u/L 37℃
女<35u/L 37℃
3.注意事項：
（1）采血后立即分離血清，避血溶血
血清與血塊不可長時間設置在一起
（2）血清，室溫4-8h，2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不變
（3）抗凝劑血漿：
不能用草酸鹽抗凝劑，因為可抑制AST活性
（4）AST濃度過高，稀釋重做。
（5）不存在偶聯轉氨作用和產物旁路問題
（6）不存在 酮戊二酸干擾，可適當提高底物濃度使反應完全
（7）底物中存在谷氨酸脫氫酶（GLDH）
α-酮戊二酸+NADH+H++NH3 GLDH 谷aa.+NAD++H2O
消耗NADH+H+，使結果偽性增高。
（8）轎清中丙酮酸LDH
丙酮酸+NADH+H+ LDH 乳酸+HAD+
消耗NDAH+H+，使結果偏高
（9）在指示酶作用有，草醯乙酸可自動脫羧生成丙酮酸，使結果偏低。應加LDH，使之成為乳酸，從而更加准
確反映AST活力。
所以MDH、LDH共同作為指示酶
三、臨床意義：
1.AST在心肌中含量最多，所以在急性心梗時6-12h↑，48h達高峰，3-5d恢復正常
3.急性肝炎，AST，ALT同時↑，可達正常值10-30倍，黃疸前期就已↑，有助於臨床早期診斷。
3.AST同I 酶：
<黃>血清酶測定時診斷心梗的意義：
心肌C、肝C出現實質性損害 M－AST C－AST↑
M－AST↑對肝病預後有一定診斷意義
心梗M－AST↑ 所以M－AST越↑，心梗併發心衰的發病率、死亡率越↑，尤其推測死亡率方面意義更大。
4.血清乳酸脫氫酶的測定：原理 PH對其影響
有五種同I酶LDH1－LDH5
一、LDH分佈和特點：
廣泛分佈，主要在腎，其次心，骨骼肌，其它肝、脾、胰、肺，上述組織病變，血清中LDH。主要催化以下反應：
L－乳酸+NAD+ 丙酮酸+NADH+H+
PH鹼 正反應（L－P）
PH中性 逆反應（P－L）
二、方法學
（一）比色法：P122
1.原理：L－乳酸+NAD+ LDH 丙酮酸+NADH+H+
PH8.8
丙酮酸+2.4－二硝基苯肼 → 丙酮酸－2.4－二硝基苯腙
酸 草黃色
加NaOH 棕紅色
顏色越深，酶活力越大
2.參考值：225-540u/dL
3.注意事項：產物生成量與反應時間不成比例
（1）標本嚴禁溶血 因為RBC內LDH活力是血清內的100倍。
（3）血清標本2-6 數天，室溫48h
（4）準確性和重複性在酶學檢驗中最差，因為五種同I酶與底物結合能力不同，最適反應條件不同，在病理
LDH組成差異大，所以很難找出LDH最適反應條件。eg：心梗LDH1↑，肝病LDH5↑
（5）結果>2500u/dL，將標本稀釋重做。
（二）連續監測法（酶法）：P120
1.原理：L－乳酸+NAD+ PH8.8-9.8 丙酮酸+NADH+H+
逆反應比正反應速度快2-3倍 所以反應偏向左側，多用P－L
LDH
丙酸酸+NADH+H+乳酸+NAD+
PH7.4
340nm處監測，吸光度下降幅度與LDH成正比。
2.參考值：240-460u/L 37℃
3.注意事項：
（1）逆反應優點：
a.試劑用量少，所需NAD+，只是L－P所用NADH+H+的3%，樣品少
b.單位時間內吸光度變化大，逆反應線性範圍較大，酶促反應速率比正反應快3倍，利於測定。時間短
c.酶活力隨時間的線性關係較長
（2）正反應優點：
a.NADH+H+比NAD+穩定，價格低，易得到純品。
底物L－乳酸與逆反應底物丙酮酸穩定
b.L－乳酸對LDH的抑制低於丙酮酸對LDH的抑制
（3）連續監測法可利用正、逆反應，優於比色法。
（4）金屬離子的存在可以降低NAD+穩定性
試劑中可加入EDTA，使EDTA絡合金屬離子，增加NAD+穩定。
（5）NAD+不穩定，產生對LDH有抑制作用的物質。在鹼性液中比在酸性液中穩定，在Tris緩衝液中比在磷酸
鹽緩衝液中穩定。
（6）某些批號的NADH+H+還有LDH的物質，使用前檢查NADH+H+質量，NADH+H+溶於Tris緩衝液，分別在
260nm和340nm測吸光度，應2.3，說明含有在260nm處有吸收峰的雜質，如NAD+、腺苷。
（7）α－酮丁酸，羥基丙酮酸、乙醛酸可代替丙酮酸作底物。
（8）標本不能溶血
三、臨床意義：
2.心梗：12-24h，LDH↑，48-72h達高峰，1-2W后恢復正常
3.惡性腫瘤晚期LDH，惡性腫瘤引起的胸腹水中LDH↑
小分子肽類。
低PH值也可抑制LDH活性。
5.尿毒症患者LDH正常，透析后LDH↑，因為體內尿素較高。
