法醫物證學

法醫物證學：是以法醫物證為研究對象，以提供科學證據為目的，研究應用生命科學技術解決案件中與人體有關的生物檢材鑒定的一門學科。法醫物證學是法醫學的分支學科，其研究內容屬於法醫學中的物證檢驗部分，是法醫學研究的主要內容之一。

法醫物證的特點：①法醫物證的穩定性受環境條件的影響；②法醫物證屬於“科學證據”。

法醫物證學→生物檢材→遺傳標記→個人識別

遺傳（heredity）：生物繁衍過程中，子代與親代相似的現象。

變異（variation）：生物繁衍過程中，子代與親代有所不同的現象。

遺傳標記（genetic marker，GM）：個體的單位遺傳性狀作為標誌用於法醫物證分析時，這種遺傳性狀就稱為遺傳標記。遺傳性狀，即生理生化特徵，可作為標誌來識別攜帶它的個體、細胞和染色體。單位遺傳性狀是指可檢測的、由遺傳決定的、並能夠以一定的規律從親代傳給下一代的形態學、生理學及分子生物學特徵。

DNA的變性和復性：某些理化因素（溫度、PH、離子強度等）會導致DNA雙鏈互補鹼基對之間的氫鍵發生斷裂，使雙鏈DNA解離為單鏈，這種現象稱為DNA變性。DNA變性只改變其二級結構，不改變它的核苷酸序列。當變性條件緩慢地除去后，兩條解離的互補鏈可重新配對，恢復原來的雙螺旋結構，這種現象稱為復性（renaturation）。融鏈曲線的中點所示溫度稱作該DNA分子的融鏈溫度（melting temperature，Tm），Tm是一半DNA分子變性時的溫度。

串聯重複序列（tandem repeats）：其結構形式是以相對恆定的短序列作為重複單位，首尾相接，串聯連接形成。在人類基因組中，串聯重複序列約佔10%，主要分佈在非編碼區，少數分佈於編碼區。編碼區中的重複DNA與功能有關，非編碼區串聯重複DNA多分佈在間隔DNA或內含子。

短串聯重複序列（short tandem repeats，STR）：

可變數目串聯重複序列（variable number of tandem repeats，VNTR）：

假基因（pseudogene）：是基因組中喪失功能的基因，這類基因或是在複製擴增過程中因為突變失去了調控信號，不再具有轉錄功能；或丟失拼接加工信號，轉錄產物無法正確拼接形成成熟mRNA；或在編碼區形成終止信號，產生不完整肽鏈。

多基因家族（multigene family）：是指一組具有功能相似，鹼基序列相同或部分同源的基因。

轉座子（transposon）：又稱為可移動DNA成分，是指DNA分子內或分子間可以轉移的DNA片段。除散布重複序列外，轉座子還包括DNA形式轉座子和擬反轉錄病毒反轉錄轉座子元件。

端粒（telomere）：線性形式基因組DNA的末端都有一種特殊的結構，是一段DNA和蛋白質形成的複合結構，叫做端粒。

DNA的甲基化修飾：生物體在DNA甲基轉移酶（DNA methyltransferase，DNMT）的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸（SAM）為甲基供體，將甲基轉移到特定的鹼基上的過程。甲基化修飾修飾限於CG序列中的胞嘧啶。

基因突變的分類：生物體的基因組DNA並不穩定，經常會出現各種各樣的可遺傳的改變，在子代留下變異的遺傳信息。在DNA分子水平，DNA損傷的後果之一就是突變（mutation）。主要分為編碼區鹼基突變和非編碼區突變兩種。①編碼區鹼基突變：鹼基替代在基因組中是最常見的突變形式，分轉換（transition）和顛換（transversion）兩種。②非編碼區突變：非編碼區DNA沒有表達產物，DNA複製中也能夠出現鹼基的錯配、插入和缺失，但是對細胞正常生理過程不構成實質性影響。無論在編碼區或非編碼區，突變的後果從沒有效應到有害效應和有利效應，各種情況都會出現。

同義突變（same sense mutation）：是指DNA組成變了，但密碼子沒有改變，或密碼子雖然不同，但編碼產生同一種氨基酸，這種突變又稱中性突變。

錯義突變（missence mutation）：是指DNA組成改變使編碼一種氨基酸的密碼子改變成編碼另一種氨基酸的密碼子。

無義突變（nonsense mutation）：是指某一鹼基的替換使氨基酸密碼子變為終止密碼，可過早地終止轉錄，形成無活性的肽鏈。

移碼突變（frameshift mutation）：DNA鏈上插入或缺失一個或n個核苷酸，使下游密碼子閱讀框發生變化，導致在插入或缺失部位以後的編碼發生相應改變。

終止密碼突變：是DNA分子中的某一終止密碼突變為編碼氨基酸的密碼子，從而使多肽鏈的合成至此仍繼續下去，直至下一個終止密碼為止，形成超長的異常多肽鏈。

沉默突變（silent mutation）：僅改變表達產物的單個氨基酸，對蛋白質的生理功能沒有影響的點突變，是形成蛋白質多態性的主要原因。

DNA多態性（DNA polymorphisms）：基因水平上的多樣性來自基因的突變，當基因突變以等位基因形式在群體中得以保留，並能夠從親代遺傳給子代，可形成個體間的遺傳差異。不同個體間的遺傳差異形式是不同的等位基因組成。等位基因之間的差異可以是點突變引起的序列不同，也可以是因為鹼基的插入或缺失引起的片段長度不同，都能構成具有個體特徵的DNA遺傳標記。DNA遺傳標記可以出現於編碼區，也可以存在於非編碼區。在基因組DNA中，這種由不同鹼基結構的等位基因所形成的多態性叫做DNA多態性。

DNA長度多態性（DNA length polymorphisms）：是指同一基因座上各等位基因之間的DNA片段長度差異構成的多態性。DNA長度多態性靶序列主要是指可變數目串聯重複序列（VNTR），VNTR既存在於小衛星DNA中，也存在於微衛星DNA中。由於命名習慣和為了便於區分，通常小衛星DNA中的可變數目串聯重複序列稱為VNTR，而把微衛星的可變數目串聯重複序列稱為短串聯重複序列（STR）。

DNA序列多態性（sequence polymorphisms）：是指一個基因座上，因不同個體DNA序列有一個或多個鹼基的差異而構成的多態性。可以理解為該基因座上所有等位基因DNA長度相同，但是它們之間的序列存在差異。在基因組DNA中，無論是編碼區或者非編碼區，單鹼基替換是最基礎的突變形式。在人類基因組範圍內，如果任何單鹼基突變使特定核苷酸位置上出現兩種鹼基，其中最少的一種在群體中的頻率不少於1%，就形成單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）。

限制性片段長度多態性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）：RFLP分析是一種傳統的分子生物學檢測技術，廣泛應用於突變分析、基因診斷、基因定位等各個方面。法醫物證鑒定應用RFLP技術主要是對人類基因組中的VNTR基因座進行分型，其技術核心是DNA分子雜交，決定RFLP分析圖譜個體特異性的因素是限制性核酸內切酶的特異性和探針的特異性。檢測所用的探針多是由人類基因組DNA中篩選出的小衛星序列，選擇特異性不同的探針，在不同的雜交條件下，可以只檢出單個VNTR基因座，也可同時檢出多個VNTR基因座，前者稱為DNA紋印，後者稱之為DNA指紋，檢測所用的相應探針分別被稱為單基因探針（single-locus probe）和多基因探針(multi-locus probe)。

Southern印跡雜交：是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性並在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定DNA分子的含量。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按鹼基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由於核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內切限制酶分析的結果，便可繪製出DNA分子的限制圖譜。Southern印跡雜交（Southern blot）是研究DNA圖譜的基本技術，在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產物分析等方面有重要價值。Southern印跡雜交的基本方法是將DNA標本用限制性內切酶消化后，經瓊脂糖凝膠電泳分離各酶解片段，然後經鹼變性，Tris緩衝液中和和高鹽下通過毛吸作用將DNA從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上、烘乾固定后即可用於雜交。凝膠中DNA片段的相對位置在DNA片段轉移到濾膜的過程中繼續保持著，附著在濾膜上的DNA與32P標記的探針雜交，利用放射自顯影術確立探針互補的每一條DNA帶的位置，從而可以確定在眾多消化產物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。（瓊脂糖凝膠電泳→硝酸纖維素膜吸印）。

限制性內切酶常見的有那些？

限制性內切酶（restriction endonuclease）：一種在特殊核甘酸序列處水解雙鏈DNA的內切酶。Ⅰ型限制性內切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；而Ⅱ型限制性內切酶只催化非甲基化的DNA的水解。

合成引物的要點，PCR的反應組成：

標準的PCR反應體系

PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即：① 模板DNA，②寡核苷酸引物，③dNTP，④反應緩衝液，⑤TaqDNA聚合酶。

PCR基本原理：

PCR技術是模擬生物體內DNA的半保留複製，在體外合成DNA鏈的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的條件下經過：“高溫變性→低溫退火→中溫延伸”三步循環，獲得大量擴增片段。

合成引物的要點：

引物合成是通過測定引物的OD值，溶解引物，最終合成引物的一個完善的過程。到2018年，引物合成基本採用固相亞磷醯胺三酯法。亞磷醯胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。亞磷醯胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相鄰的核苷酸通過3′→5′磷酸二酯鍵連接。

第一步，是將預先連接在固相載體CPG上的活性基團被保護的核苷酸與三氯乙酸反應，脫去其5′-羥基的保護基團DMT，獲得遊離的5′-羥基。

第二步，合成DNA的原料，亞磷醯胺保護核苷酸單體，與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的3′端被活化，5′-羥基仍然被DMT保護，與溶液中遊離的5′-羥基發生縮合反應。

第三步，帶帽(capping)反應，縮合反應中可能有極少數5′-羥基沒有參加反應(少於2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其後繼續發生反應，這種短片段可以在純化時分離掉。

第四步，在氧化劑碘的作用下，亞磷醯形式轉變為更穩定的磷酸三酯。

經過以上四個步驟，一個脫氧核苷酸被連接到固相載體的核苷酸上。再以三氯乙酸脫去它的5′-羥基上的保護基團DMT，重複以上步驟，直到所有要求合成的鹼基被接上去。

常染色體STR與性染色體STR有什麼不同？

常染色體STR：短串聯重複序列(STR)是廣泛存在於人類基因組中的一類具有長度多態性的DNA序列。它由2～6 個鹼基對構成核心序列，呈串聯重複排列，其長度多態性主要由核心序列拷貝數目的變化而產生。一般認為，人類基因組平均每6～10kb就有1個STR基因座，為法醫個人識別和親子鑒定提供了高信息基因座的豐富來源。與限制性片段長度多態性產生的DNA 指紋相比，用聚合酶鏈反應技術(PCR)擴增STR 基因座產生的DNA紋印具有更高的靈敏度。STR擴增片段較短(100～300bp),對於常見含部分降解 DNA的陳舊斑痕,PCR擴增STR比DNA指紋分析更容易成功。

性染色體STR：人類Y染色體屬於近端著絲粒染色體，由長臂Yq和微小的短臂Yp組成，DNA長度約60Mb。Y-DNA中大致有五類多態性遺傳標記：衛星DNA、小衛星DNA、微衛星DNA、插入或缺失及SNP。Y染色體STR基因座（Y-STR）是其中一種重要的遺傳標記。與常染色體STR基因座相比，大多數Y-STR基因座具有複雜的串聯重複結構：一個基因座內常含有兩種以上不同的重複單位，恆定重複序列和可變重複序列同時存在。與常染色體STR基因座比較，Y-STR分型的法醫學應用具有以下特點：①Y染色體為男性所特有，②Y-STR呈父系遺傳特徵，只能有父親傳遞給兒子，③在減數分裂過程中，Y-特異性區不發生重組，④評估Y-STR鑒別能力的指標是遺傳差異度，⑤和mtDNA一樣，Y-STR分型結果不具有唯一性，其法醫學應用價值在於排除，而不能認定。X-STR基因座具有伴性遺傳的特徵，X-STR的遺傳特徵既不同於常染色體，也不同於Y染色體，表現為性連鎖特徵。進行分型檢測時，男性個體X-STR顯現一條片段，女性雜合子則顯示兩條等位基因片段。

低拷貝DNA（low copy number，LCN）：是指基因組含量小於100pg的樣本。

PCR循環測序的基本原理：PCR技術能夠快速、特異性地擴增靶DNA，應用PCR技術測定DNA序列分為兩個步驟：先利用PCR擴增靶序列片段，製備測序模板，然後再利用PCR直接測定序列。PCR測序採用了熱循環高效合成DNA的特性並結合雙脫氧核苷酸終止法，使引物鏈終止的延伸產物數量在熱循環過程中得到增加，因此稱為循環測序。每個測序循環包括：①PCR擴增製備的模板DNA變性成單鏈形式；②標記引物與其中的一條鏈上的互補序列退火；③退火后的引物在耐熱DNA聚合酶催化下發生鏈延伸終止反應。本次循環產生的模板鏈與延伸終止鏈形成的雙鏈的產物，在下一輪測序循環中，再次被變性，釋放出模板鏈，作為又一輪引發反應的模板，同時積累下一輪循環產生的鏈終止產物。上述循環步驟重複20~40次，使鏈終止產物以線性方式獲得擴增。

DNA自動測序技術：DNA自動測序技術是以4種熒光染料基團分別作為4種ddNTP終止鏈的標記物，於20世紀80年代末期建立的一種高效、快速、自動化的序列測定技術。4種熒光染料分別作為測序反應中4種ddNTP終止鏈的標記物，即4種被雙脫氧核苷酸終止的DNA片段分別帶上4種不同的顏色。這些DNA片段的混合物同時加在一個樣品槽中電泳展開，相互間僅差1個鹼基的DNA片段形成一條具有4種顏色的階梯分布圖像。階梯中的每- DNA片段由標記在該片段上的特徵性熒光基團發出的熒光所指示。

熒光染料基團作為標記物的基本要求是經過激光誘發的吸收光譜波長在可見光波長範圍內，不影響延伸反應，不影響標記后DNA片段的電泳性質。其次要求4種熒光的吸收和激發光波長要有足夠的差異，便於檢測。熒光染料的摻入的方式有兩種：一種是將熒光染料預先標記在測序反應通用引物的5’端。4種熒游標記形成4種標記引物，測序反應分4個反應管進行，特定的熒光染料與相應的ddNTP是對應關係，例如熒光示蹤染料JOE標記的通用引物總是與ddATP加在同一個反應管內，因此由ddATP終止的所有延伸鏈都帶有JOE。這種方式被稱為Dye-Primers。另一種是將熒光染料基團連在ddNTP上，4種熒光染料分別與4種ddNTP底物連接，反應產生的4組DNA片段分別由特定ddNTP所終止，並且標記有4種不同的熒光發色基團，A、C、G和T分別攜帶有綠、紅、藍、黃4種熒光。這種方式被稱為Dye-Terminators。兩種方式各有特點，不過前者要求A，G，C，T分4個反應進行，而後者的4組反應可以在同一管中完成。上述兩種方法都能確定4種熒光與4種ddNTP所終止的DNA片段之間的對應關係，這是後來從電泳中檢測標記物信號以及最終讀序的基礎。

自動測序儀器無論是變性PAG平板凝膠電泳還是毛細管電泳，都配置有激光束激發系統和熒光信號收集檢測系統。當DNA片段電泳通過檢測窗口時，在激光束的激發下，片段的電泳時間和被激發熒光的波長、強度等信號都被記錄，由計算機自動作數據處理，最後在屏幕上顯示每一樣品的各終止片段電泳分離的模擬圖像。不同顏色的峰標示各自標記的鹼基及其排列順序(如圖所示)：

MVP（minisatellite variant repeat）序列：稱為具有變異核心序列的小衛星DNA，是一類既有長度多態性又有序列差異的DNA重複序列。

線粒體DNA的特點：①人類線粒體的基因排列得非常緊湊，除與mtDNA複製及轉錄有關的一小段區域外，無內含子序列。②mtDNA為高效利用DNA有5個閱讀框架，缺少終止密碼子，僅以U或UA結尾。③mtDNA的突變率高於核中DNA，並且缺乏修復能力。④mtDNA為母系遺傳。⑤部分mtDNA的密碼子不同於核內DNA的密碼子。

血型（blood group）：是人類血液由遺傳控制的個體性狀之一，是血液的遺傳標記（genetic marker）。紅細胞血型是指紅細胞表面抗原由遺傳決定的個體差異。

ABO血型（重點）：ABO血型系統是最早發現，最重要的血型系統。人類學與遺傳學研究、器官移植，以及法醫學實踐中的個人識別與親子鑒定均需應用這個系統。.

一、ABO血型.4種普通血型的劃分及存在相應的抗體.

1.紅細胞ABO血型系統的分型。ABO血型系統分四種型：即O型、A型、B型與AB型。.

2.四種血型個體血清中存在的相應抗體：血清中有天然抗體，B型血清中有抗A抗體；A型血清中有抗B抗體；O型血清中有抗A、抗B及抗A，B等抗體；AB型血清中沒有抗體ABO血型抗體恆定地存在於正常人的血清中，可以預測其存在，故稱為規則抗體。.

3.正常的A、B、AB、O型的檢測。利用抗A與抗B血清，以及A與B型紅細胞，可以測定未知血液的ABO血型。.

二、ABO血型抗體.

正常情況下，凡紅細胞沒有某一種或某兩種ABO抗原，又無明顯的外來A或B抗原的刺激，其血清中含有與紅細胞上缺失抗原相對應的天然抗A、抗A1或抗B抗體。.

(一) 抗A、抗B抗體的生成.

新生兒血中的IgG抗A與抗B抗體多來自母體，故一般不對新生兒進行血型測定。3～6個月以內的嬰兒，多數尚未產生抗A與抗B抗體；6個月以後，抗體逐漸產生；5～10歲抗體效價達最高峰；隨著年齡的增長，抗體效價逐漸降低，老年人抗體水平明顯地低於年輕的成年人。.

(二) 抗A、抗B抗體的特性.

1、抗A與抗B抗體最顯著的血清效應是凝集反應，在適當的條件下也可以發生溶血反應；.

2、ABO血型測定都在室溫中(22～25℃)進行，偶爾在4℃下進行；.

3、抗A和抗B抗體可以是天然的，也可以是免疫抗體；.

4、B型與A型血液中的天然抗A與抗B抗體大多數是IgM；.

5、天然IgM與IgG抗A與抗B抗體均能在鹽水介質中使紅細胞發生凝集反應，在室溫中具有抗體活性。.

(三)抗H抗體.

由於O、A、B或AB型紅細胞結構上含有H成分，故其血清中很少有抗H抗體。.

三、ABO血型的遺傳.

(一) 各種不同表型的雙親所生子女的血型。.

(二) ABO血型按孟德爾規律遺傳.

ABO血型系統按孟德爾定律遺傳，人類染色體上的一個座位為.A、B、O.三個等位基因之一所佔，每一個體有一對染色體，一條來自父親，另一條來自母親，紅細胞ABO型的表達由基因決定。

ABO血型有4種普通型，由復等位基因.A、B及O.所控制，有6種基因型，決定4種表現型。

四種表現型、六種基因型，一個基因座位，三個等位基因。.

何謂ABO血型的正反定型？

①正定性試驗：根據RBC與特異性抗體的反應來分型，即用抗A抗體判定A抗原，用抗B抗體判定B抗原。②反定型試驗：依據血清中的凝集素與標準型RBC膜上的凝集原反應的性質。

試述ABO血型的DNA分型方法

①PCR-SSP序列特異性引物PCR技術：特異性強、重複性好；②PCR-RFLP。

Rh血型：凡是人體血液紅細胞上有Rh凝集原者，為Rh陽性。反之為陰性。這樣就使已發現的紅細胞A、B、O及AB四種主要血型的人，又都分別一分為二地被劃分為Rh陽性和陰性兩種。在中國，Rh陰性血型只佔千分之三到四。RH陰性A型、B型、O型、AB型的比例是3：3：3：1。Rh血型鑒定：RhD抗原分佈：Rh血型鑒定一般指Rh系統中D抗原的檢測，根據病人紅細胞是否帶有D抗原分為Rh陽性和Rh陰性。Rh血型鑒定正常值：①Rh+，稱作“Rh陽性”、“Rh顯性”，表示人類紅細胞有“Rh因子”；②Rh-，稱作“Rh陰性”，“Rh隱性”，表示人類紅細胞沒有“Rh因子”。

HLA（human leukocyte antigen）抗原：即人類白細胞抗原，是人類最複雜的顯性遺傳多態性系統，也是迄今為止人類基因組中密度最高的區域。HLA系統具有極其重要的功能，如抗原的加工、呈遞，控制免疫應答，調節免疫細胞間相互作用，對異體移植物的排斥，腫瘤監視，參與大量的自身免疫性疾病的發生。人類白細胞膜上的抗原分為三類：①是紅細胞血型抗原，如ABH、Lea、Leb、Jka、K、k、Dib等；②是白細胞本身特有的抗原，如CD4、CD8、Leu8等；③是與其他組織共有的，也是最強的同種抗原，即人類白細胞抗原。

HLA抗原的結構和分佈：HLA-I類和HLA-II類抗原存在於細胞表面，為跨膜蛋白質，均為異二聚體蛋白。HLA-I類抗原分佈廣泛，幾乎存在於所有的有核細胞表面，以淋巴細胞上的密度最高；含有HLA-II類抗原的組織比I類抗原少得多，密度最高者為樹突狀細胞、單核細胞，一些吞噬細胞亞群及B細胞。結構：HLA-I類基因產物為HLA-A、B和C抗原，由重鏈和輕鏈兩條多肽鏈構成；HLA-II類基因產物為HLA-DR、DQ、DP抗原，均為跨膜糖蛋白，由α和β兩條鏈構成。

HLA遺傳：HLA基因定位於6號染色體，占整個人類基因組全部鹼基序列的0.12%。HLA區主要有HLA-I、II、III類基因座。表現為：共顯性遺傳、單倍型遺傳、連鎖不平衡。

HLA抗原的分佈：①HLA-I類抗原：分佈廣發，幾乎存在於所有的有核細胞表面，以淋巴細胞上的密度最高；②成熟RBC上沒有HLA-A、B、和DR抗原，幼稚RBC卻有；③HLA-II類抗原：密度最高者為DC、單核細胞，一些吞噬細胞亞群及B細胞；④II類抗原作為一種分化抗原在不同細胞上表達，大多數骨髓分化細胞具有HLA-II類抗原。

親子鑒定（parentage testing）：是通過對人類遺傳標記的檢測，根據遺傳規律分析，對有爭議的父母與子女血緣關係的鑒定。親子鑒定的可參考指標有很多，包括非遺傳特徵與遺傳特徵兩大類。

非父排除概率：是指不是小孩生父的男子（簡稱非父）能被遺傳標記排除的概率。是衡量遺傳標記系統在親子鑒定中實用價值大小的指標。不同遺傳標記有不同PE值。

1、何謂遺傳標記？

個體的單位遺傳性狀作為標誌用於法醫物證分析時，這種遺傳性狀就成為遺傳標記GM。

2、何謂基因、基因型和表型？

1)基因型：是指個體一個或多個基因座上等位基因的組合，是生物體可見性狀的實際基因組成。

2)表型：是指生物體某特定基因所表現的性狀。表型由基因型決定。

3、Hardy-Weinberg平衡定律的前提條件和意義

1)前提條件：群體無限大、隨機婚配、沒有突變、沒有大規模的遷移和沒有選擇因素的影響。

2)結論：群體中的基因頻率和基因型頻率在逐代傳遞中保持不變。

3)意義：

4)反映基因頻率和基因型頻率的關係（純合子基因型頻率=基因頻率的平方，雜合子=該兩基因頻率乘積的二倍）

5)群體樣本的檢驗

4、非父排除概率（P23）

PE是指孩子的非親生父親的男子，能夠被某個遺傳標記系統排除的概率。

PE用於評估某一遺傳標記系統在親權鑒定案件中的實用價值。

5、何謂個人識別概率？（P22）

個人識別概率（DP）是指在群體中隨機抽取兩個體，兩者的遺傳標記表型不相同的概率。

DP是評價該遺產標記系統識別無關個體效能大小的指標，DP越高，效能越強。

1、何謂DNA多態性？（P37）

1)在基因組DNA中，由不同鹼基結構的等位基因所形成的多態性叫做DNA多態性。

2)按照DNA遺傳標記的結構特徵，DNA多態性可分為長度多態性和序列多態性。

2、何謂VNTR？（P37）

小衛星DNA中的可變數目串聯重複序列稱為VNTR。

3、何謂STR？

微衛星的可變數目串聯重複序列稱為短串聯重複序列，STR。

1、RFLP

2、Amp-FLR

3、DNA指紋圖譜的基本特徵？

1)遺傳方式：孟德爾規律、所有片段獨立遺傳

2)個體的組織同一性：穩定一致

3)群體遺傳學特徵：

4)突變率：配子細胞形成時重排、重組與交換

4、DNA紋印圖譜的基本特徵？

1)高多態性

2)遺傳規律：共顯性

3)個體組織同一性：一致

4)群體遺傳學特徵：

5)高突變率：配子細胞形成時重排、重組、交換

5、何謂擴增片段長度多態性分析？

Amp-FLR：採用PCR技術擴增VNTR或STR基因座等位基因進行DNA長度多態性分析的方法。

6、RFLP與Amp-FLP技術有何異同？（P74）

7、STR分型用於法醫物證鑒定的主要優點？

1)高靈敏度：適用於微量降解檢材

2)高鑒別能力：節約檢材、試劑和提高效率

3)標準化分型：實現數字化結果，利於實驗室間數據交換，建立資料庫

8、何謂miniSTR？miniSTR分型有何法醫學應用價值？

1)miniSTR：通過重新設計引物，使其結合在更靠近核心重複區的側翼序列，從而降低擴增產物的大小，進一步提高靈敏度和分型成功率，這種技術稱為短片段STR分型或miniSTR分型。

2)miniSTR法醫學應用價值：

STR基因座的擴增片段較短，靈敏度更高，尤其適用於微量或降解生物檢材的DNA分型；

等位基因片段長度範圍較窄，不易發生因小等位基因的優勢擴增而造成的等位基因丟失現象；

可對多個STR基因座進行複合擴增，從而節約檢材、降低成本，提高單次檢測的信息量

9、何謂多基因座複合擴增？

1)在一個PCR體系中同時擴增多個靶基因座的方法叫做複合擴增。

2)複合擴增可提高單次檢測的信息量，提高個人識別率，也可降低成本和檢材的消耗。

10、Y-STR有何法醫學應用特點？

1)Y染色體為男性特有

2)Y-STR呈父系遺傳特徵

3)單倍體遺傳：在減數分裂過程中，Y-特異性區不發生重組，所有Y-STR基因座均呈連鎖遺傳，等位基因頻率不能以相乘方法計算

4)GD=PE

5)結果不具有唯一性，不能認定

11、Amelogenin基因（名解）

牙釉基因（AMG）：位於X染色體Xp22，編碼牙原基質牙釉質蛋白，故命名牙釉基因。在人Y染色體中心粒附近有一類牙釉基因（AMGL），與牙釉基因的鹼基序列有90%同源性。用一對特異性引物可同時擴增AMG和AMGL序列片段，X特異性片段長度為977bp，Y為788bp。擴增后，男性可獲得兩條帶，女性只觀察到一條帶。

但是其擴增產物較長，不適合腐敗血痕、過於陳舊血痕的性別鑒定。

1、簡述STR自動分型技術的主要步驟

1)DNA自動化提取

2)PCR多色熒游標記STR複合擴增

3)PCR產物電泳前處理

4)自動毛細管電泳結合激光誘導的熒光檢測

5)自動數據採集並分型

2、何謂off-ladder

1)在STR分型圖譜中，常會遇到部分樣本的少量片段峰未被程序化數字命名，在分型圖譜中被標識為off-ladder

2)漂移作用和新等位基因都可標識為off-ladder

3、何謂LCN

LCN：基因組含量小於100pg的樣本稱為低拷貝DNA（low copy number）。

1、人類核DNA與mtDNA的比較（P179）

2、mtDNA的特點？

1)唯一的核外DNA來源

2)拷貝數多和異質性（當兩種不同的mtDNA序列存在同一個細胞、組織或者個體時稱之為異質性）

3)母系遺傳

4)抗外切酶的環狀結構有助於分子穩定性，對高度降解檢材奏效

5)瓶頸效應和複製分離

6)閾值效應

3、mtDNA分型的優點？

1)高變區作為遺傳標記用於法醫鑒定，高變區又稱D-環區

2)當細胞核DNA量不足而無法進行分型時，線粒體DNA技術分析是唯一可以利用的技術

3)生物檢材中的毛髮、骨幹、牙齒和其他嚴重降解的檢材也依賴線粒體DNA分析

4)簡單易操作、檢材靈敏度高

5)所需模板DNA減少

6)減少DNA二級結構干擾

4、mtDNA分型的主要方法？

1)mtDNA提取（抽提）

2)PCR

3)純化PCR產物

4)循環測序反應原理ddNTP→core，only 1 primer

5、mtDNA分型的特殊問題？

1)mtDNA屬於母系遺傳，凡屬同一母系的後代，mtDNA序列都是相同的。序列一致只能說明不排除同一個體的可能；

2)mtDNA能夠提供的信息量有限（單倍型）→排除同一性（真正價值）

3)mtDNA的異質性違背同一個體mtDNA序列必然是一致的前提條件，給個體識別鑒定增加了變數；（如果多份檢材異質性出現於同一位置的同一鹼基貶義，反而對認定同一個體檢材有利）

6、mtDNA分型的法醫學應用局限性

1)分型技術要求高，耗時耗力耗錢

2)識別力相對較低：非個體唯一，共有單倍體（母系遺傳）

3)異質性

4)資料庫規模：易高估其識別能力

5)無法進行混合斑的檢測

1、何謂ABO血型的正反定型？

1)正定性試驗：根據RBC與特異性抗體的反應來分型，即用抗A抗體判定A抗原，用抗B抗體判定B抗原。

2)反定型試驗：依據血清中的凝集素與標準型RBC膜上的凝集原反應的性質，即用標準的A型RBC判定抗A抗體，用標準的B型RBC判定抗B抗體，同時也應用抗H抗體判定H抗原。

2、試述ABO血型的DNA分型方法

1)PCR-SSP序列特異性引物PCR技術：特異性強、重複性好 2）PCR-RFLP

3、中和試驗的基本原理？

1)不完全Ab

2)遮斷作用

3)判斷不完全Ab是否與Ag凝集

4、Oh型血清學特點？

1)在RBC上及唾液中均無ABH抗原，即不被抗A、抗B及抗H所凝集

血清中有抗A、抗B及抗H凝集素，可分別凝集A、B、O型RBC

1、HLA抗原的分佈

1)HLA-I類抗原：分佈廣發，幾乎存在於所有的有核細胞表面，以淋巴細胞上的密度最高。

2)成熟RBC上沒有HLA-A、B、和DR抗原，幼稚RBC卻有。

3)HLA-II類抗原：密度最高者為DC、單核細胞，一些吞噬細胞亞群及B細胞；

4)II類抗原作為一種分化抗原在不同細胞上表達，大多數骨髓分化細胞具有HLA-II類抗原。

2、HLA命名原則

1)以大寫字母A、D、C....表示HLA遺傳區域中的座位

2)HLA抗原特異性用數字錶示

3)為防止與補體組分命名相混淆，HLA-C抗原特異性以Cw為字首命名

4)HLA基因命名一般以4位數字錶示，其中前2位數字錶示對應最相近的HLA抗原特異性，后2位數字則用於表示亞型的等位基因，如A*0101

5)如果出現第五位數字，則代表“沉默取代”，即該基因雖發生了個別鹼基的替換，但新密碼子與原密碼子屬簡併密碼，不影響所編碼的氨基酸序列

6)第6、7位數字代表相應的啟動子序列的多態性

7)末尾加英文字母N表示無效基因或不表達基因

8)在不能區分等位基因時，可允許最前面的2位或4位數字錶示該HLA的特異性

3、HLA遺傳特徵

1)共顯性遺傳：每個HLA基因座表達一對抗原，人類HLA每個基因座上有眾多等位基因。故如果血清學方法分型時，個體只檢測出了一個抗原則有三種可能：該抗原的純合子、HLA血清板不完全、存在一種至2018年尚未發現的抗原。

2)單倍型遺傳：單倍體是指一條染色體上HLA各基因座的基因緊密連鎖組成的基因遺傳單位。

3)連鎖不平衡：HLA在實際群體調查發現，各基因座的基因並非完全隨機組成單倍型，有些單倍型觀察頻率高於期望頻率或低於期望頻率，這種現象稱為連鎖不平衡。處於連鎖部平衡狀態說明HLA不同基因座的基因之間存在關聯，具有一同遺傳的趨向。

4)HLA高多態性

4、微量淋巴細胞毒性試驗原理（血清學分型）

1)微量淋巴細胞毒性試驗或稱補體依賴的細胞毒性試驗，其分型原理為

2)Ag-Ab-C：淋巴細胞膜上的HLA抗原與已知HLA血清中相應抗體結合后，形成抗原抗體複合物，再結合補體。

3)C激活、破壞Lc：被激活的補體系統產生細胞毒性，攻擊淋巴細胞，淋巴細胞膜破壞。

4)死細胞著色：經過染色，染料進入破損細胞內著色，為陽性結果。

5)計數：在倒置相差顯微鏡下觀察，計數著色細胞所佔細胞數目的百分比。

5、HLA抗血清與交叉反應

成功的關鍵是HLA抗血清的質量

根據與抗原決定鏃的反應，可把HLA抗體分為2組：

1)抗體僅與一種HLA基因產物反應

2)抗體能與不止一種HLA基因產物結合

6、斑點雜交（PCR-SSO分型方法）

將PCR擴增片段製成斑點，用等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交，通過探針放射自顯影結果進行HLA分型。反向斑點雜交（RDB）：把探針預先固定在膜上，標記PCR引物。

7、比較HLA血清學分型和DNA分型方法的可靠性

HLA個體遺傳差異的本質不是在於血清學方法所檢測的抗原，而是在編碼基因產物的DNA分子上。

DNA分型優於血清學方法在於：

1)試劑由化學合成，便於標準化和實驗室間相互比較結果

2)對檢材要求不高（血清學方法因需要活細胞而難以用於斑痕HLA分型）

3)血清學與DNA分型不完全相同的分型誤差得以解決

血清學方法發生的錯誤主要集中在：

1)交叉反應抗原

2)能否正確指定屬於A9和A19的亞型，這些抗原多在交叉組內或是寬特異性抗原的裂解產物

3)未能檢出WHO命名的全部基因

4)純合子細胞中存在假陽性反應

5)HLA-C大量“空白”基因，沒有相應的抗血清檢測它們的產物（DNA分型技術促進和改善了對HLA多態性的解析度）

8、HLA在法醫學上的意義

1)高度多態性

2)出生時已完全發育，終身不變

For 同一認定、個人識別

1、等電聚焦技術for 亞型

2、Hp分型原理、方法及法醫學應用評價

Hp：結合珠蛋白，血清中，能與Hb結合使Hb過氧化物酶樣活性顯著↑的糖蛋白

分型：HP1-1、Hp2-1及Hp2-2

遺傳變異，Hp0（無結合珠蛋白血症）:→不能用於流產胚胎或<4mon的新生兒的親子鑒定。

原因：

1）溶血性貧血，特發性貧血，白血病，尿毒症等，患者的血漿Hp含量明顯下降；

2）嚴重肝臟疾病如急性肝炎、肝硬化，Hp合成障礙；

3）胎兒及部分新生兒（4個月後大部分能檢出）；

4）少數正常個體（注意假陰性）。

分型原理：

1)型別分離：PAG圓盤電泳：利用PAG的分子篩作用和電場作用，在柱狀凝膠中分離不同型別的Hp蛋白。Hp-Hb，Hb過氧化物酶樣活性使聯苯胺→氧化為聯苯胺藍→顯色；（just for新鮮血清中Hp型別）

2)Hp亞型等電聚焦電泳分型

3)DNA分型：利用基因特異性探針進行雜交分型、PCR擴增

3、Gc分型原理、方法及法醫學應用評價

Gc：維生素D結合蛋白DPB，也成型特異性成分，電泳屬a2球蛋白，主要生物學功能是結合和轉運維生素D

分型原理：

1)免疫電泳

2)PAG圓盤電泳

3)等電聚焦技術

4)DNA分型

Gc法醫學應用評價

1)個人識別率為0.799

2)非父排除率為34.8%

3)室溫保存4個月的血痕可檢出Gc型

4)4℃條件下保存6個月的尿液可檢出Gc型

5)在血痕檢測中，優於Hp

4、試述免疫球蛋白同種異型分型原理、方法及法醫學應用評價

同種異型：是指免疫球蛋白上具有表達個體差異的抗原決定簇，由編碼免疫球蛋白多肽鏈基因的等位基因所表達產生，表現為同一種屬不同個體的免疫球蛋白抗原性不同，具有遺傳多態性。

人類免疫球蛋白同種異型的命名是根據抗原決定簇位於重鏈或是輕鏈。

分型方法：

1)血凝抑制試驗

2)酶聯免疫試驗

3)膠體金免疫層析技術

4)PCR擴增

法醫學應用評價：

1)Gm及Km系統DP及PE均高於已知的RBC血型、RBC酶型及其他血清型

2)Gm及Km抗原在常溫下或鹼性環境中頗為穩定，溶血對抗原性無大影響

5、等位基因排斥現象：免疫球蛋白同種異型的遺傳，在重鏈或輕鏈的同一位置上氨基酸不相同的同種異型是由常染色體共顯性基因遺傳的。但基因的表達具有等位基因排斥現象。雖然雜合子的兩個等位基因同時表達，但任何一個免疫球蛋白分子只有一個同種異型。因為一個B細胞只能表達一種等位基因，稱為等位基因排斥現象。

6、Gm系統：免疫球蛋白同種異型兩個相互獨立的連鎖群基因的其中重鏈標記，決定IgG同種異型。

1、同工酶的分型方法

1)同工酶的多態性採用凝膠電泳方法進行分型

區帶電泳：利用酶蛋白分子的大小和所攜帶電荷數量（酶蛋白的電荷密度的差異）→Rf

等電聚焦技術：根據酶蛋白分子的等電點不同，在pH梯度介質中，酶蛋白分子聚焦在相應的等電點pH位置上，形成狹窄而清晰的區帶

2)凝膠介質上酶區帶的顯現及鑒定

直接底物顯色法：常用於測定水解酶，無色底物被酶催化反應轉變成有色產物

熒光染色法：酶催化下，非熒光底物生成高度熒光的產物或使熒光底物轉化成非熒光產物（負熒光染色）

電子轉移染料染色：酶催化下，同時NAD+或NADP+還原成NADH或NADPH，同時提供電子。染料還原成暗藍紫色的不溶性甲月替。

2、PGM1分型原理、方法及法醫學應用評價

PGM：磷酸葡萄糖變位酶（Mg2+→（+），Zn2+→（-））

PGM1同工酶活性很高，廣泛存在於人體和動物體內各種組織中，esp心、肝。

分型：

澱粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳，pH7.4的緩衝系統：從（-）→（+），譜帶順序為a、b、c、d（PGM1基因產物，具有個體差異）、e、f、g（PGM2基因座產物，多態性較低）。PGM1-1=ac，PGM12-1=abcd，PGM1=ac，PGM2=bd

亞型使用PAG等電聚焦技術

DNA-RFLP分型：在PGM1的exon4和exon8中多態性鹼基均涉及限制性內切酶識別序列的改變

檢出時限：

室溫保存的血痕樣品4-6w內可以準確分型

條件較好、保存得當：3-4mon

低溫保存：更長時間

陳舊血痕：可能在d帶區域出現一條擴散的譜帶，干擾正常判型

3、EsD分型原理、方法及法醫學應用評價

EsD：酯酶D，存在於RBC和組織中的水解酶

EsD表型：3種表型，EsD1-1=12，EsD2-2=23，EsD2-1=123（其中1帶活性最高）

分型方法：

澱粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳法：解析度較好、方法簡便、較常用

醋酸纖維素膜電泳法

PAG等電聚焦法

檢出時限：室溫3-4mon，低溫0.5yr；組織檢材EsD分型的檢出時限較血痕短。

4、EAP分型原理、方法及法醫學應用評價

1）EAP：紅細胞酸性磷酸酶，酶活性以前列腺最好，RBC次之。

2）分型：

澱粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳

醋酸纖維素膜電泳

PAG等電聚焦電泳

3)檢出時限：室溫9w

4)早孕絨毛組織EAP表型能代表胎兒表型，可用於妊娠早期的親自鑒定

5、作為個人識別和親自鑒定的同工酶的條件：

1)酶型多態性程度高，鑒別能力及PE高

2)酶的催化活性易於測定

3)酶活性高而穩定，不易受乾燥和其他理化因素影響

4)電泳檢測操作簡便，結果重複性好

5)除血液外，在其他人體組織及細胞也可檢出相同的型別

1、何謂PE

PE：非父排除概率，是指不是小孩生父的男子（簡稱非父）能被遺傳標記排除的概率。

是衡量遺傳標記系統在親子鑒定中實用價值大小的指標。不同遺傳標記有不同PE值。

2、試述父權指數與父權相對機會

1)父權指數：是親子關係鑒定中判斷遺傳證據強度的指標，它是判斷親子關係所需要的兩個條件概率的似然比，即具有AF遺傳表型的男子是孩子生物學父的概率（X）與隨機男子是孩子生物學父親的概率（Y）的比值，PI=X/Y。

2)父權相對機會：是兩個條件概率的比值，它的一個條件概率可以按Bayes定理換算成為另外一個條件概率，從而引出另一個參數，稱之為父權相對機會（RCP）或父權概率（W=PI/（PI+1）），

3、何謂排除父權的標準

1)否定父權不僅需要考慮遺傳標記在兩代人之間是否符合遺傳規律

2)也要考慮遺傳標記在親子鑒定中的系統效能（DP）

遺傳標記數↑，CPE↑，鑒定能力↑；由於是的遺傳標記↑，遇到遺傳變異的可能性↑；

P285為了避免潛在遺傳變異的影響，排除父權至少應根據兩個以上遺傳標記。

4、何謂認定父權的標準

1)父權指數：

2)父權相對機會：

3)實驗用遺傳標記累計排除概率大於等於0.9999.

4)CPI>10^4

1.生物物證，物證是指對案件的真實情況有證明作用的物品。物證包括的內容很多。其中生物體(人或動物)的組織器官、各種體液、分泌液、排泄物及其斑痕等生物性檢材是本學科研究對象。

2.生物檢材的範圍。

(1) 體液及其斑痕。

(2) 各種人體組織、器官。

一、任務：解決生物性檢材的個人識別及親子鑒定等問題。

二、意義：法醫物證的鑒定可以為偵查破案提供線索，縮小偵查範圍，可揭露犯罪事實真相為案件的審判提供科學依據。

三、民事案件或刑事案件需作法醫物證所涉及的情況。

法醫物證是一門應用科學，研究的方法涉及多種學科包括：

一、化學

二、物理學

三、電子計算機

四、形態學

五、免疫血清學

六、生物化學

七、分子生物學

八、遺傳學等方法

（一）基本規則

1．檢材均應直接提取，易攜帶物品整體提取；不易攜帶物品提取附著檢材的部位。2．根據檢材附著的不同載體，應採取擦拭、剪切、刮削、吸附、浸泡、鑿鋸、挖取等方法提取。

3．在提取檢材前後應進行照相或錄像。

4．不同部位的檢材應分別提取，單獨包裝。

5．提取用具要潔凈。

6．使用適當的封裝材料，做好檢材提取記錄。

7．提取檢材時，注意要提取對照樣品。

8．提取的各種新鮮液體物證應儘快檢驗，剩餘部分應製成紗布斑跡乾燥保存；人體組織應冷凍保存。

9．提取的各種體液性的檢材應在陰涼通風、可防止污染處自然乾燥成紗布斑跡，禁止暴晒或加熱烘乾。

10．提取的檢材在包裝和攜帶運送過程中應避免互相摩擦、衝撞以及失落，易碎檢材防止擠壓和震動，易散失檢材嚴密包裝，易腐敗檢材低溫保存送檢。

（二）防止污染原則

1．提取檢材時必須使用一次性用具，每提取完一份檢材應及時更換，禁止重複使用和赤手觸摸檢材。

2．提取檢材時必須使用無菌的提取試劑和轉移用載體。

3．提取檢材時不得說話、打噴嚏等，以免造成污染。

4．提取檢材時一次只能提取一件檢材。

5．禁止多件檢材混合包裝，禁止重複使用封裝材料。

（三）個人防護原則

1．所有的檢材應都視同為可能的傳染源，提取檢材時應穿戴好防護用品。

2．檢材提取人員手上的任何切口和擦傷都要用防水織物包紮。

3．在提取開始和結束后對手部進行消毒。

1．法醫物證檢材包括血液（痕）、精液（斑）、唾液（斑）、毛髮、組織、骨骼等各種含有人體細胞的生物檢材。由於載體的不同，現場提取時需注意去發現和提取各種形式的生物物證檢材。

2．提取檢材前注意記錄檢材的大小、形態等特徵提取的檢材必須分別包裝，在包裝袋上註明檢材名稱、來源、數量、採集日期等，並有採集人及採集見證人的簽名。

3．對於活體檢材，一般用醫用消毒紗布或中速濾紙採集指血或耳垂血（2cm2以上），自然晾乾。可以用口腔拭子提取口腔粘膜細胞，提取前須清水漱口，檢材自然晾乾；或取毛髮3根－5根。以上檢材均用紙袋包裝后常溫保存。

4．對於血痕，類似衣褲、地毯、床單上的血痕，可以剪下一部分紙袋包裝后常溫保存；類似衣櫃、牆壁、地面、刀、斧上的血跡可以刮取，或用生理鹽水浸濕的紗線提取，自然晾乾后紙袋包裝常溫保存。

5．涉嫌性侵害的，應用棉簽分別提取陰道外端、中部和后穹窿部，必要時還應注意會陰、下腹、口腔、肛門等部位有無精液（斑），以及現場懷疑有精斑的其他檢材，如床單、被褥、衛生紙、避孕套、內褲、衣物等。所有檢材應該分別提取、標明記號、自然晾乾、紙袋包裝后常溫保存。

6．現場的可疑毛髮用鑷子提取，用紙摺疊後置紙袋內常溫保存。

7．含有唾液斑的檢材如煙頭、果核、香口膠等用鑷子提取，紙袋包裝后常溫保存。8．人流刮宮組織，取5g以上確認為絨毛的組織；引產胎兒，取5g以上的組織；羊水，取2ml以上的液體。提取的檢材潔凈容器包裝、冰凍保存、冷藏送檢。

9．新鮮屍體，可用醫用消毒紗布或中速濾紙提取血液（3cm2以上），自然晾乾，紙袋包裝后常溫保存。新鮮屍體也可取肌肉組織（50g以上）；腐敗屍體，盡量提取相對新鮮的組織，包括指甲（2枚以上）、肋軟骨（5cm以上）或者其它軟骨（5g以上）、深部肌肉組織（5g以上）、毛髮（10根以上）；白骨化的屍體儘可能提取指甲、長骨、牙齒、毛髮。以上檢材潔凈容器包裝、冰凍保存、冷藏送檢。

10．根據案件情況，注意提取對照樣本。

不損失、不污染、不破壞

1)翻動物件或是提取物證前，要先拍照、錄像、繪圖、記錄和測量，以顯示物證原始狀態和位置

2)必須戴手套持潔凈器具提取，禁止用手直接觸摸檢材

3)提取的檢材寧多勿少，盡量保持其原狀不受損傷

4)根據檢材的種類採用適當的方法提取

5)不同部位的檢材應分別提取、分別包裝，並貼有唯一獨特標記

6)根據案件的情況，應盡量採集相關的對照樣本

7)提取的檢材必須詳細登記

8)嚴格遵守有關法律法規的規定

1、聯苯胺實驗

1)血痕預試驗，靈敏度高，操作簡便快速，特異性不好

2)意義在於陰性結果可以否定血痕

3)原理：利用血痕中的Hb或正鐵血紅素具有的過氧化物酶活性，使過氧化氫釋放出新生態氧，將無色聯苯胺氧化為聯苯胺藍。

4)取材注意：刮取微量，節約檢材

2、血色原結晶實驗（高山結晶試驗）

1)確證試驗，特異性好，靈敏度不高

2)意義在於陽性結果可確證檢材為血痕

3)原理：Hb在鹼性溶液中分解為正鐵血紅素和變性珠蛋白。在還原劑作用下，正鐵血紅素還原為血紅素，同變性珠蛋白和其他含氮化合物（如吡啶、氨基酸等）結合形成血色原結晶。

3、吸收-解離實驗

1)血痕的血型測定

2)要求Ab效價高一點好

3)原理：

可逆的結合反應——血痕中的A、B、H抗原能與相應的抗-A、抗-B、抗-H抗體發生特異性的結合反應；

加熱解離——56℃加熱后，血痕上抗原結合的抗體可以解離下來；

指示RBC檢測解離液中Ab——用已知A、B和O指示紅細胞檢測解離液中抗體。

結果判定——凝集（+），不凝集（-）

4、血痕檢驗一般遵循的基本程序是什麼？

1)肉眼檢查

2)預試驗

3)確證試驗

4)種屬鑒定

5)遺傳標記測定

6)其他試驗等：出血部位（混有組織細胞）、出血量（重量、分光光度）、出血時間

1、如何進行精液斑的個體識別

1)ABO血型測定：中和試驗（分泌型）、酶標抗體免疫測定法（非分泌型）、DNA分型（PCR、PCR-RFLP）

2)DNA分析：DNA提取（需要加入DTT）

2、試述精液斑與血痕ABO血型分型方法的區別

1)精液斑：

中和試驗（分泌型）

酶標抗體免疫測定法（非分泌型）

2)血痕：

吸收試驗（吸收-抑制試驗）

解離試驗（吸收-解離試驗）

3、試述精液斑與血痕DNA提取方法的異同

1)異：

精液斑：必須要切斷二硫鍵以消化蛋白（膜）→DTT（二硫蘇糖醇）

血痕：有機溶劑or Chelex-100

2)同：PK、SDS

4、試述Y-STR分型技術在精液斑個人識別中的優缺點

1)Y-STR呈男性伴性遺傳，不與其他染色體重組，除突變外，在父系的所有男性個體都具有相同的Y-STR單倍型，因此可利用父系親屬的參考樣本進行犯罪嫌疑人的排除推測；

2)只具有排除同一性意義，不能認定同一性。

5、精液斑檢驗的一般程序——

1)肉眼觀察：UV（銀白色）；白、痂、鱗、硬、腥；

2)預實驗：酸性磷酸酶試驗AP（紅色醌類化合物）//預實驗陰性的檢材仍要進行確證試驗；

3)確證實驗：精子檢出法（染色）

4)種屬鑒定：抗人精液血清沉澱反應

個體識別：ABO血型（中和試驗、酶標抗體免疫測定法、DNA分型）、DNA分析

1、如何進行唾液斑的個體識別（just like 精液）

1)ABO血型測定：中和試驗（分泌型）、酶標抗體免疫測定法（非分泌型）、ABO基因分型//腦脊液無ABH抗原

2)DNA分析：口腔黏膜脫落上皮細胞（nDNA and mtDNA）→PCR-STR

1、差異提取法及其優缺點

2、輪姦案混合斑檢驗

1)注意提取多處檢材或一份檢材不同部位的斑痕→分別進行DNA提取和擴增分型→有single？

2)幾個犯罪嫌疑人精液的含量差別很大時，造成精液成分特異性片段的密度或峰高值的個體差異→有時能夠為確定精液的個體發揮作用

3)Y-STR分型→確定人數、排除嫌疑人等

3、試述進行精液與陰道液混合斑個體識別的幾種思路

目的：檢測出精液成分遺傳標記（確定犯罪嫌疑人）+認定受害者

1)Y/N 混合斑（確證試驗）：

精斑確證——精子檢出

陰道液斑確證——細胞學檢查（HE染色、嗜碘試驗）、陰道肽酶測定Vp（不受月經血和精液影響）

2)個人識別：（從混合斑測出的遺傳標記型別是精液與陰道液遺傳標記的總和）

a)對比推斷法：

ABO血型測定：中和試驗forABH物質分泌狀態

DNA分型：混合分型圖譜，locus（sgl） alle≥3，直接與受害人對比

b)分離精液和陰道液組分進行檢測：差異提取法、激光捕獲顯微切割技術

c)檢測精液特有成分：Y染色體DNA分析、陰道分泌液的血清型或酶型

4、試述如何對混合斑STR分型結果進行分析和解釋

（分型結果為多個個體的STR圖譜累加）

1)確定是否為混合斑——多個>2個峰的圖譜//nor H1 > 60% H2，stutter < 15%mainH

2)確定等位基因峰——according to ladder

3)確定構成混合物的組分數——n個等位基因數提示至少有n/2（Z）個組分

4)統計分析：似然率法

5)結巴帶

6)等位基因丟失

7)LCN影響

8)Amelogenin基因的X和Y峰面積——判斷是否為混合斑＆混合斑中男女成分比例

Y-STR基因座等位基因數——推斷混合斑的最少組分數目

1、提取和送檢組織材料時應注意的問題有哪些？（P357）

1)儘快送檢

2)組織檢材不能及時送檢時應低溫保存，或乾燥處理，所有組織樣本不宜用甲醛固定

3)不同組織中含蛋白酶量不同，自溶和腐敗的速率有明顯差異→肝脾usu不作為首選取材，muscle和cerebral tissue等提取DNA較理想

1、怎麼評估遺傳標記個人識別的系統效能（i dont know . just note 2 points we should be aware of ,i think）

遺傳標記的多態性程度越高，DP越高

提高DP可以通過增加檢測的遺傳標記數目來實現

2、怎麼評估遺產標記對於具體個案的鑒別能力

1)匹配概率

2)似然率

3、試述匹配概率的意義

概念：一個隨機個體碰巧與作為證據的檢材表型匹配的可能性

用途：遺傳標記的個案應用

數值意義：Pr↓，→0，說明隨機個體碰巧匹配的可能性小，作為證據的檢材與嫌疑人的表型匹配非常不像是一個隨機事件，因此支持這兩個樣本來自同一個人的假設，也就是支持現場檢材是嫌疑人留下的假設。