組織固定

在組織病理學中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標本的保存，都必須進行及時的適當的和有效的固定。組織只有經過固定，才能完成隨後的一系列的製作，直至切片的最後完成。每個醫務工作人員都能容易地把組織固定起來，但是，要清楚了解固定的過程及其定義是一件十分不易的事。

組織經一系列的處理后，就必須進行固定，當然有的組織是先固定，再進行處理，然後再固定。固定的作用，從組織學的角度其簡單的定義是，保持細胞、組織的固有形態和結構，使之盡量保持細胞、組織的固有形態和結構，而從免疫組化技術的角度，固定的作用不僅是使細胞內蛋白質凝固，盡量減少或終止外源性酶和內源性酶的反應；防止細胞的自溶，以免使抗原擴散至組織間質；以保持組織的固有形態和結構；更重要的是保持組織或細胞的抗原性，不但要使抗原不導致失活，而且不使抗原發生彌散的現象，才能在免疫組化染色時，不產生過深的背景，影響對陽性物的判斷。

1、能防止細菌的腐蝕和組織的自溶。細菌無處不存在，它們隨時都可污染腐蝕未經處理的組織。固定液可以固定任何蛋白質，凡有生命的東西，都由蛋白質組成，蛋白質被固定，生命就停止，細菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人們常可碰到這樣的問題，一塊肉不經處理放了幾天後就會變質，這是為什麼呢？除了細菌參與外，其本身也是很重要的。因為組織離體后，供應這此組織的血液隨之消失，細胞缺氧，細胞內溶酶體膜的結構受到破壞，破壞后釋放出溶酶體酶，日常生活中常碰到的肉變質，就是細菌污染加組織自溶的結果。

2、保存細胞固有的物質，能凝固或沉澱細胞內或組織液，糖原等，使細胞或組織基本上保持與生活時的物質一樣。細胞的固有物質，即細胞核、內質網、線粒體、高爾基器、溶酶體、過氧體，細胞骨架，組織液，抗原、糖元等。這些物質，如果不將其及時固定，是很容易喪失的，尤其是溶酶體，很容易受到破壞，因此應特別小心。

3、使組織硬化，便於切塊。剛離體的組織，除了胃組織以外，都是柔軟的組織，尤其是胃腸道的組織，如果在沒有固定時就取材，效果就很差，不是取材不規整，就是厚薄不均，粘膜和肌層很容易分開，因此，要取得規整標緻的材料，就必須將組織徹底固定，再行取材。

4、對某些具有傳染性的標本，能防止疾病的擴散。病理標本、種類繁多，成份複雜，各種病例都有，具有傳染性的病種也不少，如結核、肝炎、麻風、性病等等。對於此類標本，應進行徹底的固定后，再行取材，如結核球，固定時間應在3-5天。

5、保存好大體標本。對於有教學任務的醫院病理科，除搞好疾病的診斷外，還有收集有價值的大體標本，有些大體標本，是很難得到的。因此要求在平時就要留心觀察，小心處理。遇到有教學價值的罕見的典型的標本，就必須及時固定，認真給予對待。

6、可增強染色的作用。組織經過及時的固定，最終可見到切片有鮮艷的染色，而如果有一批未經及時固定的組織，將看到最終的結果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得結論，固定可以增強染色的作用。

1、組織固定越新鮮越好。組織一經離體，就能及時地固定，這是最好的。根據實驗，如果要獲得某些酶的染色，固定最好在組織離體后30秒至1分鐘。對於其它達不到些要求是越快越好。

2、組織固定，組織塊不宜過大。凡是需要固定的組織，都不應該太大太厚，這是因為所有的固定液穿透力不夠強，浸透度不夠快的緣故。如果較大厚的組織，不經處理就進行固定，那麼待固定液進入至中間對可能這些組織早就發生自溶了。因此，對於較大的組織，必須先進行處理，切成製片材料再行固定，這是最佳的處理方法，如遇到胃腸的器官，則應將其剪開，放平后，再行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因這類組織、粘膜和肌層容易分開，沒固定時，難以取得最佳製片材料，對於產酶類的器官如肝、腎、脾等，更要處理好，否則更容易出現自溶現象。

3、對不同類型的組織應適當合理地選擇固定液。有的固定液對於組織有膨脹作用。固定劑是一種化學試劑，有液體和固體之分，一般使用較多的是液體，而固體固定劑如多聚甲醛，則多用於實驗研究的組織固定。固定劑的種類繁多，成份複雜，對組織的作用不盡相同，英國著名的組織化學專家Pearse指出：對於每個既定的組織化學方法來說，選擇最合適的方法是極為重要：在組織化學研究準備階段不論採用什麼固定劑，都必須儘可能確切地知道它們對於各種組織成分的反應基團的效用。Jones（1973），指出理想的固定劑必須具備的條件是，防止滲透損傷和收縮，以達到在各級可見度的水平皆無形態變化；要求組織所有的成分能保留於原位。他認為有三種試劑即甲醛、戊二醛和丙稀醛接近於達到上述要求。為了更好地把組織中各種成分盡量保存好，盡量好給予顯示出來，就決不能千篇一律地使用一種固定液，而必須認真地深入研究各種固定液的性能和使用方法。例如：丙酮，它對組織有明顯的皺縮，硬化作用，平常它是決不會被用來作固定液的，用它不但太浪費，造價太高，而且也使切片較為困難，但是，對於某些酶的研究，狂犬病腦組織的固定，某些細胞的培養等。最好的固定液還是丙酮。因為如果使用福爾馬林固定液、石蠟切片顯示酸鹼磷酸酶就顯示不好，狂犬病病毒的包函體就會消失掉，又如醋酸，它對膠原纖維等有膨脹的作用。由於各種固定液對不同的組織有不同的作用，因此許多專家將根據各種固定液的優缺點，配製出許多混合液的方法來，給組織的良好固定起到了非常積極的作用。但是，值得指出的是並非所有的固定液都不是十全十美的，例如，酒精、甲醛、醋酸固定液，對組織固定很好，組織中各物質的染色也十分清晰，但對固定脫水盒為銅質的組織時，效果就不好，原因是醋酸跟酮可發生反應，產生醋酸銅，沉澱於組織中，可造成對抗原的損害，對於免疫組織化學的顯示，經實驗證明：可呈弱陽性乃至陰性。由此可見，固定液的選擇正確與否決定著對某些病例的免疫組化標記的成敗關鍵。在我們的日常工作科研中，對於組織的固定，應有針對性的選擇，方能獲得滿意的效果。

4、組織固定，時間不宜太短，也不宜太長。時間太短，就不能很多的固定組織，因為不管組織大小，固定液浸入組織之中，都需要有一定的時間，時間太短，就會影響組織固定的效果，對以後一系列關係的處理都有影響，切片質量難以保證，固定時間太長，也不好。組織長時間的固定，福爾馬林會產生一種酸，影響核的染色。對於固定很長時間的陳列性標本製片后切片染色不鮮艷，顯得非常陳舊。另外，長時間的固定往往會出現福爾馬林色素，尤其是造血器官的標本，更應注意。固定時間過長，可降低抗原的活性。

5、固定液的量要充分。固定液量的足夠與否決定著組織固定的成敗，有的人認為，固定液的量與組織的比應是20：1，這個要求對於小組織來說是完全可以達到的，但對於大標本來說，則是一件非常困難的事情。因為對於大醫院來說，每天都有幾十上百例的標本，小如大頭針大小，大的達幾十斤的腫瘤，對於這樣大的標本，按20：1的比例來做，顯然是不可能的事，既要做到組織能固定好，又不使組織吹乾就必須具體情況具體處理。對於大的標本，原則上是不讓其暴露部分被吹乾，這是因為在現實當中，大的標本往往露出容器一大半，因此對於這種情況，應取些脫脂棉或紗布，浸濕固定液后，蓋於組織表面，以免使組織被風乾，影響製片效果。

6、特殊病例或特殊物質應選擇特殊的固定液。一般的病例標本，如沒特殊的要求，都可以應用甲醛配成的各種固定液來固定。但是，如果要顯示狂犬病毒的包含體時，應用上述的的固定液就不行了，必須採用丙酮來固定，顯示糖元，可選擇無水酒精或丙酮來固定組織。固定劑是一種化學語試劑，有液體和固體及之分，平常使用的多為液體，Pearse指出，對每個既定的組織化學方法來說，選用最合適的固定方法是極為重要的；在組織化學研究中的準備階段，不論採用什麼固定劑，都必須儘可能確切地知道它們對於各種組織成分反應基團的效用。

7、組織的第二次固定或后固定。在一般的常規病理活檢組織中，往往用一種固定液，就能夠達到目的，獲得滿意的結果。但是，對於某些特殊病例光用一種固定液是不夠的，必須根據不同的情況，使用特殊的固定液再次將組織固定，或者在切片后染色前再行固定。這種方法稱為二次固定或后固定。例如：胚胎性橫紋肌肉瘤，由於腫瘤細胞發育較幼稚，完全不象成熟的橫紋肌組織所固有的橫紋，在進行特殊染色前，就必須用Zenker氏固定液進行第二次固定，方能較好地顯示出橫紋肌纖維來。否則，效果不佳。另外，電鏡固定的標本，通常都需要后固定。其使用方法是先用戊二醛固定，再用奧酸固定。

1、病理標本從採集到固定應在30分鐘內完成（越早固定越好，記錄精確到分鐘），並記錄標本離體時間（精確到分鐘）。

2、送檢的病理標本需用標準病理標本袋盛放。

3、組織標本常規固定液為10%中性福爾馬林溶液（即甲醛原液與水按1：9的比例配置），手術室及手術科室標本應使用同樣濃度的固定液。

4、固定液量應為被固定標本體積的5～10倍。

5、一般標本的固定時間為12～24小時，特殊組織須延長固定時間。

6、快速冰凍標本立即送檢，不要加任何固定液。

當前，應用於固定試劑的種類較多，它們對於固定不同的組織成分起著不同的作用，因此我們在使用時應該了解不同固定劑的效能，才能合理的固定組織。根據Bencroft的分類法，將不同的固定劑分為四種類型：

Ⅰ類：醛類，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。

Ⅱ類：氧化劑類，四氧化鋨（奧酸），高錳酸鉀，重鉻酸鉀等。

Ⅲ類：蛋白變性類，甲醇，乙醇，醋酸等。

Ⅳ類：其他，氯化汞，苦味酸等。

上述四種類型的固定劑，最常使用的是甲醛，其餘的也在其它病理技術方面中用到。下面根據使用的需要，將著重介紹幾種常用的固定劑。

（1）甲醛

甲醛商品名為福爾馬林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛氣體飽和於水而成，比重為1.12。它也可以穩定的固體形式存在，它的成分為高分子量的聚合體，稱為多聚甲醛。

甲醛溶液較難純化，在每批市售商品中，都含有不少的雜質如甲醇，這種在組織化學方法當中，能使酶鈍化，影響其反應。甲酸，它可使固定液變酸，在陳列標本或長時間固定的組織，由於酸的作用，往往細胞核染色欠佳。

甲醛有效固定作用的要點是，在蛋白質末端基團之間形成交聯鏈。參與甲醛固定蛋白質的基團，主要為氨基，亞氨基及醯氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環。甲醛與組織蛋白類的反應是多樣和複雜的，因為它能和多種不同的功能基團結合，在多數情況下在其間形成橋鍵。甲醛有這種交聯的功能，也是它的缺點，在用甲醛固定過的組織中，需要做免疫組化的，往往提倡用酶消化或熱抗原修復法來使蛋白與甲醛交聯的醛鍵斷裂開，以利於後來的染色。

甲醛可配成簡單的或混合的固定液，最簡單和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，這就是10%的福爾馬林。當然，現在使用的固定液要求較為嚴格些，最好是使用緩衝福爾馬林固定液，這將有利於後來的免疫組化染色的需要。

從組織學的觀點來說，甲醛是一種良好的固定劑，它有很多的優點:

1.組織收縮較少，損傷少，保存固有物質好.

2.固定均勻，穿透力強.

3.能使組織硬化，增進組織彈性，有利於切片.

4.能保存脂肪及脂類物質.

5.成本較低.

雖然甲醛有上述的優點，但這都是相對而言，任何物質都不可能十全十美的，它也有許多缺點:

1.雜質含量較多，如甲醇，可鈍化酶類，影響反應.

2.含有微量甲酸，導致固定液酸變，影響染色.

3.可產生福爾馬林色素，影響觀察.

4.不能固定尿酸和糖類物質.

5.容易揮發，污染環境，可導致標本乾涸.

6.可長期存在於固定過的組織上。有人做過實驗，組織用甲醛固定后在流水中沖洗5小時后，仍留有相當多的甲醛與蛋白質相結合，但需要經過長時間的流水沖洗(24天的沖洗)方能除去。可見存在於組織上的甲醛是不可能除去的。因為臨床活檢不可能有這麼長的時間來沖洗組織。因此要特別指出的是，在其後的各種技術操作中，要特別注意到甲醛的存在，必須要想辦法除去它，否則將會給各種染色造成影響，甚至導致失敗。

應用甲醛，可以配成許多種固定液:

1.10%緩衝福爾馬林固定液

甲醛100ml

蒸餾水900ml

NaH2PO44g

Na2HPO46.5g

該固定液是當今流行的固定液，因它對組織固定較好，損傷較少，因對其後的各方面的研究都較好，尤其是對免疫組化的染色.

2、10%福爾馬林固定液

甲醛100ml

自來水900ml

這是一種最簡單的固定液，適合於邊遠地區攜帶的固定液，但由於它的單一性，因此，只要有條件的單位都不要求使用這種固定液。

3、10%福爾馬林鹽固定液

甲醛100ml

自來水900ml

Nacl9克

先將Nacl溶於水，再加入甲醛。這也是一種較為簡單的固定液，但由於加入Nacl，它是一種重金屬鹽物質，加入了它可促進和改善染色，增加染色的強度。

4、Bouin氏固定液

苦味酸飽和水溶液75ml

甲醛2ml

冰醋酸5ml

該固定液中的冰醋酸，對膠原纖維等組織有膨脹作用。而甲醛對組織有收縮作用。兩種試劑的混合使用，用以抵消彼此間的副作用。使組織固定達到優良的固定水平。

5．醛糖鈣固定液

甲醛100ml

蔗糖300ml

乙酸鈣20g

蒸鎦水90ml

先將蔗糖和乙酸鈣溶於蒸鎦水，后加入甲醛。該固定液對於做酶的組織化學的研究效果較好，組織固定后，做冰凍切片，再給予顯示。

當前國內外基本上都還是要用甲醛來固定組織。從免疫組織化學的角度來說，甲醛固定的組織大部分都可以用免疫組化的手段來檢測，據多人認為，它對IgA，IgM，J鏈，K鏈和λ鏈的標記效果較好，且背景清晰。但美中不足的是：經它固定的組織，可與蛋白形成醛交聯蛋白，這種醛鍵可封閉抗原。固此，在免疫組化實際檢測中，應根據不同的要求和需要，採用酶消化或者其它抗原修復如微波、高壓等的方法，以便破壞醛鍵重新暴露抗原。

（2）酒精：又稱乙醇，為無色透明的液體，沸點是78度，工業酒精是95%。

酒精它有許多優點：

1、可保存尿酸結晶和糖原等物質。高濃度的酒精如95%，無水酒精可保存上述兩種物質，因它們易溶於水，因此，要證明上述兩種物質的存在，就不能用含水的固定液來固定組織。

2、能在任何比例的情況下與水混合，在病理技術中，酒精是一種十分重要的試劑，它起著關鍵的作用。如果沒有酒精，將會無法完成必要的工作。如組織的脫水，切片染色前後都離不開酒精，在常規的工作中，通常都用95%的工業酒精來配成60%、70%、80%、90%等不同的濃度來使用。

3、可溶解苯類物質為染色步驟中的橋樑試劑。常規活檢等切片上的石蠟必須除去，才能進行染色，能除去石蠟的物質有苯及汽油等，常用的有苯類試劑，苯不溶於水，但能溶於酒精，酒精在這裡充擔著除去苯和連接水的作用，為切片入水架起了橋樑，因此稱它為橋樑試劑。

4、能除去切片上的水份，使切片無水化。切片經染色后，由於所用的試劑都為水溶液，因此在切片上含有大量的水份，這些水份經系列梯度酒精的置換吸附后，到無水酒精中已完全無水，這樣處理對於切片的保存是有好處的，否則，切片將會褪色。

5、可用來保存標本。大體標本經福爾馬林固定后，如為了陳列保存，必須取出沖冼。然後移入75%的酒精中。如果用福爾馬林作陳列標本的固定液，則因為福爾馬林含有雜質較多，液體容易酸化，時間一長，會逐漸變為微黃*色或淡黃*色，影響美觀，影響陳列的效果。

6、可與其它試劑配成多種的混合固定液，有時為了加快固定，常採用酒精和其它試劑來配成混合固定液，這種固定液在固定的同時，兼有對組織脫水的作用。應用酒精配成的混合固定液有：

①Carnoy氏固定液

氯仿300ml

冰醋酸100ml

95%酒精600ml

該固定液固定組織快速，在固定的同時兼有脫水的作用。溶液中的氯仿和酒精，對組織的收縮較厲害，但應用了冰醋酸，這種現象便被中和去。

②AF固定液

甲醛100ml

冰醋酸50ml

95%酒精850ml

這種固定液的作用與上液有相似之處，但要注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脫水用具不能使用銅製的脫水盒，因冰醋酸跟銅離子起反應，生成醋酸銅，這種物質可沉澱於組織間，可破壞組織中的抗原，造成免疫組化檢測的失敗。應用時應多加註意。

酒精也有許多不足之處，它的缺點是：

1、可溶解脂類物質，凡要證明組織是否含有脂類和類脂物時，切不能用含有酒精的固定液去固定組織，也不能用石蠟切片，因為酒精可將它們溶解去，而石蠟切片組織中含有的脂類物質，則在組織脫水時被溶解去，只留下脂類或類脂物所佔有的空間。

2、對組織收縮較大，不宜作單純固定液。高濃度的酒精，對組織有顯著的收縮作用，造成組織發硬易脆，難以切片等現象。因此，它不作為單純的固定液。

3、滲透力不強。當用酒精固定組織時，組織表面很快就被固定，並形成了一層蛋白膜，這層膜可阻擋固定液向里滲透，造成了中間組織固定不佳的現象。

4、可沉澱白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡經酒精固定的組織，核的染色都不好。

5、可脫去切片上已著染的各種顏色，切片經染色后，一是必須洗去多餘的染液，二是必須脫去切片上的水。在用酒精洗切片時，必須仔細地掌握顯微鏡下觀察，還要掌握酒精的濃度，低濃底的酒精脫色力強，稍不注意，便可脫去切片上大部分的顏色。切片脫水時，要較快地通過低濃度的酒精，以免使已著染的顏色被脫去。

6、價格較貴。從經濟學的角度，應用酒精固定組織划不來，例如：一瓶500ml的甲醛，可配成500ml的固定液，按每例標本需要100ml計，可固定50例標本，而一瓶500ml的酒精，即使配成80%酒精，也只能固定6例標本，因此，若用酒精固定組織，其價格比用甲醛固定組織的要高8倍。

（3）冰醋酸。冰醋酸為無色透明的液體，易揮發，氣味大，一打開瓶蓋，整個文章都可聞其味道，純醋酸在17℃時常為結晶狀，因稱為冰醋酸，在冬天使用時，可用微波爐進行解凍，再行使用，它的優點有：

1、能迅速固定染色質，助於染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均勻，對於染色質的固定快，因此，用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明礬蘇木素和伊紅時，常常需加入一定量的醋酸，以促進染色。

2、能使組織尤其是富含纖維的組織膨脹。

各種固定液對組織都有收縮的作用，尤其是對富含纖維的組織。而它不但不會使組織收縮，而且還會令許多組織發生膨脹的作用。根據這個特點，用它配成許多種不同的混合固定液，以達到固定好，收縮少，易切片，效果好等目的。用它配成的混合固定液有：

（1）Zenker氏固定液：

重鉻酸鉀25G

升汞50G

蒸餾水1000ml

冰醋酸50ml

先將重鉻酸鉀和升汞溶於水中，尢其是重鉻酸鉀，應用熱水或加溫的方法將其溶解，然後過濾貯存於帶蓋的玻璃瓶中，如暴露於空氣中，該溶液將會被慢慢氧化而便顏色加深，導致失效。臨用時，取貯存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。

應用該固定液固定的組織，一般不要超過24h，取出組織，流水沖冼12小時以上，然後保存於75%-80%的酒精中，在切片染色前，必須用碘除去汞鹽的沉著。應用該固定液的組織，細胞核及細胞漿染色十分清晰，特別是要顯示骨骼肌的橫紋時，應用本液可獲得滿意的結果，但由於其含有醋酸，故不能用於保存細胞顆粒，紅細胞及含鐵血黃素。

（2）Flemming氏液

2%酸水溶液200ml

1%鉻酸水溶液700ml

冰醋酸100ml

該液中的奧酸對脂肪組織既有固定作用，又有染色作用，對有髓神經纖維也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色，該液不適合。應用該液固定的組織，切片不能太大過厚，一般1-2毫米厚固定時間1-3天，后經水洗，保存於80%酒精中，除上述兩液體外，還有Bouin氏液和Carnoy氏液等。冰醋酸也有許多不足之處：

1、不能作為單一的固定劑。冰醋酸在實際應用中，常被作為添加劑來使用，如許多種固定液，都加入了冰醋酸。另外，在蘇木素和伊紅染液中，也常加入了冰醋酸。

2、不能凝固蛋白質，不能保存白細胞顆粒，紅細胞及含血鐵黃素等。

3、價格較貴。

(4)重鉻酸鉀是一種固體，粉末狀，桔紅色，具有毒性，較難溶解於涼水，因此在配製時用較高溫度的水來溶解，也較易發生沉澱。它的優點是：

1、能固定脂肪及類脂物。

2、為髓鞘及嗜鉻細胞優良的媒染劑。

3、可配成多種的混合固定液

（1）Helly氏液

重鉻酸鉀25g

升汞50g

蒸餾水1000ml

甲醛50ml

臨用時加入甲醛，因其加入後於24小時后可發生沉澱而失效，因用時應特別注意。該液是白細胞顆粒的優良固定劑，因此凡為白細胞或造血器官如骨髓，脾臟及患先天性梅毒之肝臟等，可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸鈉，但據我們經驗認為，硫酸鈉在液中對組織無任何作用，故省去。

（2）Orth氏液

重鉻酸鉀20g

蒸餾水1000ml

甲醛100ml

該液固定組織較緩慢，不適合於作臨床的活檢固定液，4毫米厚的組織固定時間需36-72小時，該液對於染色質的固定好，顯示清晰，但可溶解部分紅細胞和含鐵血黃素。

重鉻酸鉀的不足之處有：

1、不能沉澱蛋白質，它必須和醋酸配成混合固定液，方能發揮作用，產生鉻酸，沉澱蛋白質。

2、具有毒性及產生高溫。在配製液體時，如清洗劑，當加入硫酸時，可產生很高的溫度，並揮發出刺鼻的氣體，應特別注意。

3、它不能長期固定組織，經它固定的組織應充分水洗后保存於80%酒精中。

（六）氯化汞又稱升汞，具有毒性。單獨用於固定組織，對組織有較大的收縮力，故很少單獨使用。它可使組織蛋白凝固，迅速硬化而形成白色硬膜，這是由於它穿透力極弱所致，因此它不適合固定較厚的組織。它常與其它的試劑配成混合固定液，彼此抵消各自存在的不足，使固定組織的效果非常好。應用升汞配成的固定液的優點有：

1、細胞核及細胞漿染色清晰。

2、對白細胞顆粒，造血器官如骨髓和脾臟等是優良的固定劑。

3、可配成許多混合固定液如：Zenker氏、Helly氏和Stieve氏等。

它的不足之處是：

1、容易產生汞鹽沉澱。經升汞配成的混合固定液固定的組織，一是不能固定太長時間，經24h后沖水，然後保存於70%或80%的酒精中，二是在洗色前，都必須用碘除去汞鹽的沉澱，以免由於汞鹽沉澱在切片上而影響對切片的觀察。

2、對組織有較大的收縮力且穿透力弱，用它不能固定過厚的組織，因穿透力弱，組織中間部分固定不好。

3、具有毒性。

組織固定的結果是組織中的蛋白質凝固，以保存組織中原有的微細結構。常規固定用的是甲醛或酒精等。但是這些固定劑從某些方面來說其穿透力不很強，因而需要較長時間的固定，另者，臨床上的冰凍切片，有的應用快速加熱法預先固定組織，造成福爾馬林的極度揮發，污染環境，影響人們的身體健康，因此尋找其它固定組織的方法就成為研究的重點。微波輻射固定組織，就是在這種情況下產生的。

微波是一種具有能量的電磁波，在其運動期間可產生瞬間熱。由於微波的快速運動，也導致了物體內部極性分子的快速運動，產生了熱量，致使組織蛋白凝固，因此，舊的叫法稱微輻射固定組織。按實際的應稱為微波輻射凝固蛋白。

1、組織固定溫度和時間的選擇。

究竟微波產生的熱量需要多高，才級使蛋白凝固的呢：Masson氏等人的研究表明，700-90℃，對沒有固定的蛋白可發生變性。Bernard經過一系列的研究后認為，肝、腎、肺的最佳固定溫度是70℃，和77℃，因為各種組織的結構不同，成分不一，電子密度不一樣，因而固定所需要的溫度也不樣。我們的實驗認為，65℃左右的溫度可適合於各種組織，條件是固定取小塊材料，時間在截取3-4min。

2、微波爐檔次的選擇

目前市售微波爐品種繁多，要選用合適的微波爐，必須根據各人的使用習慣和愛好。微波爐一般分為高火、中火及低火。使用時要進行系列實驗。例如多少ml的固定液需要多少時間達到多少溫度，用的是哪一檔次的火等。

3、微波輻射需固定液的選擇

張素娟等應用臨床活檢新鮮組織如：甲狀腺、乳腺和淋巴結，實驗小鼠的腫瘤、肝臟、腎臟、心和肺等組織，分別用10%的福爾馬林和生理鹽水經微波輻射后，通過HE、網染、AB-PAS以及幾種抗體如CEA、EMA和L26等的檢測后發現，生理鹽水的結果最好。

一提固定，以往總與福爾馬林分不開，而經微波輻射后的固定效果，竟然比前者好，這就解決了一大難題，即快速石蠟切片及冰凍切片的組織固定，以往用加熱固定的方法，其結果導致福爾馬林蒸發，使整個房間都充滿福爾馬林氣味，既污染了環境，也影響了身體的健康。雖然生理鹽水用微波輻射后對組織有良好的固定效果，但是它只能適合於少量的快速製片和某些研究，絕不可能適合於大批量的活檢。因為活檢取材，現目前組織的製作，都基本上用機器來進行，而所用的脫水盒，有銅和不銹剛的金屬物所製成，組織取材后，一個一個的盒子裝著組織，如果除去金屬來用微波固定，這是不現實的事情。另外，微波輻射，它的穿透力較弱，大量的組織塊，其中間是達不到要求的。