基因工程概論
基因工程概論
《基因工程概論》是1999年12月華東理工大學出版社出版的圖書，作者是張惠展。本書從基因的表達調控機制入手，將DNA重組技術歸納為切、接、轉、增、檢五大基本操作單元，進而按照受體細胞的生物學分類，逐一展開各系統基因工程的原理與應用。重點論述基因工程技術應用的策略與思路并力求以圖解的方式取代繁瑣的文字敘述，是本書努力和體現的兩大特色。
世界的豐富多彩是因為生命的存在，而生命誕生、發育、生長、病變、衰老乃至死亡的整個過程均由基因控制。DNA或RNA鏈上鹼基的線性排列順序編碼著生命運動的時空四維信息，甚至連高等哺乳動物和人類的思維與智商亦與基因有關。因此，目前人類正在努力實施規模宏偉的基因組研究計劃，期望由此認識生命，改造生命，優化生命。
1 概述
1.1 基因工程的基本概念
1.2 基因工程的發展歷史
1.3 基因工程研究的意義
2 基因的表達調控原理
2.1 啟動子調控模型
2.2 操縱子調控模型
2.3 感受應答調控模型
2.4 RNA結構調控模型
2.5 RNA剪切編輯調控模型
3 DNA重組克隆的單元操作
3.1 DNA重組的載體
3.2 DNA的體外重組(切與接)
3.3 重組DNA分子的轉化與擴增(轉與增)
3.4 轉化子的篩選與重組子的鑒定(檢)
3.5 目的基因的克隆
4 大腸桿菌基因工程的原理與應用
基因工程概論
書號：9787302164944
作者：賀淹才
定價：45元
出版日期：2008-4-1
出版社：清華大學出版社
本書共分16 章，系統地闡述了基因工程的原理與技術。全書條理清晰，文筆流暢，圖文並茂，內容實用，適合作為高等院校生命科學相關專業本科生教材，也可供相關專業研究人員參考。
第一章 緒論/1
第一節 基因與基因工程的概念/1
一、基因/1
二、人類基因組計劃/5
三、基因工程的概念/6
第二節 基因工程發展史/7
第三節 基因工程的巨大意義/8
第四節 生物技術與基因工程/10
第五節 中國基因工程的現狀與前景/10
第六節 基因工程的安全性問題/13
第七節 我國的《基因工程安全管理辦法》/15
第八節 基因工程的基本過程/16
第九節 基因工程上游和下游/16
第十節 基因工程的上游工程——基因克隆/17
第十一節 基因工程的流程/17
複習思考題/18
第二章 各種工具酶/19
第一節 基因工程工具酶的概念/19
第二節 限制性內切核酸酶/20
一、寄主細胞控制的限制與修飾/20
二、限制性核酸內切酶的種類/21
三、影響限制性內切酶活性的因素/24
四、限制性內切酶命名法/24
五、限制性內切酶的作用特點與應用/25
第三節DNA聚合酶/27
一、大腸桿菌DNA 聚合酶I /28
二、DNA聚合酶Ⅰ大片段/30
三、大腸桿菌DNA 聚合酶Ⅱ/31
四、大腸桿菌DNA 聚合酶Ⅲ /31
五、T4-DNA 聚合酶/32
六、T7噬菌體DNA 聚合酶及測序酶/33
七、耐熱DNA 聚合酶（TaqDNA 聚合酶） /33
八、末端轉移酶/35
九、反轉錄酶/35
第四節DNA連接酶/37
一、DNA 連接酶的一般性質/37
二、DNA 連接酶的作用機制/38
三、真核生物的DNA 連接酶/40
第五節S1核酸酶/40
第六節Bal31核酸酶/41
第七節 鹼性磷酸酶/41
第八節T4多聚核苷酸激酶/42
複習思考題/42
第三章 基因載體的選擇與構建/43
第一節 基因載體、報告基因與載體的致死效應/43
一、基因載體的概念/43
二、載體的報告基因（標記基因） /44
三、載體的致死效應/44
一、質粒的概念/45
二、質粒的複製和遺傳/46
三、質粒的種類/46
四、質粒的相容性/47
五、質粒的報告基因/48
六、質粒的改造/49
七、質粒載體的多克隆位點/50
八、質粒DNA 的提取/50
九、常用的質粒載體/52
十、質粒的用途與發展的質粒克隆載體/56
第三節 噬菌體載體/60
一、噬菌體和噬菌體載體/60
二、λ噬菌體的生物學/60
三、野生型λ 噬菌體的改造/64
四、λ噬菌體的包裝與克隆/65
五、單鏈噬菌體載體和噬菌粒/68
六、黏性質粒載體/70
第四節 酵母細胞克隆載體與酵母人工染色體/72
一、酵母附加體型質粒（YEps） /73
二、酵母整合型質粒（YIps） /74
三、酵母複製型質粒（YRps）與酵母著絲粒質粒（Ycps） /75
四、酵母人工染色體（YAC） /75
五、細菌人工染色體（BAC）和噬菌體人工染色體（PAC） /77
六、穿梭質粒/79
第五節 動物病毒載體/81
一、動物病毒載體的特點/81
二、桿狀病毒載體/81
三、SV40載體/84
四、痘苗病毒載體/86
五、反轉錄病毒載體/86
六、其他動物病毒載體/88
第六節 植物病毒載體/88
複習思考題/89
第四章 目的基因的製取/91
第一節 目的基因製取的策略/91
一、外源基因與目的基因/91
二、目的基因製取的策略/91
第二節 鳥槍法製取目的基因/92
一、“鳥槍法”的概念/92
二、“鳥槍法”製取目的基因的特點/93
三、“鳥槍法”的主要步驟/94
四、枯草桿菌鳥槍法基因克隆/94
第三節 物理化學法分離目的基因/95
第四節 化學合成基因/95
一、聚核苷酸化學合成的歷史/96
二、磷酸二酯法合成DNA /97
三、固相亞磷醯胺法/98
第五節 反轉錄合成DNA /102
複習思考題/104
第五章 基因與載體的連接/105
第一節 基因重組克隆與亞克隆/105
第二節 基因重組對載體的要求與載體類型/106
一、克隆載體/106
二、表達載體/106
第三節 連接前的處理/107
第四節 黏性末端連接/108
一、單酶切位點的黏端連接/108
三、不同限制酶切位點的黏端連接/112
第五節 平端連接/114
第六節 人工接頭連接/116
第七節 同聚寡核苷酸末端連接/118
複習思考題/120
第六章 重組DNA 導入受體細胞/121
第一節 克隆與導入方法/121
第二節 轉化/122
一、大腸桿菌宿主菌/122
二、受體細菌的感受態/123
三、轉化反應/123
四、枯草芽孢桿菌的轉化反應/124
第三節 轉染/125
一、磷酸鈣沉澱法/125
二、體外包裝轉染法/126
第四節 共轉化/126
第五節 電轉化/127
第六節 基因槍法（微彈技術） /129
第七節 微注射技術/130
第八節 脂質體導入法/131
第九節 轉化酵母菌/132
第十節 植物細胞的基因轉移方法/133
第十一節 哺乳動物細胞基因導入法/133
第十二節 反轉錄病毒載體的轉染/135
複習思考題/136
第七章 聚合酶鏈式反應/137
第一節PCR技術基本原理/137
第二節PCR反應體系與引物設計/141
一、PCR反應體系/141
二、設計PCR 引物時的一般原則/143
第三節PCR一般循環參數/144
第四節 影響PCR反應結果的因素/145
第五節PCR技術用於基因克隆/146
一、目的基因的直接克隆/146
二、目的基因的cDNA 的克隆/146
三、PCR技術用於基因克隆的其他方式/147
第六節 發展中的各種PCR應用技術/147
一、反轉錄PCR /147
二、反向PCR /149
三、複合PCR /150
四、定量PCR /153
五、不對稱PCR /153
六、嵌套PCR /154
七、免疫PCR /154
八、長PCR /155
九、熱啟動PCR /155
十、標記PCR（彩色PCR） /155
十一、重組PCR /156
十二、差向顯示PCR /156
十三、降落PCR /156
十四、兼并引物PCR /157
十五、原位PCR /157
十六、玻片PCR /158
十七、連接酶鏈反應（LCR） /158
十八、MSP甲基化特異PCR /160
第七節 各種PCR突變檢測技術/160
第八節 關於PCR技術應用的小結/162
複習思考題/162
第八章 基因文庫的構建/163
第一節 基因文庫的概念與文庫的類別/163
一、基因文庫的概念/163
二、基因文庫的類別/163
三、基因文庫的大小/165
第二節 基因文庫的構建/167
一、基因組文庫的構建/167
二、cDNA文庫的構建/171
第三節 利用PCR技術構建cDNA文庫/176
第四節 全長cDNA文庫的構建/178
一、cDNA文庫的質量與全長cDNA /178
二、RACE構建cDNA 文庫/179
三、用oligo-capping 法構建全長cDNA 文庫/181
四、SMART技術/183
第五節 差示文庫與消減文庫/186
一、mRNA差別顯示/186
二、差別雜交法與差示文庫/188
三、消減雜交法與消減文庫/190
四、代表性差異顯示（RDA） /192
五、抑制消減雜交/194
第六節 染色體或區域特異性cDNA文庫/197
第七節 人工染色體文庫/198
二、細菌人工染色體（BAC）文庫/200
複習思考題/202
第九章 重組體的鑒定與文庫篩選/203
第一節 重組體轉化子的鑒定與文庫篩選/203
第二節 遺傳檢測篩選法/204
二、根據插入序列表型特徵的直接選擇法/205
第三節 物理檢測法/205
一、凝膠電泳檢測法/205
二、限制酶切分析法/208
三、異源雙鏈雜交檢測法與R-環檢測法/208
第四節 核酸雜交法/209
一、以寡核苷酸探針篩選目的基因/209
三、Southern印跡雜交/213
四、Northern印跡雜交/214
第五節 免疫化學檢測法/214
一、各種標記的免疫化學檢測法/215
二、以單克隆抗體探針篩選目的基因/216
三、表達載體產物免疫化學檢測法/217
第六節 檢測蛋白質篩選克隆基因/217
第七節 體外表達篩選技術（表達檢測系統） /220
第八節cDNA文庫篩選的方法/223
第九節cDNA文庫的標準化/225
第十節BAC文庫鑒定和篩選/229
複習思考題/230
第十章 目的基因的表達/231
第一節 原核生物基因表達調控的生物學/231
一、原核細胞表達的特點/231
三、原核生物基因的轉錄后調控/233
第二節 真核生物基因表達的調控/234
一、DNA染色質結構的調控與順反子的概念/234
二、轉錄調控/234
三、RNA對基因表達的調控/235
四、翻譯過程的調控/235
第三節 基因工程中的基因表達/235
一、制約目的基因表達的因素/235
二、閱讀框架/236
三、啟動子及其保守序列的影響/236
四、終止子和衰減子的影響/237
五、翻譯過程對表達的影響/238
第五節 以大腸桿菌為代表的原核表達體系/240
一、大腸桿菌表達系統的特點/240
二、大腸桿菌表達融合蛋白/240
三、大腸桿菌細胞包涵體/241
四、提高克隆基因在大腸桿菌中表達效率的途徑/242
第六節 表達型載體/243
第七節 真核表達體系的特點與外源基因在真核細胞表達/248
第八節 酵母表達體系/248
一、釀酒酵母中外源基因的表達/249
二、甲醇酵母中外源基因的表達/249
三、出芽酵母中外源基因的表達/249
四、常用的酵母轉化方法/250
五、酵母表達外源基因的缺陷和改進方法/250
第九節 昆蟲或昆蟲細胞表達體系/251
第十節 哺乳動物細胞表達體系/254
第十一節 新型的胞漿表達體系/254
複習思考題/255
第十一章 轉座子在基因工程中的應用/256
二、質粒的轉座子/259
三、轉座作用的機制/259
四、轉座的遺傳學效應/260
五、控制轉座與監測轉座子/261
六、轉座子基因標籤法/261
七、標籤的策略/264
八、標籤基因的分離和克隆/265
九、轉座子技術的發展與應用前景/268
複習思考題/269
第十二章 核苷酸序列測定/270
一、Sanger酶法（雙脫氧鏈終止法） /270
二、Maxam-Gilbert DNA 化學降解法/273
三、定向測序法/276
四、鳥槍法測序/278
五、人工轉座子法/282
六、雜交測序技術/282
七、PCR測序/285
八、自動化測序法/286
九、幾種正在發展的測序方法/287
十、DNA序列測定的策略與發展方向/291
複習思考題/292
第十三章 基因克隆的策略和技術/293
第一節 基因克隆方法的種類/293
第二節 經典文庫克隆與特異抗體克隆技術/294
第三節 定位克隆策略/295
一、定位克隆的基本原理/295
二、定位克隆的三個主要步驟/297
三、定位克隆的主要操作過程/299
四、定位克隆的主要策略/303
五、大片段DNA 克隆文庫的載體/305
六、功能互作研究與定位克隆的應用與發展/305
第四節 表型克隆的策略/308
一、基因組錯配篩選（GMS） /308
二、隨機引物PCR /310
三、外顯子擴增技術(exon-PCR) /311
四、表型克隆與定位克隆策略的比較/311
第五節cDNA克隆策略/312
第六節 生物信息基因克隆技術/313
複習思考題/317
第一節 基因打靶技術/318
一、基因打靶的主要實驗系統/318
二、基因打靶的主要步驟/319
三、篩選基因打靶命中的細胞株/320
四、基因打靶技術的策略與技術/321
五、大規模隨機基因剔除——基因捕獲/324
六、基因敲入法研製轉基因小鼠/325
七、基因打靶技術的特點/326
八、基因打靶技術的應用/326
第二節 反義技術/327
二、反義技術的原理/329
三、人工設計反義RNA 的策略/329
四、反義技術的特點/331
五、ASON的改造與反義藥物/331
第三節 核酶技術/331
一、核酶的特性與作用/331
二、核酶的設計/332
三、核酶的克隆和應用/333
第四節 反義技術與核酶技術的應用/333
複習思考題/336
第十五章 蛋白質工程/337
第一節 蛋白質工程與基因工程/337
第二節 蛋白質結構分析、功能的設計與改造/338
一、蛋白質結構分析/338
二、蛋白質結構、功能的設計/338
三、蛋白質結構改造/338
第三節 蛋白質工程的一般流程/341
第四節 功能克隆策略——噬菌體展示技術/341
一、絲狀噬菌體展示系統/342
二、T4噬菌體展示系統/343
三、λ噬菌體展示系統/344
四、噬菌體展示基本操作過程/347
五、抗體表面展示/351
第五節 細菌表面展示生物技術/352
一、革蘭陰性菌表面展示/353
二、革蘭陽性菌表面展示/353
第六節 酵母表面展示系統/354
第七節 其他體外展示技術/354
第八節 蛋白質工程的新策略——分子定向進化/355
一、易錯PCR /355
二、DNA改組技術/355
三、交錯延伸技術/357
四、體外隨機引發重組/358
五、雜合酶技術/359
六、蛋白質分子定向進化技術的發展/359
第九節 蛋白質工程的應用與發展前景/360
複習思考題/361
第十六章 基因工程下游工程的分化/363
第一節 下游常用的分離、純化、分析鑒定技術/363
一、DNA合成粗產物的提純/363
二、蛋白質產品常用的分離提取技術/364
第二節 原核細胞表達系統與發酵工程/366
第三節 植物基因工程/366
第四節 昆蟲或動物細胞表達系統/368
第五節 動物基因工程/368
第六節 基因工程與產業化/369
第七節 基因工程藥物與疫苗/371
第八節 基因治療/372
複習思考題/373
索引/374
參考文獻/386
